1、人体寄生虫人体寄生虫学实验学实验2 一、实验室规则一、实验室规则1.1.进实验室上课时必须穿白大衣，按编号入座进实验室上课时必须穿白大衣，按编号入座（编号（编号=座位号座位号=标本盒号标本盒号=显微镜号）；显微镜号）；2.2.实验前做好预习，明确实验目的和要求。实验前做好预习，明确实验目的和要求。3.3.严格遵守操作程序，爱护教学标本、仪器、试严格遵守操作程序，爱护教学标本、仪器、试剂、动物。剂、动物。34.4.实验操作时要耐心细致，自己动手，独立实验操作时要耐心细致，自己动手，独立思考。思考。5.5.上课要准时，不得无故缺席、迟到或早退。上课要准时，不得无故缺席、迟到或早退。遵守课堂纪律。遵
2、守课堂纪律。6.6.严格遵守生物安全规定。动物尸体、玻片、严格遵守生物安全规定。动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按要求放到指定地点。器皿、垃圾应按要求放到指定地点。7.7.值日生应负责搞好实验室的清洁卫生，离值日生应负责搞好实验室的清洁卫生，离开实验室前应关好水、电、门窗及签名。开实验室前应关好水、电、门窗及签名。41 1.：离开实验室之前按顺序放好玻片标离开实验室之前按顺序放好玻片标 本；放好显微镜；整理好自己的台本；放好显微镜；整理好自己的台 面和清洁实验用具。面和清洁实验用具。动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按 要求放到指定地点。要求放到指定地点。2.2.:抹实验台
3、、黑板、整理桌面等；抹实验台、黑板、整理桌面等；拖地、倒垃圾；拖地、倒垃圾；值日组长签名；值日组长签名；关好水、电、门窗。关好水、电、门窗。清洁与值日清洁与值日5二、赔偿制度二、赔偿制度 1.1.损坏公物要赔偿损坏公物要赔偿 2.2.重点为玻片标本，损坏要登记赔偿（重点为玻片标本，损坏要登记赔偿（蠕虫蠕虫标本每人一盒，每盒标本每人一盒，每盒1818张玻片标本）张玻片标本）。3.3.要求要求课前课后检查标本课前课后检查标本 课前：上课前检查或老师课前讲话后课前：上课前检查或老师课前讲话后5min5min 内检查内检查 课后：离开实验室之前课后：离开实验室之前 4.4.标本损坏赔偿：（标本损坏赔偿
4、：（206206室登记，）室登记，）61.1.搬动显微镜时要轻，对号使用，对号放回。搬动显微镜时要轻，对号使用，对号放回。2.2.插、拔电源前要检查显微镜灯泡的亮度是否插、拔电源前要检查显微镜灯泡的亮度是否已已拨至最低处，开关是否关了拨至最低处，开关是否关了。3.3.看玻片标本要注意的问题看玻片标本要注意的问题 (1)(1)成虫玻片标本：用肉眼、解剖镜、低倍镜成虫玻片标本：用肉眼、解剖镜、低倍镜 (2)(2)虫卵玻片标本：用低倍镜、高倍镜虫卵玻片标本：用低倍镜、高倍镜 虫卵玻片标本的特点及对焦方法虫卵玻片标本的特点及对焦方法 低倍低倍对焦对焦对靶对靶高倍高倍 (3)(3)原虫玻片标本：高倍镜原
5、虫玻片标本：高倍镜油镜油镜7虫卵玻片标本的虫卵玻片标本的对焦方法对焦方法低倍低倍对焦对焦对靶对靶高倍高倍显微镜故障处理1.放在边台桌面，无需放入柜内放在边台桌面，无需放入柜内 2.2.写张小纸条注明故障情况夹于玻片夹处写张小纸条注明故障情况夹于玻片夹处 3.3.可取无人使用的后备显微镜使用，用完后可取无人使用的后备显微镜使用，用完后放回原处。放回原处。9操作：操作：自己用显微镜看自己用显微镜看小组操作：小组操作：一般一般4 4人一组人一组 小班示教小班示教：在小班实验室看：在小班实验室看示教：示教：分两组，到分两组，到208208示教室和大厅看。示教室和大厅看。每组每组1212分钟，带上实验指
6、导分钟，带上实验指导 示教时间：示教时间：15:00-15:2515:00-15:25组别组别 1 2345678910座位座位号号1-45-88-1213-1617-2021-2425-2829-3233-3536-3810在每次作业首页的左上角写上在每次作业首页的左上角写上“报告日期：报告日期：20122012年年月月日日”标注图：标注图：用平行线标注各部位的名称用平行线标注各部位的名称绘图：绘图：用铅笔描绘，点、线图用铅笔描绘，点、线图 绘虫卵图要求绘虫卵图要求：1.1.外形特征外形特征,内含物结构特点内含物结构特点 2.2.卵壳用双线表示厚薄、是否均匀卵壳用双线表示厚薄、是否均匀等特征
7、等特征 3.3.标注主要结构标注主要结构 生活史线条图：生活史线条图：简答题：简答题：简明扼要，或用表格列出简明扼要，或用表格列出 报告：报告：写目的原理、方法（步骤）、写目的原理、方法（步骤）、结果、分析结果、分析111.1.掌握常见人体寄生虫的掌握常见人体寄生虫的辨认辨认，掌握具有诊，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和常见寄生虫的断价值的寄生虫形态特征和常见寄生虫的病原学病原学检查方法检查方法，了解免疫学诊断技术及，了解免疫学诊断技术及高新技术诊断方法。高新技术诊断方法。2.2.培养动手能力、分析问题和解决问题的能培养动手能力、分析问题和解决问题的能力及创新能力。力及创新能力。3.3.验证
8、理论课中所学的基本理论，对重要理验证理论课中所学的基本理论，对重要理论内容加深理解。论内容加深理解。12华支睾吸虫（华支睾吸虫（Clonorchis sinensisClonorchis sinensis）布氏姜片虫（布氏姜片虫（Fasciolopsis buskiFasciolopsis buski）13 1.1.以华支睾吸虫为代表，掌握吸虫基本形态以华支睾吸虫为代表，掌握吸虫基本形态和生活史的基本特点。和生活史的基本特点。2.2.掌握两种吸虫的虫卵形态特征和病原学诊掌握两种吸虫的虫卵形态特征和病原学诊断方法。断方法。3.3.熟悉熟悉两种吸虫的感染途径、感染方式、寄两种吸虫的感染途径、感染方
9、式、寄生部位与致病作用及防治要点。生部位与致病作用及防治要点。14 一、操作一、操作 1.1.华支睾吸虫华支睾吸虫 (成虫成虫 、虫卵虫卵)2.2.布氏姜片虫布氏姜片虫(成虫成虫 、虫卵虫卵)二、小组操作二、小组操作 1.1.检查猫肝（找华支睾吸虫成虫检查猫肝（找华支睾吸虫成虫,注意病理变化注意病理变化）2.ELISA2.ELISA法检测待测血清中的抗华支睾吸虫抗体法检测待测血清中的抗华支睾吸虫抗体三、示教三、示教：成虫液浸标本成虫液浸标本、中间宿主（、中间宿主（淡水螺淡水螺、淡水鱼）、淡水鱼）、植物媒介植物媒介、生活史各期生活史各期、病理标本病理标本四、录像：四、录像：华支睾吸虫华支睾吸虫五
10、、五、作业作业六、六、小结小结15华支睾吸虫成虫华支睾吸虫成虫注意观察：注意观察：外形外形口、腹吸盘（位置和大小比例）口、腹吸盘（位置和大小比例）生殖系统生殖系统消化系统消化系统16 华支睾吸虫卵华支睾吸虫卵大小：大小：292917m17m形状：形状：芝麻状芝麻状 （或灯泡状）（或灯泡状）颜色：颜色：黄褐色黄褐色内含物：内含物：毛蚴毛蚴其它：其它：卵盖疣状突起（小瘤）卵盖疣状突起（小瘤）小瘤小瘤17布氏姜片虫成虫布氏姜片虫成虫腹吸盘腹吸盘口吸盘口吸盘睾丸睾丸卵巢卵巢注意观察：外形注意观察：外形口、腹吸盘口、腹吸盘生殖系统生殖系统消化系统消化系统18布氏姜片虫卵布氏姜片虫卵 大小：大小：人体吸虫
11、中最大者人体吸虫中最大者 形态：形态：长椭圆形长椭圆形 颜色：颜色：淡黄色淡黄色 内含物：内含物：一个卵细胞一个卵细胞 许多卵黄细胞许多卵黄细胞 其它：其它：卵壳薄卵壳薄 卵盖不明显卵盖不明显卵盖卵盖卵细胞卵细胞卵黄细胞卵黄细胞 ELISA ELISA法检测待测血清中抗法检测待测血清中抗 华支睾吸虫抗体（小组操作）华支睾吸虫抗体（小组操作）实验原理：实验原理：特异性抗原与特异性抗体反应特异性抗原与特异性抗体反应包埋已知抗原（包埋已知抗原（GST2，基因工程重组抗原），基因工程重组抗原）抗原抗体复合物抗原抗体复合物底物的显色反应底物的显色反应加待测血清加待测血清酶标记的二抗酶标记的二抗实验目的：
12、实验目的：熟悉免疫学诊断方法和意义熟悉免疫学诊断方法和意义终止反应终止反应ELISAELISA法检测待测血清中抗法检测待测血清中抗华支睾吸虫抗体（小组操作）华支睾吸虫抗体（小组操作）操作步骤操作步骤100ul100ul100ul1.1.加样加样待测样品待测样品1或或22.温育温育封板，封板，37253725分钟分钟3.3.洗涤洗涤洗涤液洗涤液3 3次，次，200ul200ul，拍干，拍干4.4.加酶标记二抗加酶标记二抗100ul，封板，封板，3720分钟分钟5.5.洗涤洗涤洗涤液洗涤液4 4次，拍干次，拍干6.6.显色、加终止液显色、加终止液&结果判定结果判定显色液显色液A、B各加一滴各加一滴
13、,371010分分钟；加终止液钟；加终止液一滴一滴操作注意事项操作注意事项:1.1.每一步的反应液要垂直滴入反应孔每一步的反应液要垂直滴入反应孔,加样后轻轻加样后轻轻 摇匀；摇匀；2.2.每一步反应完后都要抛尽，并注意抛尽的方向每一步反应完后都要抛尽，并注意抛尽的方向 以防交叉反应；以防交叉反应；3.3.每次冲洗、抛尽后要在吸水纸上拍干。每次冲洗、抛尽后要在吸水纸上拍干。实验报告实验报告:实验目的实验目的/原理原理 实验方法（步骤）实验方法（步骤）实验结果实验结果 实验结果分析实验结果分析222324262728在鱼肉中的囊蚴在鱼肉中的囊蚴(0.138-0.15mm)(0.138-0.15mm
14、)291.1.绘虫卵图（华支睾吸虫、布氏姜片虫）绘虫卵图（华支睾吸虫、布氏姜片虫）2.2.标注成虫形态图（华支睾吸虫、布氏标注成虫形态图（华支睾吸虫、布氏姜片虫）姜片虫）3.3.绘华支睾吸虫绘华支睾吸虫生活史线条图生活史线条图4.4.写出写出ELISAELISA法检测待测血清中抗华支法检测待测血清中抗华支睾吸虫抗体的实验报告睾吸虫抗体的实验报告（实验目的（实验目的/原理、实验方法原理、实验方法/步骤、步骤、实验结果实验结果/实验结果分析）实验结果分析）作业作业30一、虫卵的鉴别及病原学诊断方法一、虫卵的鉴别及病原学诊断方法 大小、形状、颜色、内含物、卵壳、其他（卵盖）大小、形状、颜色、内含物、
15、卵壳、其他（卵盖）31 华支睾吸虫卵华支睾吸虫卵布氏姜片虫卵布氏姜片虫卵卵盖卵盖有卵盖（大）有卵盖（大）肩峰明显肩峰明显有卵盖（小）有卵盖（小）无肩峰无肩峰大小大小较小较小2735m1220m（小）（小）较大较大130140m8085m，（大），（大）形态形态低倍镜下看似芝麻低倍镜下看似芝麻高倍镜下看似灯泡高倍镜下看似灯泡（上窄下宽），（上窄下宽），底端有一小疣底端有一小疣椭圆形椭圆形颜色颜色黄褐色黄褐色淡黄色淡黄色内含物内含物毛蚴毛蚴卵内含一个卵细胞和卵内含一个卵细胞和20-40个卵黄细胞个卵黄细胞卵壳卵壳较薄较薄薄薄离开人体的载体离开人体的载体（诊断材料）（诊断材料）粪便粪便（胆汁）（胆汁
16、）粪便粪便32二、成虫的鉴别二、成虫的鉴别外形外形口、腹吸盘口、腹吸盘生殖系统生殖系统消化系统消化系统寄生部位寄生部位 3334两种成虫鉴别要点两种成虫鉴别要点华支睾吸虫成虫华支睾吸虫成虫布氏姜片虫成虫布氏姜片虫成虫吸盘吸盘（附着、运动（附着、运动器官）器官）口吸盘比腹吸盘略大，口吸盘比腹吸盘略大，腹吸盘在虫体前腹吸盘在虫体前1/5处处腹吸盘比口吸盘大腹吸盘比口吸盘大4-5倍，两吸盘距离倍，两吸盘距离很近。腹吸盘漏斗状，很近。腹吸盘漏斗状，肌肉发达。肌肉发达。生殖系统生殖系统 睾丸一对在体后睾丸一对在体后1/3处前后排列，树枝状。处前后排列，树枝状。卵巢在体中部分叶卵巢在体中部分叶，有受精囊、
17、劳氏管，有受精囊、劳氏管，无阴茎、阴茎袋。无阴茎、阴茎袋。与左相似，但睾丸分与左相似，但睾丸分支细而多，卵巢也分支细而多，卵巢也分支，无受精囊，有劳支，无受精囊，有劳氏管、阴茎袋。卵黄氏管、阴茎袋。卵黄腺发达。腺发达。消化系统消化系统肠管较直肠管较直肠管弯曲肠管弯曲体表体表无体棘无体棘有体棘有体棘体形体形狭长，葵花子形狭长，葵花子形长椭圆形，为人体最长椭圆形，为人体最大的吸虫大的吸虫寄生部位寄生部位终宿主肝胆管终宿主肝胆管终宿主小肠终宿主小肠35 三、生活史三、生活史 寄生虫完成一代的生长、发育及繁殖的整个过程。寄生虫完成一代的生长、发育及繁殖的整个过程。终宿主终宿主 保虫宿主保虫宿主宿主第一
18、中间宿主宿主第一中间宿主第二中间宿主植物媒介第二中间宿主植物媒介感染期感染期感染途径、感染方式感染途径、感染方式 定居部位致病定居部位致病 离开人体的时期诊断离开人体的时期诊断36华支睾吸虫生活史：华支睾吸虫生活史：虫卵虫卵 毛蚴毛蚴 胞蚴胞蚴 雷蚴雷蚴 尾蚴尾蚴 囊蚴囊蚴 成虫成虫 虫卵虫卵粪便粪便 水水 淡水螺淡水螺（纹沼螺等）（纹沼螺等）淡水鱼虾淡水鱼虾 人人 粪便粪便 哺乳动物肝胆管哺乳动物肝胆管 第一中间宿主第二中间宿主终宿主（第一中间宿主第二中间宿主终宿主（1M）布氏姜片吸虫生活史：布氏姜片吸虫生活史：虫卵毛蚴胞蚴母雷蚴子雷蚴尾蚴囊蚴虫卵毛蚴胞蚴母雷蚴子雷蚴尾蚴囊蚴 成虫成虫 虫卵
19、虫卵粪便水淡水螺（扁卷螺）粪便水淡水螺（扁卷螺）水生植物水生植物 人人 粪便粪便 猪、野猪小肠猪、野猪小肠 中间宿主中间宿主 植物媒介终宿主植物媒介终宿主(1-3M)（感染期）（感染期）（感染期）（感染期）37两种吸虫生活史鉴别要点两种吸虫生活史鉴别要点 华支睾吸虫华支睾吸虫布氏姜片虫布氏姜片虫终宿主保虫终宿主保虫宿主宿主人猪、狗、猫、豹、人猪、狗、猫、豹、虎等哺乳动物虎等哺乳动物人猪、野猪人猪、野猪第一中间宿主第一中间宿主纹沼螺、长角涵螺、赤纹沼螺、长角涵螺、赤豆螺豆螺扁卷螺扁卷螺第二中间宿主第二中间宿主植物媒介植物媒介淡水鱼（鲤科鱼）、淡淡水鱼（鲤科鱼）、淡水虾水虾水生植物，菱角、荸水生植
20、物，菱角、荸荠（马蹄）荠（马蹄）感染期感染期囊蚴囊蚴囊蚴囊蚴感染途径感染途径经口（被动）经口（被动）经口（被动）经口（被动）定居部位定居部位人或哺乳动物的胆管人或哺乳动物的胆管（肝胆管）内（肝胆管）内人、家猪、野猪等小人、家猪、野猪等小肠内肠内离开人体的时期离开人体的时期（诊断取材）（诊断取材）虫卵（粪便）虫卵（粪便）虫卵（粪便）虫卵（粪便）致病致病肝，胆管炎、肝肿大、肝，胆管炎、肝肿大、肝硬变、胆结石、胆管肝硬变、胆结石、胆管癌癌消化道症状，机械损消化道症状，机械损伤，坏死脱落，炎症、伤，坏死脱落，炎症、出血、水肿、溃疡出血、水肿、溃疡 38四、四、ELISAELISA法检测华支睾吸虫感染的
21、结果分析法检测华支睾吸虫感染的结果分析 应结合病史，临床症状应结合病史，临床症状等综合判断等综合判断。血清中无特异性抗体血清中无特异性抗体未感染华支睾吸虫未感染华支睾吸虫感染早期，特异性抗体未出现感染早期，特异性抗体未出现病人已治愈，无病人已治愈，无抗体存在抗体存在假阴性假阴性血清中有特异性抗体血清中有特异性抗体已感染华支睾吸虫已感染华支睾吸虫曾感染经治疗未治愈曾感染经治疗未治愈经治疗病人已治愈，抗体仍存经治疗病人已治愈，抗体仍存在在假阳性假阳性阳性阳性阴性阴性39五、复习名词慨念五、复习名词慨念 1.寄生虫寄生虫（parasiteparasite）2.宿主宿主（hosthost）3.中间宿主
22、中间宿主（intermediate hostintermediate host）4.终宿主终宿主（definitive hostdefinitive host）5.保虫宿主（储蓄宿主）保虫宿主（储蓄宿主）（reservoir hostreservoir host）6.感染期感染期（infective stageinfective stage）7.生活史生活史（life cyclelife cycle）8.媒介植物媒介植物(vector)9.人兽共患寄生虫病人兽共患寄生虫病（parasitic zoonosesparasitic zoonoses）10.雌雄同体雌雄同体（hermaphroditehermaphrodite）
