1、前前 言言 皮库的意义皮库的意义我院皮库简介：我院皮库简介：自自19731973年创建皮库以来，分别运用年创建皮库以来，分别运用了了44、-20-20和和-80-80低温冰箱皮肤低温冰箱皮肤保存法以及液氮储皮方法保存法以及液氮储皮方法19871987年开始速冻玻璃化储皮方法储年开始速冻玻璃化储皮方法储存的实验研究和临床应用存的实验研究和临床应用 我院皮库简介：我院皮库简介：每年异体尸体皮采集及储存每年异体尸体皮采集及储存4040余具余具深低温速冻异体皮保存方法的改进使保存深低温速冻异体皮保存方法的改进使保存皮片活力稳定保持在皮片活力稳定保持在70%70%以上，皮片移植以上，皮片移植成活率达成活
2、率达95%95%以上以上成为亚洲最大的皮库之一，成为亚洲最大的皮库之一，已储存了已储存了30003000余具活力良好的尸体皮，供全国余具活力良好的尸体皮，供全国3030个省市个省市300300多家医院使用多家医院使用每年创利润数百万元，经济效益显著每年创利润数百万元，经济效益显著我院皮库简介：我院皮库简介：科研方面曾获国家自然科学基金，首科研方面曾获国家自然科学基金，首都医学科技发展基金，八五、九五、都医学科技发展基金，八五、九五、十五、十一五全军科研基金十五、十一五全军科研基金2020余项；余项；出版相关专著出版相关专著1010余部，发表学术论著余部，发表学术论著100100余篇；培养进修生
3、、研究生数百余篇；培养进修生、研究生数百人人获国家科技进步二等奖获国家科技进步二等奖1 1项，军队科项，军队科技进步二等奖技进步二等奖6 6项项 皮肤的结构皮肤的结构 皮肤的功能皮肤的功能 皮肤低温储存的重要意义皮肤低温储存的重要意义 皮肤低温储存的理论依据皮肤低温储存的理论依据 皮肤的低温损伤机制皮肤的低温损伤机制 皮肤的结构 皮肤从外到内，由表皮肤从外到内，由表皮、真皮和皮下组织皮、真皮和皮下组织三部分组成三部分组成皮肤附件作为特化的皮肤附件作为特化的表皮结构也属于皮肤表皮结构也属于皮肤的重要结构，其中包的重要结构，其中包括汗腺、皮脂腺、毛括汗腺、皮脂腺、毛发、指甲发、指甲皮肤的结构 表皮
4、表皮 从上到下又从上到下又分为分为 角质层、透明层、角质层、透明层、颗粒层、棘层、基底颗粒层、棘层、基底层层 真皮真皮 分为乳头层、分为乳头层、网状层。主要有结缔网状层。主要有结缔组织构成，包括胶原组织构成，包括胶原纤维、弹力纤维、网纤维、弹力纤维、网状纤维。此外皮肤附状纤维。此外皮肤附件，血管、淋巴管、件，血管、淋巴管、神经末梢神经末梢 保护作用保护作用 感觉作用感觉作用 体温调节作用体温调节作用 分泌和排泄作用分泌和排泄作用 吸收作用吸收作用水分水分 电解质电解质皮肤缺失皮肤缺失热量热量 蛋白质蛋白质病原体病原体 贫血贫血 低蛋白血症低蛋白血症 创面脓毒症创面脓毒症MODS死亡死亡体液的丢
5、失体液的丢失 有害介质释放有害介质释放侵袭性感染的滋生地侵袭性感染的滋生地机体超高代谢机体超高代谢多器官功能衰竭及并发症多器官功能衰竭及并发症 当大面积烧伤或皮肤缺损超过体表面当大面积烧伤或皮肤缺损超过体表面积的积的30%30%时，自体供皮受限时，自体供皮受限 临床实践证明：具有活力的异体皮仍临床实践证明：具有活力的异体皮仍是目前最为理想的创面覆盖物是目前最为理想的创面覆盖物 异体皮来源时间受限异体皮来源时间受限自体皮自体皮 异种皮异种皮 以猪皮多见。取材方便，但移植后排斥以猪皮多见。取材方便，但移植后排斥 时间短，有时难以达到覆盖创面的目的时间短，有时难以达到覆盖创面的目的同种异体皮同种异体
6、皮 主要来源于成人新鲜尸体，其次为新主要来源于成人新鲜尸体，其次为新 鲜死婴皮鲜死婴皮 项目项目 4 -20 -80 -196 4 -20 -80 -196 费用费用 少少 少少 较贵较贵 贵贵（补液氮）（补液氮）保存时间保存时间(d)3-7 45 12(d)3-7 45 12个月个月 理论无限期理论无限期 最佳活力最佳活力(%)30-80 50-60 50-60 (%)30-80 50-60 50-60 7070“两因素”学说 玻璃化储皮方法的发展玻璃化储皮方法的发展 抗冻液的使用抗冻液的使用 玻璃化是一个物理学的概念，玻璃化是一个物理学的概念，是指当水或溶液在极快降温到或低是指当水或溶液在
7、极快降温到或低于于-100-100-110-110的温度范围时，形的温度范围时，形成一种具有高黏度的界于液态和固成一种具有高黏度的界于液态和固态之间、非晶体态的、杂乱无章的、态之间、非晶体态的、杂乱无章的、透明的玻璃状态透明的玻璃状态 玻璃化储存的特点：玻璃化储存的特点：玻璃化储存生物组织和细胞，玻璃化储存生物组织和细胞，由于降温速率很快，水分没有足够由于降温速率很快，水分没有足够的时间来形成冰晶，即进入均匀的的时间来形成冰晶，即进入均匀的玻璃状态。这种玻璃态的物理性能玻璃状态。这种玻璃态的物理性能与晶体态不同，是一种既可以避免与晶体态不同，是一种既可以避免或减轻冷冻过程组织的损伤，又是或减轻
8、冷冻过程组织的损伤，又是同时可长期保存组织的良好方法同时可长期保存组织的良好方法两种方法的比较两种方法的比较慢降温速率冰晶形态慢降温速率冰晶形态玻璃化速冻时冰晶的形态玻璃化速冻时冰晶的形态皮肤玻璃化储存的途径皮肤玻璃化储存的途径以水为主要成分的生物组织以水为主要成分的生物组织,实现完全玻璃化需要极高的降温实现完全玻璃化需要极高的降温速率。目前只能采用各种方法实速率。目前只能采用各种方法实现部分玻璃化，抑制冰晶形成和现部分玻璃化，抑制冰晶形成和长大，避免细胞严重损伤长大，避免细胞严重损伤皮肤玻璃化储存的途径皮肤玻璃化储存的途径冷源问题冷源问题 目前国内各家目前国内各家皮库主要采用液氮皮库主要采用
9、液氮作为冷源，温度可作为冷源，温度可达达-196-196，皮片直，皮片直接放入液氮后，其接放入液氮后，其最快的降温速率可最快的降温速率可达达2160/min2160/min皮肤玻璃化储存的途径皮肤玻璃化储存的途径储存的皮肤往往因储存的皮肤往往因具有一定的厚度和具有一定的厚度和面积带来冷源温度面积带来冷源温度传导困难和储存不传导困难和储存不便便 ，因此可设计成，因此可设计成皮卷形式皮卷形式皮肤玻璃化储存的途径皮肤玻璃化储存的途径降温速率降温速率 冷却的铜板预冷冷却的铜板预冷皮肤后即将其直接皮肤后即将其直接浸入液氮浸入液氮 深低温储存组织离不开抗冻液的保护，否深低温储存组织离不开抗冻液的保护，否
10、则皮肤将受到严重的损伤则皮肤将受到严重的损伤 抗冻剂的作用机制有以下两点：抗冻剂的作用机制有以下两点：有效抑制过冷水的不规则形态及促有效抑制过冷水的不规则形态及促进快速结晶，促进玻璃化行程进快速结晶，促进玻璃化行程缓冲因冰形成而造成的渗透压升高，缓冲因冰形成而造成的渗透压升高，减轻溶质损害减轻溶质损害目前较为成熟抗冻液配方目前较为成熟抗冻液配方 H H液液（20%20%二甲基亚砜、二甲基亚砜、6%6%丙丙二醇二醇），以此作为玻璃化储存皮），以此作为玻璃化储存皮肤的抗冻液肤的抗冻液 一般一般10000cm10000cm2 2面积的皮肤约需面积的皮肤约需抗冻液抗冻液3000ml3000ml玻璃化储
11、皮及使用步骤玻璃化储皮及使用步骤总结：总结：玻璃化储存皮肤的步骤玻璃化储存皮肤的步骤异体皮的采集异体皮的采集消毒消毒皮肤的修整皮肤的修整抗冻液的处理抗冻液的处理包装包装快速降温快速降温液氮容器的管理液氮容器的管理 细胞膜的影响细胞膜的影响 降低细胞的流动性降低细胞的流动性 细胞骨架受损细胞骨架受损 表皮细胞黏附率降低表皮细胞黏附率降低 基底膜的破坏基底膜的破坏 皮肤氧耗量测定法皮肤氧耗量测定法 琥珀酸钠脱氢酶测定法琥珀酸钠脱氢酶测定法 四氮唑盐四氮唑盐WST-1WST-1法法 SYTO/EBSYTO/EB双重染色法双重染色法 原理：原理：有活力的组织均有代谢耗氧有活力的组织均有代谢耗氧 恒温营
12、养液内微电极（铂、银电极）与有活恒温营养液内微电极（铂、银电极）与有活力的皮肤接触，表面氧分压下降，通过放大力的皮肤接触，表面氧分压下降，通过放大器测下降程度，推算出皮肤的活力，操作可器测下降程度，推算出皮肤的活力，操作可在在1h1h内完成内完成l测定原理琥珀酸钠+红四氮唑 延胡索酸+甲月 替琥珀酸钠+红四氮唑 原理:利用活组织或细胞中的线粒体琥珀酸四氮 唑反应体系(RS),作用在亚细胞呼吸链反 应中的还原型辅酶(NADH)、NAD+(辅 酶)脱氢反应与细胞组织中的呼吸链 EC(电子偶联反应体系)结合,将H 结合到 WST-1 的甲氮唑苯环上,打开其四氮唑苯 环而显色琥珀酸四氮唑琥珀酸四氮唑反
13、应体系反应体系(RS)WST-1显色反应显色反应 为一种敏感、快速的皮肤活力检测法为一种敏感、快速的皮肤活力检测法,采用采用新型穿透性核酸染色剂新型穿透性核酸染色剂SYTOSYTO和和EBEB 方 法：方 法：皮 片 经皮 片 经 P B SP B S 洗 涤 后 加 入洗 涤 后 加 入 S Y T O S Y T O 50ul,3750ul,37避光孵育避光孵育3030，PBSPBS洗涤加入洗涤加入50ulEB,50ulEB,水浴避光孵育水浴避光孵育3030 后后PBSPBS洗涤。通过洗涤。通过488/520nm488/520nm激发，在荧光显微镜下观察激发，在荧光显微镜下观察 通过对氧耗
14、量及琥珀酸脱氢酶通过对氧耗量及琥珀酸脱氢酶活力的测定发现玻璃化储存的皮肤活力的测定发现玻璃化储存的皮肤活力较慢冻法提高了将近活力较慢冻法提高了将近20%20%该法可以永久保存皮肤，储存后冷冻皮片的平均活力指标可达到新鲜皮片的70%，较以往的慢速冷冻法提高活力近20%采用该法保存的皮肤临床具有质地柔软、植皮后转红快、成活率高（95%左右）、存活期长等优点开放性创面、深度烧伤创面和切痂创面的暂时性覆盖用于邮票、网状或自体微粒皮的覆盖移植，保证下方自体微粒皮成活用于自体皮源紧张的烧伤后期整形重建手术，作为自体微粒皮的支架用于暂不适合自体皮的创面覆盖以改善创基情况 大张异体皮嵌植小块自体皮大张异体皮嵌
15、植小块自体皮 大张异体皮自体微粒皮移植大张异体皮自体微粒皮移植目前临床应用较多的是第二种方法 第一步第一步 复 温 第二步第二步 微粒皮的制备 第三步第三步 漂 皮创 面 处 理 前 切 削 痂 后 创 面大张异体皮覆盖创面 植皮面积与微粒皮比例植皮面积与微粒皮比例 自体微粒皮与异体皮的比例为自体微粒皮与异体皮的比例为1:101:101:151:15较好较好.自自 体皮源极度缺乏时甚至可达体皮源极度缺乏时甚至可达1:201:20 微粒皮正反面问题微粒皮正反面问题 微粒皮均匀分散微粒皮均匀分散创面创面术中削痂后术中削痂后覆盖异体皮覆盖异体皮术后术后4w4w异体皮排斥异体皮排斥术后术后45d45d
16、创面基本愈合创面基本愈合 皮肤细胞外基质（纤维连接蛋白、层粘连皮肤细胞外基质（纤维连接蛋白、层粘连蛋白等）、骨架蛋白（微丝、微管、中间蛋白等）、骨架蛋白（微丝、微管、中间丝）以及细胞间连接桥粒结构可能是低温丝）以及细胞间连接桥粒结构可能是低温损伤的关键位点损伤的关键位点 新型抗冻剂新型抗冻剂 海藻糖的发现，可进一步优海藻糖的发现，可进一步优化低温抗冻液配方化低温抗冻液配方细胞微环境略图细胞微环境略图黏附连接黏附连接缝隙连接缝隙连接紧密连接紧密连接桥粒桥粒海藻糖分子结构示意图FNFN免疫组化染色结果免疫组化染色结果 新鲜皮肤新鲜皮肤FN免疫组化染色免疫组化染色 360-196储存皮肤储存皮肤FN
17、免疫组化染色免疫组化染色 360-80储存皮肤储存皮肤FN免疫组化染色免疫组化染色 3604储存皮肤储存皮肤FN免疫组化染色免疫组化染色 360 LNLN免疫组化染色结果免疫组化染色结果 新鲜皮肤新鲜皮肤LN免疫组化染色免疫组化染色 360-196储存皮肤储存皮肤LN免疫组化染色免疫组化染色 3604储存皮肤储存皮肤LN免疫组化染色免疫组化染色 360-80储存皮肤储存皮肤LN免疫组化染色免疫组化染色 360表表2 2 低温储存对皮肤表皮低温储存对皮肤表皮FNFN和和LNLN含量的影响含量的影响（平均积分光密度，（平均积分光密度，X XSDSD，n=10n=10）标本标本组别组别FNLN新鲜皮
18、肤新鲜皮肤144.143.6 156.540.7-196组组121.338.4 127.837.3-80组组68.917.9*85.916.4*-20组组31.48.7*54.89.3*4组组22.84.6*22.47.6*与新鲜皮片组相比，P0.01P0.01E-cadherin免疫组化染色结果免疫组化染色结果 新鲜皮肤新鲜皮肤E-cadherin免疫组化染色免疫组化染色 3604储存皮肤储存皮肤E-cadherin免疫组化染色免疫组化染色 360-80储存储存E-cadherin免疫组化染色免疫组化染色 360-196储存皮肤储存皮肤E-cadherin免疫组化染色免疫组化染色360-ca
19、tenin-catenin免疫组化染色结果免疫组化染色结果 新鲜皮肤新鲜皮肤-catenin免疫组化染色免疫组化染色 360-196储存皮肤储存皮肤-catenin免疫组化染色免疫组化染色 360-80储存皮肤储存皮肤-catenin免疫组化染色免疫组化染色 360 4储存皮肤储存皮肤-catenin免疫组化染色免疫组化染色 360 表表3 3 低温储存对皮肤表皮低温储存对皮肤表皮E-cadherinE-cadherin和和-catenin-catenin含量的影响含量的影响 （平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=10n=10）*与新鲜皮片组相比，与新鲜皮片组相比，P0.01P
20、0.01标本标本组别组别E-cadherin-catenin新鲜皮肤76.618.5100.223.9-196组61.823.487.817.3-80组 23.911.4*65.918.4*-20组24.48.7*34.89.3*4组18.85.6*22.47.6*新鲜皮肤表皮层细胞结构清晰，排列正常，胞核圆形或椭圆形，196皮肤结构基本正常，有少量胞质水肿，淡染，胞核缩小。(HE(HE400)400)低温冷冻对皮肤组织低温冷冻对皮肤组织-肌动蛋白表达的影响肌动蛋白表达的影响新鲜组新鲜组196组组 新鲜皮肤组织-actin主要分布于细胞质，颜色均匀分布,阳性反应强，196组阳性反应减弱，但结构
21、清晰，胞质染色基本呈红色。(SP(SP200)200)新鲜组新鲜组196组组低温冷冻对皮肤组织低温冷冻对皮肤组织-肌动蛋白表达的影响肌动蛋白表达的影响透射电镜下观察低温冷冻对皮肤组织微丝的影响透射电镜下观察低温冷冻对皮肤组织微丝的影响 新鲜组较粗,束状广泛均匀分布。-80组大片束状结构解聚，空隙增大，见断裂和分叉；4组分布不均，细丝样物质明显减少，结构松散，粗细不等。-196组分布较广泛，呈束状(20K，电镜）新鲜组新鲜组-80 4-196 新鲜皮肤颜色均匀，阳性反应强，T/D组近似，但有少量细胞质水肿，胞核缩小。D/P组呈淡黄色，DMEM组呈阴性反应。（SP200，光镜）T/DD/PDMEM
22、新鲜组新鲜组海藻糖对低温保存皮肤后海藻糖对低温保存皮肤后-肌动蛋白的实验研究肌动蛋白的实验研究透射电镜下观察透射电镜下观察CPACPA对低温保存皮肤后微丝的影响对低温保存皮肤后微丝的影响 新鲜组束状广泛分布于细胞质中，T/D组少量断裂和分叉，束状密集分布。D/K组呈簇状不均匀分布，空隙增大，解聚断裂；DMEM组大部分已解聚断裂，无明显束状结构。（25K，电镜）新鲜新鲜T/DD/KDMEM皮肤皮肤11整合素及相关蛋白整合素及相关蛋白免疫组化染色结果免疫组化染色结果 基质蛋白-整合素-踝蛋白-骨架蛋白关系模型整合素是一类位于细胞表面黏附分子，属跨膜糖蛋白胞外区与基质蛋白相连，胞内区与细胞骨架相连，
23、介导细胞内外双向信息传递1整合素位于皮肤基底细胞表面，维系表皮、真皮之间的连接，对维持细胞膜完整性及功能起着重要的作用新鲜组新鲜组196组组-20组组4组组低温冷冻对皮肤组织低温冷冻对皮肤组织11整合素表达的影响整合素表达的影响新鲜正常皮肤组织1integrin分布基底细胞细胞膜或胞浆低温冷冻对皮肤层粘连蛋白低温冷冻对皮肤层粘连蛋白laminin表达的影响表达的影响新鲜正常皮肤组织laminin表达在真皮和表皮连接处新鲜组新鲜组196组组20组组4组组低温冷冻对皮肤层踝蛋白低温冷冻对皮肤层踝蛋白talin表达的影响表达的影响新鲜正常皮肤组织talin分布于基底细胞分布于基底细胞新鲜组新鲜组19
24、6组组20组组4组组低温冷冻对皮肤低温冷冻对皮肤-辅肌动蛋白表达的影响辅肌动蛋白表达的影响各温度组皮肤组织-actinin表达表达新鲜组新鲜组196196组组44组组8080组组低温储存对皮肤表皮低温储存对皮肤表皮1integrin、laminin、talin含量的影响含量的影响 （平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=10n=10）与新鲜组皮肤组织比较，与新鲜组皮肤组织比较，P0.05,*P0.01标本标本组别组别1integrinlaminin talin新鲜皮肤0.2560.016 0.2650.016 0.2160.012-196组0.2450.0210.2470.025
25、 0.1940.013*-80组0.2320.0120.2380.020 0.1790.009*-20组0.1650.015*0.1760.013*0.1630.010*4组0.1350.011*0.1470.015*0.1520.017*新鲜组新鲜组196组组4组组新鲜皮肤基底膜完整、密度正常，连续性好，半桥粒结构清晰可见，分布均匀；-196组中基底膜结构基本与新鲜组相似；4组基底膜变薄，出现断裂，结构模糊不清，半桥粒明显减少海藻糖对低温保存皮肤海藻糖对低温保存皮肤11整合素的实验研究整合素的实验研究T/D-7d组组D/P-7d组组T/D-14d组组D/P-14d组组14天时两组染色程度均降
26、低，天时两组染色程度均降低，D/P 组染色强度降低较明显组染色强度降低较明显两种低温保护剂对皮肤组织两种低温保护剂对皮肤组织1integrin表达变化影响表达变化影响 （平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=6n=6）与新鲜组皮肤比较，与新鲜组皮肤比较，*P0.05,P0.05,*P0.01P0.01，T/DT/D、D/PD/P组间比较，组间比较，P0.05,P0.05,P0.01P0.01 组别组别 7 天天 14天天新鲜组T/D组 D/P组 0.2960.019 0.2960.019 0.2870.015 0.2790.010 0.2840.014 0.2490.018*桥粒
27、透射电镜下观察透射电镜下观察CPACPA对低温保存皮肤基底膜的影响对低温保存皮肤基底膜的影响T/D-7d组组D/P-7d组组T/D-14d组组D/P-14d组组2周时间，周时间，D/P组基底膜部分区域结构稍有松散，模糊不清，半桥粒数量组基底膜部分区域结构稍有松散，模糊不清，半桥粒数量有所下降，有所下降，T/D组基底膜较完整，厚度大致均匀，半桥粒未见明显渐少，组基底膜较完整，厚度大致均匀，半桥粒未见明显渐少，桥粒芯糖蛋白桥粒芯糖蛋白1 1、2 2免疫组化染色结果免疫组化染色结果 锚着在桥粒斑上的细胞锚着在桥粒斑上的细胞骨架细丝骨架细丝胞质桥粒斑蛋白胞质桥粒斑蛋白细胞间空隙细胞间空隙桥粒芯蛋白桥粒
28、芯蛋白相邻细胞膜相邻细胞膜 新鲜皮肤组织桥粒芯糖蛋白1主要分布于颗粒细胞层，20组，4组阳性反应明显减弱。(SP(SP400)400)低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1 1表达的影响表达的影响-20-20新鲜组新鲜组-196-19644 新鲜皮肤组织桥粒芯糖蛋白2主要分布于基底细胞层，20组，4组阳性反应明显减弱。(SP(SP400)400)低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2 2表达的影响表达的影响新鲜组新鲜组-196-19644-20-20表表3 3 低温储存对皮肤表皮低温储存对皮肤表皮Dsg1Dsg1和和Dsg2Dsg2含量的影响含量
29、的影响 （平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=10n=10）*与新鲜皮片组相比，与新鲜皮片组相比，P0.05P0.05标本标本组别组别Dsg1Dsg1Dsg2Dsg2新鲜皮肤0.2870.0080.2540.007-196组0.2830.0050.2470.006-80组0.2720.007*0.2390.007*-20组0.2350.018*0.1640.008*4组0.2030.012*0.1150.021*l 新鲜皮肤桥粒结构清晰、新鲜皮肤桥粒结构清晰、完整、数量较多完整、数量较多 l-196-196组中桥粒结构、数组中桥粒结构、数 量基本与新鲜组相似量基本与新鲜组相似l
30、 44组桥粒出现断裂，结构模组桥粒出现断裂，结构模 糊不清，数量明显减少糊不清，数量明显减少新鲜组-196-19644桥粒桥粒桥粒透射电镜下观察低温冷冻对皮肤组织桥粒的影响透射电镜下观察低温冷冻对皮肤组织桥粒的影响海藻糖对低温保存皮肤桥粒芯糖蛋白海藻糖对低温保存皮肤桥粒芯糖蛋白1 1的实验研究的实验研究D/P-21d组组T/D-21d组组T/D-7d组组D/P-7d组组表表3 3两种低温保护剂对皮肤组织两种低温保护剂对皮肤组织Dsg1Dsg1表达变化影响表达变化影响（平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=6n=6）与新鲜组皮肤比较，与新鲜组皮肤比较，*P0.05,P0.05,*P
31、0.01P0.01，T/DT/D、D/PD/P组间比较，组间比较，P0.05,P0.05,P0.01P0.01 组别组别 7 天天 21天天新鲜组T/D组 D/P组 0.2870.008 0.2870.008 0.2850.006 0.2840.0040.2820.004 0.2750.005*T/D-7d组组D/P-7d组组桥粒桥粒透射电镜下观察透射电镜下观察CPACPA对低温保存皮肤桥粒的影响对低温保存皮肤桥粒的影响桥粒D/P-21d组组T/D-21d组组桥粒表皮替代物表皮替代物 表皮细胞膜片的培养表皮细胞膜片的培养真皮替代物真皮替代物 脱细胞异体真皮脱细胞异体真皮 、人、人 工聚合材料工
32、聚合材料复合皮复合皮 自体表皮自体表皮+真皮替代物真皮替代物 冷源问题冷源问题 目前国内各家皮库目前国内各家皮库主要采用液氮作为冷主要采用液氮作为冷源，温度可达源，温度可达-196-196，皮片直接放入液氮后，皮片直接放入液氮后，其最快的降温速率可其最快的降温速率可达达2160/min2160/min 储存的皮肤往往因储存的皮肤往往因具有一定的厚度和具有一定的厚度和面积带来冷源温度面积带来冷源温度传导困难和储存不传导困难和储存不便便 ，因此可设计成，因此可设计成皮卷形式皮卷形式 深低温储存组织离不开抗冻液的保护，否深低温储存组织离不开抗冻液的保护，否 则皮肤将受到严重的损伤则皮肤将受到严重的损
33、伤 抗冻剂的作用机制有以下两点：抗冻剂的作用机制有以下两点：有效抑制过冷水的不规则形态及促有效抑制过冷水的不规则形态及促进快速结晶，促进玻璃化行程进快速结晶，促进玻璃化行程缓冲因冰形成而造成的渗透压升高，缓冲因冰形成而造成的渗透压升高，减轻溶质损害减轻溶质损害大张异体皮覆盖创面 创面创面基质蛋白-整合素-踝蛋白-骨架蛋白关系模型低温储存对皮肤表皮低温储存对皮肤表皮1integrin、laminin、talin含量的影响含量的影响 （平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=10n=10）与新鲜组皮肤组织比较，与新鲜组皮肤组织比较，P0.05,*P0.01标本标本组别组别1integr
34、inlaminin talin新鲜皮肤0.2560.016 0.2650.016 0.2160.012-196组0.2450.0210.2470.025 0.1940.013*-80组0.2320.0120.2380.020 0.1790.009*-20组0.1650.015*0.1760.013*0.1630.010*4组0.1350.011*0.1470.015*0.1520.017*两种低温保护剂对皮肤组织两种低温保护剂对皮肤组织1integrin表达变化影响表达变化影响 （平均积分光密度（平均积分光密度,X XSDSD，n=6n=6）与新鲜组皮肤比较，与新鲜组皮肤比较，*P0.05,P0.05,*P0.01P0.01，T/DT/D、D/PD/P组间比较，组间比较，P0.05,P0.05,P0.01P0.01 组别组别 7 天天 14天天新鲜组T/D组 D/P组 0.2960.019 0.2960.019 0.2870.015 0.2790.010 0.2840.014 0.2490.018*
