1、实验内容实验内容一、讨论：一、讨论：（一）免疫学应用（预防、诊断、治疗）（一）免疫学应用（预防、诊断、治疗）（二）固有免疫的组成、功能（二）固有免疫的组成、功能二、示教二、示教（一）常见各类疫苗（一）常见各类疫苗（二）小吞噬、大吞噬（二）小吞噬、大吞噬（三）血脑屏障（三）血脑屏障三、操作三、操作（一）人中性粒细胞噬菌实验（一）人中性粒细胞噬菌实验（二）鼠尾静脉注射及血脑屏障（二）鼠尾静脉注射及血脑屏障（一）（一）免疫学应用免疫学应用免疫预防：如免疫预防：如各类疫苗各类疫苗免疫诊断：如已知抗体鉴别未知细菌免疫诊断：如已知抗体鉴别未知细菌免疫治疗：破伤风抗毒素免疫治疗：破伤风抗毒素1.1.固有免疫
2、（固有免疫（innate immunityinnate immunity）非特异性免疫非特异性免疫/先天性免疫先天性免疫/天然免疫天然免疫概念：机体在长期种系进化过程中形成的天然防御功能，机体的第一道防线。概念：机体在长期种系进化过程中形成的天然防御功能，机体的第一道防线。该系统与生俱来，发生非特异性抗感染效应该系统与生俱来，发生非特异性抗感染效应 并清除体内损伤、衰老或畸变的细胞并清除体内损伤、衰老或畸变的细胞 参与适应性免疫应答参与适应性免疫应答INNATE IMMUNE SYSTEM（二）（二）固有免疫的组成、功能、检查方法固有免疫的组成、功能、检查方法固有免疫固有免疫组织屏障组织屏障体
3、表屏障：物理、化学、生物屏障体表屏障：物理、化学、生物屏障内部屏障：血脑屏障、血胎屏障。内部屏障：血脑屏障、血胎屏障。中性粒细胞、单核中性粒细胞、单核/巨噬细胞、巨噬细胞、DC、NK、NKT、T、B-1B细细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸性粒细胞等。胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸性粒细胞等。固有免疫分子：补体、细胞因子、抗菌肽、固有免疫分子：补体、细胞因子、抗菌肽、溶菌酶、乙型溶素等。溶菌酶、乙型溶素等。固有免疫细胞：固有免疫细胞：2.2.固有免疫系统的组成固有免疫系统的组成INNATE IMMUNE SYSTEMn物理屏障：物理屏障：皮肤黏膜、肠蠕动、呼吸道上皮肤黏膜、肠蠕动、呼吸道上皮纤毛
4、运动、尿液冲洗。皮纤毛运动、尿液冲洗。n化学屏障：化学屏障：汗腺分泌的乳酸、皮脂腺分泌汗腺分泌的乳酸、皮脂腺分泌的不饱和脂肪酸、胃酸、呼吸道和消化黏的不饱和脂肪酸、胃酸、呼吸道和消化黏液中的溶菌酶、抗菌肽、补体等。液中的溶菌酶、抗菌肽、补体等。n生物学屏障：生物学屏障：皮肤黏膜寄生的正常菌群，皮肤黏膜寄生的正常菌群，如大肠杆菌可分泌细菌素抑制厌氧菌和革如大肠杆菌可分泌细菌素抑制厌氧菌和革兰氏阳性菌定居和繁殖兰氏阳性菌定居和繁殖。体表屏障体表屏障内部屏障：内部屏障：血脑脊液屏障血脑脊液屏障软脑膜、脉络丛软脑膜、脉络丛INNATE IMMUNE SYSTEM血胎屏障：血胎屏障：绒毛膜滋养层细胞绒毛
5、膜滋养层细胞+基蜕膜基蜕膜INNATE IMMUNE SYSTEM固有免疫分子固有免疫分子补体细胞因子急性期蛋白抗微生物肽溶菌酶乙型溶素固有免疫细胞固有免疫细胞吞噬细胞吞噬细胞(phagocyte)中性粒细胞中性粒细胞(neutrophil)单核细胞和巨噬细胞单核细胞和巨噬细胞树突状细胞树突状细胞特殊淋巴细胞特殊淋巴细胞自然杀伤细胞自然杀伤细胞(natural killer,NK)NK T细胞细胞B-1 B细胞细胞其它固有免疫细胞其它固有免疫细胞肥大细胞肥大细胞(mast cell)嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞(basophil)嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞(eosinophil)中性粒细胞（多形核白
6、细胞）中性粒细胞（多形核白细胞）Bone marrowHSCNeutrophils in blood circulationtissuesinflammation抗感染抗感染抗肿瘤抗肿瘤维持自身耐受维持自身耐受参与特异性免疫：参与特异性免疫：参与特异性免疫的启动参与特异性免疫的启动 影响特异性免疫的强度影响特异性免疫的强度 影响特异性免疫的类型影响特异性免疫的类型3.3.固有免疫的功能固有免疫的功能二、示教二、示教（一）常见各类疫苗（一）常见各类疫苗（二）小吞噬、大吞噬（二）小吞噬、大吞噬（三）血脑屏障（三）血脑屏障中性粒细胞中性粒细胞葡萄球菌葡萄球菌鸡红细胞鸡红细胞巨噬细胞巨噬细胞血脑屏障血
7、脑屏障三、操作三、操作（一）人中性粒细胞噬菌实验（一）人中性粒细胞噬菌实验（二）鼠尾静脉注射及血脑屏障（见示教（二）鼠尾静脉注射及血脑屏障（见示教1.人中性粒细胞噬菌实验人中性粒细胞噬菌实验1.1.取肝素抗凝剂取肝素抗凝剂0.02ml0.02ml（2525单位单位/ml/ml）入凹玻片。）入凹玻片。2.2.无名指采血无名指采血0.02 ml 0.02 ml 至有肝素的凹玻片中，混匀。至有肝素的凹玻片中，混匀。3.3.加入一滴葡萄球菌菌液，混匀。加入一滴葡萄球菌菌液，混匀。4.4.凹玻片置铺有纱布的有盖容器内（此容器先放凹玻片置铺有纱布的有盖容器内（此容器先放3737温箱中预温）温箱中预温）37
8、37温箱孵育温箱孵育2020分钟。分钟。5.5.制作血涂片，室温干燥。制作血涂片，室温干燥。6.6.均匀滴加均匀滴加3 3滴吉姆萨染液滴吉姆萨染液A A，染色，染色1 1分钟。分钟。7.7.均匀滴加均匀滴加6 6滴吉姆萨染液滴吉姆萨染液B B，染色，染色3 3分钟。分钟。8.8.洗涤后室温干燥。洗涤后室温干燥。9.9.镜下观察，计算吞噬百分率镜下观察，计算吞噬百分率 。实实验验步步骤骤血推片方法血推片方法血涂片质量评价血涂片质量评价头体尾 分明厚 薄 均 匀长 度 适 中1.1.均匀滴加均匀滴加3 3滴吉姆萨染液滴吉姆萨染液A A，染色，染色1 1分钟。分钟。2.2.均匀滴加均匀滴加6 6滴吉姆萨染液滴吉姆萨染液B B，染色，染色3 3分钟。分钟。染色方法染色方法血涂片观察区域选择血涂片观察区域选择中性粒细胞中性粒细胞葡萄球菌葡萄球菌鸡红细胞鸡红细胞巨噬细胞巨噬细胞
