1、病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包含体光镜检查包含体 分离培养分离培养一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似，但，但应注意：应注意：1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温保存低温保存，尽快送检尽快送检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定 1.1.
2、细胞培养细胞培养 组织组织 组织块组织块 分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞 剪碎剪碎 培养基培养基蛋白酶蛋白酶 卵黄囊（yolk sac）培养基接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒（50 tissue culture应用：人群免疫情况的调查光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），羊膜腔（amniotic cavity）（三）病毒数量与感染性测定多种病毒鉴定CPE(-)风疹病毒(+)(1)原代和次代细胞培养病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)细胞培养（cell culture）特点：对多种病毒敏感重组载体疫苗（recombinant c
3、arrier vaccine）痘苗病毒、人类疱疹病毒核酸扩增技术目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒中和试验（neutralizing test）(2)(2)二倍体细胞培养二倍体细胞培养特点特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒不带病毒，无致瘤潜能无致瘤潜能 可传可传5050代左右代左右(3)(3)传代细胞培养传代细胞培养3.3.动物接种动物接种CPE(-)风疹病毒(+)核苷类药物在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。IFN-、中草药培养基形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；(2)免疫标记法（FIA
4、、EIA、RIA）中草药特点：特异性高，抗体维持时间长埃可病毒(+)(1)原代和次代细胞培养特点：特异性高，抗体维持时间长采取标本分离病毒为时已晚细胞培养（cell culture）繁殖能力高，传代时间长(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)第二节 病毒感染的特异性预防不带异种蛋白(人源性)补体结合试验 （complement fixation test）分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定宿主细胞激酶 NA三磷酸进行血清流行病学
5、调查等优点：结果易观察，可建立动物模型可传50代左右风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()病毒囊膜表面血凝素(HA)病毒囊膜表面血凝素(HA)形成包涵体(inclusion body)光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），鸡胚接种（egg inoculation）第二节 病毒感染的特异性预防病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞尿囊腔（allantoic cavity）形成包涵体(inclusion body)呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒（血凝抑制试验）电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普
6、通光学显微镜检查 包涵体包涵体痘苗病毒、人类疱疹病毒核酶（ribozyme）病毒酶类：如逆转录酶埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()进行血清流行病学调查等形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体原则基本与细菌相似，但应注意：核酸扩增技术可携带潜伏病毒多种病毒鉴定特点：对多种病毒敏感病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），灭活疫苗（inactivated vaccine）特点：对多种病毒敏感(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)血凝试验：病毒总量（活病毒死
7、病毒）形成包涵体(inclusion body)体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂 中草药中草药 基因治疗剂基因治疗剂 治疗性疫苗治疗性疫苗 干扰干扰RNA 核苷类药物作用机制 无环鸟苷无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶病毒胸苷激酶 NA一磷酸宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3-OH基）病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止核酸链延伸被迫终止思考题思考题1.
8、分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？2.常用组织培养法有几种？各有何应用？3.病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？4.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？5.预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？6.诊断病毒的核酸技术有哪些？组织组织 组织块组织块 分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞 剪碎剪碎 培养基培养基蛋白酶蛋白酶 痘苗病毒、人类疱疹病毒病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？宿主细胞激酶 NA三磷酸（三）病毒数量与感染性测定(1)原代和次代细胞培养细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12临床诊断少用(3)干扰现象（interference）组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞
9、应用：近期感染指标。一、人工主动免疫常用生物制品埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）infectious dose,TCID50）采用孵化914天的鸡胚生长能力有限,获取成本高重组疫苗（recombinant vaccine）(1)原代和次代细胞培养早期抗体检测（IgM）2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定infectious dose,TCID50）可携带潜伏病毒宿主细胞激酶 NA三磷酸可传50代左右电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限早期抗体检测（IgM）在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？形成包涵体(inclusion body)病毒酶类：如逆转录酶用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体重组疫苗（recombinant vaccine）一、人工主动免疫常用生物制品鸡胚接种（egg inoculation）分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？淋巴因子激活的杀伤细胞特点：对多种病毒敏感原代细胞（primary cell）抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定
