1、DNS法测还原糖含量法测还原糖含量3,5-二硝基水杨酸法目目的的 掌握还原糖和总糖的测定原掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原理，学习用比色法测定还原糖的方法糖的方法原理原理 1.还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖。糖和多糖不一定是还原糖。2.在在NaOH和丙三醇存在下，和丙三醇存在下，DNS与还原糖共热后被与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的碱性溶液中此化合物还原生成氨基化合物，在过量的碱性溶液中此化合物呈
2、桔红色，呈桔红色，在一定范围内，还原糖的量与桔红色在一定范围内，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，利用分光光度计，在在550nm波长下测定吸光度，查对标准曲线并计算，波长下测定吸光度，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。便可求出样品中还原糖和总糖的含量。3.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。反应化学方程式反应化学方程式桔红色桔红色黄色黄色实验材料、主要仪器和试剂 1、试剂（1）1mg/mL葡萄糖
3、标准液葡萄糖标准液准确称取干燥恒重的葡萄糖准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL（2）3,5-二硝基水杨酸（二硝基水杨酸（DNS）试剂）试剂将将6.3g DNS和和262mL 2Mol/L NaOH溶液，溶液，加到加到500mL含有含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，酒石酸钾钠的热水溶液中，再加再加5g结晶酚和结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。，贮于棕色瓶中备用。（3）碘-碘化钾溶液（4）6mol/l NaOH（5）0.1%酚酞
4、指示剂（6）6mol/l HCl溶液2、材料 淀粉淀粉3、器材、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电子分光光度计，天平，水浴锅，电子万用炉，试管若干万用炉，试管若干实验步骤实验步骤 一、制作葡萄糖标曲线一、制作葡萄糖标曲线 取取10支试管，按下表加入试剂支试管，按下表加入试剂试剂试剂0123456789葡萄糖标准液/ml00.20.40.50.60.70.81.01.21.4蒸馏水/ml2.01.81.61.51.41.31.21.00.80.6DNS/ml1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.5葡萄糖含量/mg00.20.40.50.60.70.81.01.21.4混合均匀
5、混合均匀 沸水中加热沸水中加热5min取出取出 冷水冷却至室温冷水冷却至室温 各管加入各管加入21.5ml蒸馏水蒸馏水测定吸光度并绘制标准曲线测定吸光度并绘制标准曲线（550nm波长处）波长处）二、样品中还原糖提取二、样品中还原糖提取 准确称取准确称取0.65g面粉，面粉，放在放在100ml烧杯中，先烧杯中，先 以少量蒸馏水调成以少量蒸馏水调成 糊状，然后加入糊状，然后加入15ml 蒸馏水，混匀，于蒸馏水，混匀，于50恒温保温恒温保温20min，时，时搅拌，使还原糖浸出，过滤，将滤液全部收搅拌，使还原糖浸出，过滤，将滤液全部收集在集在25ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，容量瓶中，用蒸馏水定容
6、至刻度，即为还原糖提取液。即为还原糖提取液。锥形瓶（锥形瓶（0.5g面粉面粉+10ml盐酸盐酸+蒸馏水蒸馏水15ml）加热）加热30min 检验水解是否完成检验水解是否完成（I-KI溶液）溶液）冷却至室温后冷却至室温后 中和并定容到中和并定容到50ml 过滤取过滤取10ml于于 100ml容量瓶容量瓶 取滤液又定容至刻度取滤液又定容至刻度 （即为稀释（即为稀释50倍）倍）三三.总糖提取总糖提取 四、样品中含糖量的测定四、样品中含糖量的测定试剂试剂空白空白还原糖还原糖总糖总糖样品溶液/ml01.01.0蒸馏水/ml2.01.01.0水杨酸/ml1.51.51.5将各管溶液混合均将各管溶液混合均匀
7、后在沸水中加热匀后在沸水中加热5min，取出后立即，取出后立即用冷水冷却至室温，用冷水冷却至室温，在向各管加入在向各管加入21.5ml蒸馏水，摇蒸馏水，摇匀匀在波长为在波长为550nm处处测定吸光度，并比测定吸光度，并比对标准曲线得出糖对标准曲线得出糖的含量的含量结果处理结果处理 按下列公式计算样品中还原糖与总糖的按下列公式计算样品中还原糖与总糖的百分含量：百分含量：还原糖还原糖%=(m*100)/(M*1000)总糖总糖%=（m*稀释倍数稀释倍数*0.9*100）/(M*1000)式中：式中：m根据标准曲线所得糖含量，根据标准曲线所得糖含量，mg M所称样品质量，所称样品质量，g祝实验成功！祝实验成功！The end 谢谢！谢谢！
