1、HDL和和LDL胆固醇检测方法学进展和比较胆固醇检测方法学进展和比较 班级：班级：10检二检二 姓名：姓名：陈艳慧陈艳慧 学号：学号：6302410068HDL HDL(high density lipoprotein)，运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出，动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子。俗称“血管清道夫”。LDL LDL的功能是转运胆固醇到外围组织，并调节这些部血浆脂蛋白位的胆固醇从头合成。血浆中的胆固醇是疏水性物质必须与血液中HDL,LDL和PL等一起组成脂
2、蛋白HDL-C的检验方法 超速离心法超速离心法 电泳法电泳法 化学沉淀法化学沉淀法 直接测定法直接测定法超速离心法超速离心法 美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推荐。该法分三步进行：(1)超速离心(40000r/min，18.5小时)除去密度(d)1.006 kg/L富含甘油三酯的脂蛋白(CM、VLDL)。(2)下层悬浮液用肝素-MnCl2法(Hep-Mn2+法)离心沉淀(1 500g，30分钟)，以除去富含apoB的脂蛋白LDL、Lp(a)。(3)测定上清液中chol含量，方法用CDC参考方法(ALBK法)。电泳法电泳法 原理原理 在一定电场
3、条件下，由于各种脂蛋白的分子大小及其在缓冲溶液中所带电荷数的不同，故在支持介质上迁移率亦不同。较小的HDL分子向阳极有较高的迁移率，可将HDL与VLDL、LDL区分开。电泳法电泳法 Helena公司已开发可供REP快速全自动电泳仪使用的HDL-C检测试剂盒，其原理是：血清(1 l)经琼脂糖凝胶电泳(400V，15分钟)后，将chol基质试剂均匀铺在凝胶表面，孵育一段时间(10分钟)后用10%冰醋酸固定，然后将凝胶烤干。570 nm波长下自动扫描即可确定HDL-C百分含量。同时将血清TC值输入，则可求得血清HDL-C值。化学沉淀法化学沉淀法 常用的沉淀剂为多阴离子，如磷钨酸(PTA)、DS、肝素
4、(Hep)或非离子多聚体如聚乙二醇(PEG)与某些两价阳离子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+)合用能使除HDL外含apoB的脂蛋白都沉淀。HDL中chol多用酶法(CHOD-PAP)测定。美国Reference Diagnostics公司推出新一代磁化DS沉淀法检测试剂盒。其原理是单一沉淀剂与血清标本15混合在一标本杯中，然后将标本杯放进磁盘，非HDL脂蛋白颗粒因被磁化，能很快被磁盘吸至杯底(沉淀)，而与HDL颗粒分离(上清)。此过程简单迅速，不需离心，无HDL共沉淀及含apoB颗粒沉淀不完全现象。结果准确，不受高TG干扰，比传统DS50-Mg2+法测定时间大大缩短，亦有一定应用价值。直接测定
5、法直接测定法l 清除法（反应促进剂-过氧化物酶清除剂清除剂和过氧化物酶清除法）l PEG修饰酶法l 选择性抑制法l 免疫分离法（PEG/抗体包裹法和抗体免疫分离法）PEG/PEG/抗体包裹法抗体包裹法 akuyama等用PEG和抗apoB、抗apoC抗体包裹非HDL的脂蛋白，然后用酶法直接测定HDL-C的自动化分析方法。日本International Reagents公司已研制成功可供商品化自动检测的试剂盒。测定过程包括4种试剂：低浓度的PEG4000，包裹CM、VLDL、LDL。特异性抗apoB、apoC抗体，使CM、VLDL和LDL复合物凝聚。酶试剂，用于检测上述复合物以外脂蛋白胆固醇(即
6、HDL-C)。盐酸胍试剂，终止酶促反应和溶解含apoB脂蛋白复合物，以免其干扰吸光度测定选择性抑制法选择性抑制法（PPD法）应用两种不同的表面活性剂及多阴离子，根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL-C。第一反应中，加入多阴离子和分散型表面活性剂(亦称反应抑制剂)，LDL、VLDL和CM先在多阴离子下聚集，由于反应抑制剂与LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和力，故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形成遮蔽圈。同时在HDL表面也吸附有少量反应抑制剂，但由于亲和力较弱，其结合是可逆的 第二反应中，与胆固醇酶试剂一起加入具有对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力的可溶性表面活性剂(亦称反应促进剂)
7、，由于反应促进剂对HDL可溶性的强特异性作用可置换其表面吸附的少量反应抑制剂，从而与酶试剂反应，达到无需沉淀分离直接测定HDL-C的目的。超速离心超速离心-高效液相色谱测定血清高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇：高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇：一种候选参考方法一种候选参考方法检测方法学比较检测方法学比较 方法方法 优点优点 缺点缺点超速离心超速离心法法结果精确，一般适用于研究方面 由于需超速离心机，操作复杂且严格，所需标本量大(5 ml血浆)，离心时间长，一般实验室难以开展，不适于大规模标本比较研究。电泳法电泳法此法与PTA-Mg2+法有较好相关性，可用于高TG标本检测，也
8、常用于评价各种化学沉淀法沉淀是否完全等，目前多用于临床研究。化学沉淀化学沉淀法法此类方法操作简单，不需昂贵设备且费用较低，适用于普通实验室。被NCEP推荐为常规方法化学沉淀法多受高TG影响，含apoB颗粒因不能完全沉淀而导致HDL-C假性增高直接测定直接测定法法不需沉淀，可用于仪器自动化测定，为临床及时、快速、准确测定HDL-C及标准化工作提供了条件。超速离心超速离心-高效液相色谱高效液相色谱 a)用超速用超速离心法分离脂蛋白，所分离的脂蛋白与应离心法分离脂蛋白，所分离的脂蛋白与应用最广泛的脂蛋白定义一致，用最广泛的脂蛋白定义一致，b)HDL不受不受Lp(a)污染污染 c)分离过程影响因素少分
9、离过程影响因素少d)所需样所需样品量小（品量小（0.1 ml），且一次可分析），且一次可分析50个样个样品品e)用稀释器代替手工容量操作用稀释器代替手工容量操作,操作简操作简便，精密度良好便，精密度良好,可以测定脂蛋白类可以测定脂蛋白类LDL-C的检测方法免疫分离法免疫分离法比浊法比浊法选择性测定法选择性测定法免疫分离法免疫分离法 该法是通过使用包被有高亲和力的羊抗人 apoAI和 apoE多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳，用一种特制的具有离心过滤装置的双层试管，当一定量的血清和已包被有抗体的聚苯乙烯胶乳悬液被加入到双层离心试管中，使 apoAI和 apoE抗体与血清中的 cM、vLDL、lDL和 h
10、DL发生作用，然后1500g离心5min,免疫沉淀的 cM、vLDL、iDL和 hDL被过滤装置截留在内层小试管内，含有 lDL的滤液被外层试管回收，通过酶法测定滤液中胆固醇的浓度，即可得出 lDL-C的含量比浊法比浊法 其测定原理是血清中 lDL抗原与试剂中羊抗人 lDL抗体作用，形成抗原抗体复合物，并产生浊度，该浊度的高低在过量抗体存在时，与抗原（lDL）的含量成正比，同时，由于反应液中含有稳定剂可使非 ag-Ab复合物（如脂类、大分子蛋白多聚物等）消浊，而消除非特异性干扰，用已知 lDL-C值的参考血清的浊度计算出待测标本中 lDL-C的浓度。选择性测定法选择性测定法 日本第一化学药品株
11、试会社(Daiichi)推出 lDL-C直接测定试剂盒，该试剂盒为液体双试剂盒，适用于各类自动生化分析仪，在无需标本预处理的情况下，实现 lDL-C自动化分析。该法原理14是试剂1中的表面活性剂可使样品中的 hDL、vLDL和 cM颗粒解离，胆固醇分子被释放出来，立即同胆固醇酶试剂反应，产生的 h2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色，此时 lDL颗粒仍是完整的，加入试剂2（含另一种表面活性剂和偶联剂），它可使 lDL颗粒解离释放出胆固醇，在胆固醇酶试剂的作用下，产生 h2O2，参与 trinder反应而显色,色泽的深浅与 lDL-C的含量成正比，通过与相应的标准品（lDL-C的校正物）比较，计算出样品中 lDL-C的含量。方法方法 优点优点 缺点缺点免疫分离法免疫分离法免疫分离法尽管称为直接测定法，但仍需将血清用连接有抗体的聚苯乙烯胶乳免疫分离预处理过程，且本试剂价格昂贵比浊法比浊法 免疫比浊法，简便、快速、成本低，适用于自动化生化分析仪。选择性测定选择性测定法法选择性测定法简便快速、微量准确，可适用于具有双试剂加样功能的各类自动化分析仪，是比较理想的 lDL-C自动生化分析方法目前尚无国产试剂，由于进口试剂价格昂贵，限制了本法在国内的广泛应用。Thank you
