1、红细胞血型系统红细胞血型系统临检与血检教研室临检与血检教研室一、输血学定义 是围绕将献血者血液输给患者进行救治这一中心，研究、开发、和应用一切可采用的科学技术手段及管理措施，提高血液和血液制品（包括血液代用品和人造血液）的质量和安全性，从而保证临床输血的安全性和有效性。输血发展史两个里程碑1628年William Harvey发现了循环系统发表了著作心与血的运动被誉为生理学最重要的著作。1900年Karl Landsteiner描述了第一个红细胞血型系统：ABO血型系统，启动了现代输血学的发展，开启了免疫血液学的大门。Karl Landsteiner因1900年发现了A、B、O、AB四种血型中
2、的前三种，而于1930年获得诺贝尔医学及生理学奖。现代输血已经成为一门独立的临床医学学科输血学与相关的生物学、基础医学、临床医学学科，如生物化学、低温生物学、生理学、病理生理学、免疫学、遗传学、分子生物学、医学生物工程学、病毒学、医用高分子学和卫生管理学，相互交叉和渗透。免疫血液学基础 一、抗原一、抗原 免疫原性免疫原性：可以诱发特异性免疫应答和应答产物，即产生特异性抗体和免疫效应细胞。抗原性抗原性：能和抗体等免疫应答产物反应。（一）完全抗原（一）完全抗原 即同时显示抗原性和免疫原性蛋白质（二）半抗原（二）半抗原 只显示抗原性而无免疫原性-多糖、类脂（三）抗原决定簇（表位抗原决定簇（表位）抗原
3、上一种特异性的呈立体排列的化学基团，每一个抗原有多个表位 血型抗原血型抗原 是红细胞上的化学构型，依生化性质分为：1、决定簇是糖分子的血型抗原 ABH，Lweis。，也称组织血型抗原.不仅分布红细胞表面，而且存在于大部分上皮细胞，初级感觉神经元，各种体液和分泌物中。出生后逐渐发育成熟。2、决定簇为多肽的有：MNS、Rh、Kidd等血型系统其化学组成为蛋白质、糖蛋白、脂蛋白仅分布在红细胞及其他血细胞膜上大多数血型抗原出生时已经成熟，但抗原性较弱 二、抗体 抗体是体内免疫系统所产生的蛋白质，为对某种抗原起反应所形成，且能与该抗原或关系相近的抗原发生特异性反应 血型抗体是免疫球蛋白（Ig）的一部分。
4、IgGIgG与与IgMIgM抗体抗体1、IgM抗体是高效的凝集素，可有效地使补体活化，能引发补体介导的红细胞溶解。在盐水介质中能够直接凝集红细胞的抗体，为完全抗体。A型、B型的ABO抗体以IgM为主。2、IgG抗体是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋白，有结合补体的能力。不完全抗体多数为IgG类，在盐水介质中能使红细胞致敏，需通过抗人球蛋白或其他介质使红细胞凝集。O型人抗-A,B以IgG类抗体为主。红细胞血型他们活着是为了什么The relationship between ABO group The relationship between ABO group and personality an
5、d personality O有一种表现自己的性格,行动受感情左右,喜欢政治,好胜心强,对立斗争有戒心与喜欢交友并存,能看清形势,很注意别人对自己的好恶.有信念和理想.率直,具有现时与罗曼蒂克双重性.言行带有夸张性，讲话带有教育人和教训人的语气A内心想法不愿为人所知.对别人情绪及环境变化有敏锐反应,但对别人的想法缺乏客观理解.思想行动慎重而有规律,个性内向,没个性谨小慎微固步自封,遵从常理,重视家庭,富于计划性.擅长以说服和说明的调子讲话B开放型对人缺乏戒心,情绪善变,活动力强,不原受约束,行动奔放光明正大反复无常,富于灵活性,欢热闹场合.固执己见,善于批评,先下结论后作说明AB善于待人接物,
6、很注意合情合理,期望在社会上施展能力,注意别人对自己的感情,厌恶表里不一.个性中庸,富有实践精神计划性强,不喜欢指手划脚容易疲劳,表情不丰富,正式场合讲话呆板,回避感情激烈的讲话或事件血 型（blood group）1、血型的概念 狭义只指存在于红细胞上的特异性同种抗原。广义应包括血液各成分的抗原在个体间出现的差异 已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30种，其中最重要的两种为“ABO血型系统”和“Rh血型系统”。血型是血液系统的一种遗传多态性，血型系统基因是独立遗传的，是产生抗原抗体的遗传性状。2、红细胞血型的现状 国际输血协会（ISBTThe International Society
7、 of Blood Transfusion）的最新报告，红细胞血型抗原为：血型系统30个、近300个抗原血型集合 5个、11个抗原血型系列两个，低频抗原组700系列33个抗原，高频抗原组901系列12个抗原基本上已克隆了所有的血型基因一、ABO血型系统ABO血型系统（一）、概述 1、1900年被发现，在输血工作中是最重要的血型抗原系统。2、根据红细胞膜上是否有A、B抗原可将人分为四种血型A、B、O、AB.3、Landsteiner分布规律:A型血清含有抗B,B型血清含有抗A,O型血清含有抗A抗B,AB型血清不含抗A抗B.妊娠56周胎儿RBC可测出ABO抗原新生儿ABO血型抗原性约为成人的20%
8、20岁左右ABO血型的抗原性最强人ABO血型的抗原终身不变ABO血型抗原的分布：RBC、WBC、Plt 其他组织细胞 体液及分泌液（二）ABO血型的遗传基础 1、ABO抗原的遗传 先后有两种学说，即“两对独立的等位基因”和“三复等位基因”，现一般接受后者 ABO血型系统的产生由ABO、Hh、Sese基因控制 ABO遗传座位在第9号染色体的长臂3区4带 基因Hh和Sese紧密相连在第9对染色体上。A基因和B基因对于O基因是显性基因。ABO血型的遗传（三）ABO血型的鉴定血液中持续存在ABO抗体（除新生儿）正定型（查抗原）用已知的标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和B抗原反定型（查抗
9、体）用已知的标准A型红细胞和标准B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A抗体和抗B抗体（四）、ABO血型表型的频率从北向西南的方向，B基因频率逐渐下降而O基因频率逐渐升高云、贵、川和长江中下游A基因频率升高两广、福建、台湾O型基因频率较其他地区高在不同人种，不同民族间ABO血型分布也表现出差异。在整个汉族中：B型血占20%，主要是有匈奴、突厥、鲜卑、女真、契丹、西夏融入于汉族的血液中造成的A型血占40%，主要分布在南方，是由楚苗南蛮等古老民族融入华夏集团演变而来的AB是B型血人南下跟A型血人繁杂而成的。O型血是一种非常古老的最早血型，主要分布在中原地区，血缘来源是黄帝集团和东夷集团。（五）、ABO
10、血型抗原的生化合成ABO基因产物是糖基转移酶，转移酶将糖基移到红细胞膜前体物质上，形成抗原。ABH抗原的前身物质：主要为糖蛋白的糖脂（红细胞寡糖连）Sese基因ABH抗原不仅存在于血细胞上，其他组织细胞上也可发现。血型物质以唾液中有无分为分泌型和非分泌型分泌型和非分泌型受控于Sese基因SESE为分泌型80%Sese，称非分泌型（六）、ABO血型系统的抗原亚型 亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异A A亚型亚型 A亚型最主要的血清学特征是红细胞抗原数减少，红细胞与试剂血清表现为弱凝集或不凝集，与抗-H反应较强，某些人血清中有抗-A1A抗原的主要两种亚血型 A1和A2
11、(构成A型血的99.99%）A2或A2B均不超过A型和AB型的1%A2抗原数比A1少，糖基转移酶的活性也较低 A1和A2表型鉴别简表血型抗原抗-A抗-A1A1A、A1+A2A+0ABO血型系统的抗原亚型 A3、B3 Ax、Bx Am、Bm Ael、Bel Aw、BwABO血型系统的抗原变异型孟买型 基因型为hh 表型的个体红细胞膜上缺乏A、B、H抗原，血清中含有抗A、抗B、抗H抗体类孟买型 表型的个体红细胞膜上缺乏H抗原，H基因受到抑制基因的影响，产生的少量H抗原在A或B基因的作用下转化为A或B抗原.ABO血型系统的抗原变异型CisAB型母亲是AB型，父亲是O型，两个子女均为AB型？A与B基因
12、均在同侧染色体上遗传 大多的顺式AB型的血清有弱的抗B抗体（六）ABO血型系统与临床1、输血：选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相合才能输血2、母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病3、器官移植时，受者与供者也必须ABO血型相符才能移植。二、二、RhRh血型系统血型系统应该怎么做？车祸伤者大出血，急需输血查为RH阴性血医院及血库无RH阴性血若不输血患者生命垂危1.1.在紧急输血时，在紧急输血时，RhRh阴性的病人可以输给同样、阴性的病人可以输给同样、RhRh阳性血液做为应阳性血液做为应急之用。急之用。2.2.若若RhRh阴性受血者沒有相同血型的血可用，型阴性受血者沒有相同血型的血可用，型Rh
13、Rh阴性的红血球是可以的选择。阴性的红血球是可以的选择。3.Rh3.Rh阳性的血浆只要与受血者的红血球合血试验相合，可任意给阳性的血浆只要与受血者的红血球合血试验相合，可任意给RhRh阴性的病人阴性的病人输用。输用。4.Rh4.Rh抗原亦不存在血小板表面，输血小板時可取用含红血球在四毫升以下的制抗原亦不存在血小板表面，输血小板時可取用含红血球在四毫升以下的制品输给品输给RhRh阴性的病人阴性的病人5.5.和医生讨论，是否可延后再输血。和医生讨论，是否可延后再输血。6.6.每个病人在输血前都会做抗体筛检试验，有抗抗体出现者，最好是输每个病人在输血前都会做抗体筛检试验，有抗抗体出现者，最好是输Rh
14、Rh阴阴性的血球，但在紧急情況下，亦可输性的血球，但在紧急情況下，亦可输RhRh阳性血。阳性血。在必要、紧急的时机，变通的输血考量，是对病人最有利的处理方式；如在必要、紧急的时机，变通的输血考量，是对病人最有利的处理方式；如果医护人员或家属硬是坚持要给病人输完全相同血型的果医护人员或家属硬是坚持要给病人输完全相同血型的RhRh阴性的血液，可能阴性的血液，可能反而延误了病情，导致严重的后果。反而延误了病情，导致严重的后果。输血治疗知情同意书说明有关输血治疗中可能出现的风险患者本人，患者家属签字Rh是恒河猴（Rhesus Macacus）外文名称的头两个字母科学家发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存
15、在Rh血型的抗原物质，故而命名。猕猴适应性强，容易驯养繁殖，生理上与人类较接近，因此是生物学、心理学、医学等多种学科研究工作中比较理想的试验动物。恒河猴实验 证明了爱存在三个变量：触摸、运动、玩耍。1940年KarlLandsteiner和亚历山大所罗门维纳发现了Rh因子，这项发现拯救了很多从母亲那里得到不匹配的Rh因子胎儿的生命。卡尔兰德斯坦纳(KarlLandsteiner)的生日每年的6月14日定为“世界献血者日”RhRh血型系统血型系统（一）一）RhRh血型系统概述血型系统概述1、Rh血型系统是最复杂的遗传多态性血型系统之一2、Rh血型系统内目前发现有50种抗原，D抗原最重要，临床常根
16、据其有无分为Rh阳性或阴性。其次为E，C，c，e 3、大约85%的高加索人（白种人）或99.6%的中国人为Rh阳性4、Rh血型系统有重要的临床意义RhRh血型系统血型系统（二）二）RhRh血型系统的遗传与命名血型系统的遗传与命名 有两种传统理论,三种命名法RhRh血型系统的遗传与命名血型系统的遗传与命名1 1、Fisher-RaceFisher-Race（CDECDE命名法）命名法）RhRh血型有血型有1 1号染色体断臂上三个紧密相连号染色体断臂上三个紧密相连的基因位点的基因位点 每个位点有一对等位基因每个位点有一对等位基因.(.(D-d,C-c,E-e),D-d,C-c,E-e),三个基因是
17、以一个复合体的形式遗传三个基因是以一个复合体的形式遗传.如如Cde/cDE,Cde/cDE,有有8 8种基因组合。种基因组合。符合大多临床现象，现在仍然使用符合大多临床现象，现在仍然使用RhRh血型系统的遗传与命名血型系统的遗传与命名2、Wiener（Rh-Hr）命名法 Rh基因在染色体上只有一个基因位点 与Fisher-race不同,Wiener命名法把Rh血型视为一个复合抗原 认为Rh基因产生的凝集原，包括一系列因子，每一个因子有一种抗体去识别。命名相对简单RhRh血型系统的遗传与命名血型系统的遗传与命名3、数字命名法 以抗原发现先后对抗原编号,主要用于计数机录入。三）三）RhRh血型系统
18、的表型及基因型血型系统的表型及基因型1、Rh血型系统的表型Rh血型系统的表型种类与能获得的抗血清有关，根据获得抗血清的多少确定表现型种类,五种抗血清（抗D、抗E、抗C、抗e、抗c）RhRh血型系统的表型及基因型血型系统的表型及基因型2、Rh血型系统的基因型基因型Rh血型系统的抗原表达被认为是受控于两个基因 RhDRhD和和RhCERhCE 为两个紧密连锁的基因构成，分别编码D抗原以及CE抗原没有相应的“d”基因，因此没有“d”抗原和“d”抗体（四）RhRh血型抗原与抗体血型抗原与抗体1.Rh血型抗原：Rh血型的抗原性可能仅次于ABO血型系统 Rh血型抗原中D抗原的抗原性最强,依次为E、C、c、
19、e.红细胞上正常D抗原数 1万到3.3万 弱D D 抗原数 200-1万 增强D D抗原数 7.5-20万Rh血型抗原2 2、D D抗原的分类抗原的分类 正常的正常的D D抗原抗原 弱弱D D型（型（D Du u型型；weak D):weak D):与正常的D抗原无质差别,但数量很少。弱D红细胞与IgM类抗-D试剂反应呈阴性，抗球蛋白方法检测为阳性氨基酸改变位于细胞膜内或是跨膜区 不完全不完全D D型（型（Partial DPartial D ）:D抗原弱表达，并且血清中含有抗-D抗体的Rh阳性者。基因表达不完全的基因基础主要是D基因和CE基因形成的杂交基因和D基因部分缺失。氨基酸改变位于细胞
20、膜外 Rh血型抗原不完全不完全 Du型（型（Partial Du 型）型）抗原数量少，质也不同于正常D抗原 增强增强D D （-D-D-型）型）CE基因沉默，不表达其产物3 3、RhRh血型抗体血型抗体 多数为IgG抗体 除抗D外,抗E最为常见,次为抗c,抗E多为IgG,偶有IgM。抗e较少见 有些Rh抗体常在一起发生 通常抗E和抗c较多见,但抗c不易检出，故平常含有抗E的人受血时,应考虑抗c输入CCDee型人的血液 五）五）D D抗原和临床抗原和临床 1.RhD(-)孕妇产生HND HDN HDN 的发病示意图的发病示意图D抗原和临床2、D不完全型的相关问题常规检测常规检测D D抗原时，如果
21、盐水法为阴性，应进一步使用间接抗球蛋白试验检测抗原时，如果盐水法为阴性，应进一步使用间接抗球蛋白试验检测弱弱D D作为献血者为阳性作为献血者为阳性弱弱D D作为受血者为视为作为受血者为视为D D阴性阴性,只能接受D阴性血液 D不完全型的孕妇有机会产生HNDRh血型抗原检测（六）、Rh(D)血型鉴定的常用方法单克隆抗体IgM类，可在盐水介质，室温或37环境中凝集IgG采用间接抗球蛋白试验玻片法（单克隆试剂IgM+IgG)试管法（单克隆试剂IgM+IgG)酶介质法（IgG试剂)微柱凝胶法临床意义 1.1.新生儿溶血病新生儿溶血病Rh抗体引起HDN比ABO溶血严重：发育程度，补体 2.2.溶血性输血
22、反应溶血性输血反应 临床输血意义仅次于临床输血意义仅次于ABOABO血型血型 2/32/3产生抗体产生抗体三、红细胞血型血清学红细胞血型血清学检测技术检测技术免疫血清学技术的基石血型抗原与抗免疫血清学技术的基石血型抗原与抗体体一、血型抗原的发育一、血型抗原的发育 二、红细胞血型抗体分类二、红细胞血型抗体分类 规则抗体规则抗体 指指ABOABO血型系统有规律产生的抗血型系统有规律产生的抗A A和抗和抗B B，符合，符合LandsteinerLandsteiner规则，是反定型的依据规则，是反定型的依据 。不规则抗体不规则抗体 是指抗是指抗A A、抗、抗B B以外的抗体，这些抗体除少数可以以外的抗
23、体，这些抗体除少数可以天然产生外，主要是由输血或妊娠使机体暴露于天然产生外，主要是由输血或妊娠使机体暴露于外来抗原免疫所致外来抗原免疫所致。完全抗体完全抗体 在盐水介质中与相应的红细胞血型抗原发生肉眼可见的凝集反应的抗体在盐水介质中与相应的红细胞血型抗原发生肉眼可见的凝集反应的抗体称为完全抗体。称为完全抗体。IgMIgM抗体绝大部分是完全抗体抗体绝大部分是完全抗体 不完全抗体不完全抗体 大部分大部分IgGIgG抗体与具有相应抗原的红细胞在盐水介质中能够特异性结合，抗体与具有相应抗原的红细胞在盐水介质中能够特异性结合，但不发生肉眼可见的凝集反应，该类抗体被称为不完全抗体。很多但不发生肉眼可见的凝
24、集反应，该类抗体被称为不完全抗体。很多IgGIgG类抗体类抗体是不完全抗体，但不是所有是不完全抗体，但不是所有IgGIgG抗体都是不完全抗体，如抗体都是不完全抗体，如O O型人血清中的型人血清中的IgGIgG抗体以及单克隆抗体以及单克隆IgGIgG类的血型抗体也能在盐水介质中出现肉眼可见的凝集反应。类的血型抗体也能在盐水介质中出现肉眼可见的凝集反应。按抗体与抗原反应的最适温度，分按抗体与抗原反应的最适温度，分为冷型抗体（为冷型抗体（cold antibodycold antibody）和）和温型抗体温型抗体 （warm antibodywarm antibody）血型抗体的产生血型抗体的产生出
25、生时，正常的抗出生时，正常的抗 A A和抗和抗 B B还没产生或较弱，到三个月时，反应基本上与成还没产生或较弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一样。年人的一样。5 51010岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价。岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价。RhRh抗体主要通过输血或妊娠免疫而产生。一般在初次免疫后抗体主要通过输血或妊娠免疫而产生。一般在初次免疫后2 26 6个月内出现，个月内出现，经再次免疫后，经再次免疫后，3 3周内抗体浓度可达到高峰。周内抗体浓度可达到高峰。二、血凝实验血凝实验是指抗体和红细胞在液体介质中发生的肉眼可见的凝集反应。血凝实验是指抗体和红细胞在液体介质中发生的肉
26、眼可见的凝集反应。其原理是其原理是凝集可分为直接凝集（凝集可分为直接凝集（direct agglutinationdirect agglutination）和间接凝集（）和间接凝集（indirect indirect agglutinationagglutination）IgMIgM抗体造成的直接凝集抗体造成的直接凝集IgGIgG间接凝集反应致敏阶段间接凝集反应致敏阶段间接凝集反应真凝集阶段间接凝集反应真凝集阶段 在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体上，加入抗人球蛋白抗体(抗抗体抗抗体)，通过，通过抗人球蛋白抗体特异性搭桥作用，促进红抗
27、人球蛋白抗体特异性搭桥作用，促进红细胞的凝集。细胞的凝集。载体不同1.平板法2.试管法3.微孔板法试管中红细胞凝集强度的判断试管中红细胞凝集强度的判断凝集反应判定标准试管法血凝实验的特点及应用试管法血凝实验的特点及应用特点：快速、准确、结果可靠，缺点是影响因素多，灵敏度低。特点：快速、准确、结果可靠，缺点是影响因素多，灵敏度低。应用：应用极为广泛，如血型的鉴定，交叉配血，抗体鉴定与应用：应用极为广泛，如血型的鉴定，交叉配血，抗体鉴定与IgGIgG效价测定等效价测定等影响红细胞凝集反应的因素影响红细胞凝集反应的因素 反应温度反应温度：303037 37 溶液的溶液的pHpH值值：pH6.8pH6
28、.87.2 7.2 孵育时间孵育时间:30 mins :30 mins 离子浓度离子浓度 降低抗原与抗体反应介质的离子，如降低抗原与抗体反应介质的离子，如NaNa、ClCl的浓度，能够的浓度，能够使抗原抗体间相反电荷恢复和增加使抗原抗体间相反电荷恢复和增加,增强吸引力增强吸引力,从而能提从而能提高抗原与抗体的结合速度。高抗原与抗体的结合速度。抗原抗体的比例抗原抗体的比例 增加抗原红细胞数量，则会减少每个红细胞结合抗体增加抗原红细胞数量，则会减少每个红细胞结合抗体的量，因而减弱其凝集。若适当增加抗体比例的量，因而减弱其凝集。若适当增加抗体比例,则有助于则有助于对弱反应抗体的检出对弱反应抗体的检出
29、,但要注意前带现象。但要注意前带现象。1 1、盐水凝集法：、盐水凝集法：是操作最简单的方法，所需设是操作最简单的方法，所需设备简单。备简单。影响因素的干扰多，灵敏度相影响因素的干扰多，灵敏度相对较低，要求抗对较低，要求抗A A血清效价血清效价11：128128抗抗B B血清效价血清效价11：6464；而冷；而冷凝集素效价凝集素效价11：4 4；对抗原抗；对抗原抗体反应的亲和力和特异性还有体反应的亲和力和特异性还有较高要求较高要求 目前只有一些基层医院血库仍目前只有一些基层医院血库仍将此方法作为血型检查的主要方将此方法作为血型检查的主要方法法2 2、低离子强度盐、低离子强度盐水法水法 当降低介质
30、溶液当降低介质溶液的离子强度时，可的离子强度时，可减少红细胞外围的减少红细胞外围的离子云的强度，促离子云的强度，促进进IgGIgG分子在两个分子在两个红细胞间的桥连，红细胞间的桥连，进一步促进红细胞进一步促进红细胞间的凝集。间的凝集。ABO血型全自动微板法检测技术 原理 待测微板进入自动扫描暗室中，扫描U型孔底中线上40个点的透光度。凝集孔的RBC凝块聚集于孔中央，透光度小，而外周游离的RBC很少甚至没有，透光度大，透光度曲线呈“U”型，设定此类曲线为阳性参考曲线。非凝集孔的RBC均匀分布，透光度曲线平缓呈“-”型，设定此类曲线为阴性参考曲线，微孔板在酶标仪上读数后每孔的曲线与设定的参考曲线相
31、比较，根据程序设定的ABO血型正反定型结果模式统计判定样本的血型优点1采用自动化加样，加样量精确、迅速2酶标仪判读，血型结果自动打印3由于离心、沉淀、振荡，提高了弱抗体的检出率4试剂用量少，经济5.降低了实验者的工作强度，减轻精神压力酶处理试验技术RBC表面唾液酸所带负电荷，使RBC之间保持相对稳定距离，IgG为单倍体，结合抗原跨度小于RBC间距离，不会引起凝集。某些蛋白水解酶，可减少负电荷的数量。最常用的酶有：木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶原理蛋白水解酶，作用于红细胞表面的多糖链，切断带有负电荷的羧基集团的唾液酸，减少红细胞表面负电荷，缩短红细胞之间的距离。分类一步法二步法三、微柱凝胶免疫实验(Mi
32、crocolumn gel immuno-assay MGIA)MGIAMGIA本质：是血凝实验，即红细胞抗本质：是血凝实验，即红细胞抗原抗体在微柱腔内的凝胶介质中发生原抗体在微柱腔内的凝胶介质中发生肉眼可见的凝聚反应。肉眼可见的凝聚反应。抗原抗体反应与凝胶分子筛技术相结合的产抗原抗体反应与凝胶分子筛技术相结合的产物。通过调节葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔物。通过调节葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小，使分子筛只允许游离红细胞通过，从而径大小，使分子筛只允许游离红细胞通过，从而达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的。达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的。卡式检测法（微柱凝胶试验）卡式检测法（微
33、柱凝胶试验）法国法国Dr.Yves LapierreDr.Yves Lapierre在在19901990年首先发明的一项年首先发明的一项免疫学检测新技术，是微柱凝胶技术与以上所有免疫学检测新技术，是微柱凝胶技术与以上所有实验技术相结合的产物。实验技术相结合的产物。19941994年此项技术获得了年此项技术获得了美国美国FDAFDA（Food and Drug Administration Food and Drug Administration）的）的认可。经过不断改进和临床大量应用，目前，在认可。经过不断改进和临床大量应用，目前，在多数发达国家，此项技术已作为常规的红细胞血多数发达国家，此项
34、技术已作为常规的红细胞血型血清学检测技术应用于临床。型血清学检测技术应用于临床。工作原理工作原理 微柱：柱体上端、柱体微柱：柱体上端、柱体 过滤介质：颗粒直径过滤介质：颗粒直径26-103 26-103 nmnm的葡聚糖凝胶，凝胶间的葡聚糖凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过缝隙只允许游离红细胞通过 缓冲液：低离子介质（加或不加抗血清）缓冲液：低离子介质（加或不加抗血清）工作原理工作原理红细胞和抗血清加在凝胶上部红细胞和抗血清加在凝胶上部,反应、低速离心后观察反应、低速离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央，证明
35、发生凝集反应，判断凝集反应阳性断凝集反应阳性游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发生凝集，判断凝集反应阴性生凝集，判断凝集反应阴性 微柱凝集试验技术分类中性胶特异性胶：含有特意性抗体抗球蛋白胶：抗球蛋白胶，可进行IgG类抗体的检测结果判读模式4+4+：红细胞复合物位于胶表面。：红细胞复合物位于胶表面。3+3+：大部份红细胞复合物位于胶表面，小部分位于胶中上部。：大部份红细胞复合物位于胶表面，小部分位于胶中上部。2+2+：大小部分位于胶中部，小部分位于胶中上部。：大小部分位于胶中部，小部分位于胶中上部。
36、1+1+：复合物位于胶中近底部。：复合物位于胶中近底部。+/-+/-：与阴性管结果对照，如有差别，即可判断。：与阴性管结果对照，如有差别，即可判断。d.p.d.p.：对某特异性抗体，同时存在阴性与阳性细胞，而发生混合反应。：对某特异性抗体，同时存在阴性与阳性细胞，而发生混合反应。Hemo.Hemo.：溶血反应。：溶血反应。-：离心后红细胞沉积在微柱凝胶管底部。：离心后红细胞沉积在微柱凝胶管底部。微柱凝胶免疫实验的特点微柱凝胶免疫实验的特点灵敏度和准确性高，重复性好灵敏度和准确性高，重复性好简便，不需要清洗红细胞简便，不需要清洗红细胞标本用量少标本用量少 有利于新生儿等标本检测实验全过程标准化实
37、验全过程标准化 标准化的孵育时间、离心时间以及结果判读 消除了主观因素对弱反应结果的判读，减少了人为错误的发生实验结果客观性强，而且稳定，可以长期保存实验结果客观性强，而且稳定，可以长期保存微柱凝胶免疫实验临床应用微柱凝胶免疫实验临床应用红细胞血型鉴定红细胞血型鉴定交叉配血交叉配血抗体筛查抗体筛查新生儿溶血病的检测新生儿溶血病的检测四、抗人球蛋白试验四、抗人球蛋白试验（antihuman globulin testantihuman globulin test，AGTAGT）（CoombsCoombs试验）试验）原 理 抗人球蛋白试验，又称抗人球蛋白试验，又称 Coombs Coombs 试验
38、，是检查不试验，是检查不完全抗体的完全抗体的 一种方法。一种方法。用人血清免疫家兔，产生用人血清免疫家兔，产生抗人球蛋白抗体，即抗抗抗人球蛋白抗体，即抗抗体。将抗人球蛋白抗体体。将抗人球蛋白抗体（抗抗体）（抗抗体）加入已经致加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的不完全抗体红细胞表面的不完全抗体FcFc段与抗人球蛋白抗体的段与抗人球蛋白抗体的FabFab段发生特异性结合，段发生特异性结合，使红细胞发生凝集。本试使红细胞发生凝集。本试验可分为直接抗人球蛋白验可分为直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试试验和间接抗人球蛋白试验验直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验(dire
39、ct antiglobulin test(direct antiglobulin test，DAT)DAT)检测红细胞是否在人体内被不完全抗体致敏的试验。检测红细胞是否在人体内被不完全抗体致敏的试验。间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验(indirect antiglobulin test(indirect antiglobulin test，IAT)IAT)间接抗球蛋白试验是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原的红细胞测定受检 血清中相应的不完全抗体，或用已知抗血清测定受检红细胞上相应抗原。IATIAT的临床应用的临床应用 红细胞血型定型红细胞血型定型 用已知特异性的不完全抗体与
40、被检红细胞孵育，洗涤后加入抗人球蛋白试剂，可鉴定该红细胞血型。对输血前患者、新生儿不完全抗体的筛查与鉴定对输血前患者、新生儿不完全抗体的筛查与鉴定 用已知血型抗原的红细胞和被测血清孵育，可鉴定血清中的不完全抗体。抗体效价的检测抗体效价的检测 将倍比稀释的血清加入已知血型抗原的红细胞中，孵育后加入抗人球蛋白试剂，可测定血清中不完全抗体的效价。相容性配血相容性配血DATDAT的临床应用的临床应用 新生儿溶血病（新生儿溶血病（HDNHDN）的诊断）的诊断 母体的IgG抗体穿过胎盘结合到胎儿红细胞 免疫溶血性输血反应患者同种异体不完全抗体的确证免疫溶血性输血反应患者同种异体不完全抗体的确证 受血者输人
41、红细胞后,免疫产生抗体。输入的红细胞可被该抗体致敏，而出现DAT阳性。自身免疫溶血性贫血的辅助诊断自身免疫溶血性贫血的辅助诊断 自身免疫溶血性贫血患者可产生针对自身红细胞的抗体，这些抗体可结合到红细胞膜上而使细胞存活期缩短，或直接溶血。RhRh血型鉴定的原理血型鉴定的原理酶介质法酶介质法凝聚胺试验凝聚胺试验抗球蛋白试验抗球蛋白试验人源盐水介质抗人源盐水介质抗D D试验试验低离子强度溶液试验低离子强度溶液试验 在盐水介质中、在盐水介质中、IgGIgG抗体不凝集抗体不凝集RBCRBCIgMIgM抗体凝集抗体凝集RBCRBC示意图示意图在盐水介质中在盐水介质中在凝聚胺、酶处理下在凝聚胺、酶处理下Ig
42、GIgG抗体可凝集抗体可凝集RBCRBC抗球蛋白试验抗球蛋白试验抗球蛋白抗球蛋白LISS(低离子强度溶液)的原理抗原抗原非离子静电作用力抗体抗体静电作用力离子抗原抗原抗体抗体当溶液中离子增多时，抗原抗体之间的静电作用力减弱当溶液中缺少离子时，抗原抗体之间的静电作用力较强四、输血前免疫血液学检查一）、输血前检查的目的和要求 目的：选择与患者配合的血液成分，使之能在患者体内有效存活，无不良反应。要求：使患者与供者之间的血液在免疫学方面“相容”。安全安全 及时及时 有效有效二）、输血前检查的内容 1、患者的病史了解和标本的检查 2、受者、供者ABO、Rh血型的确定 3、不规则抗体的筛选、鉴定 4、交
43、叉配合试验（红细胞、血小板）5、发血五、交叉配血(Matchcross Blood)交叉配血交叉配血(Matchcross Blood)一，交叉配血的概念交叉配血的概念 交叉配血实验也称配合性实验，实际上是检查不配合性。检查患者和献血员之间是否有对应的抗原、抗体存在1.使供血者的红细胞与受血者的血清反应（主侧交主侧交叉配血叉配血）2.使受血者的红细胞与供血者的血清反应（次侧交次侧交叉配血叉配血）观察两者是否出现凝集（溶血）交叉配血交叉配血(Matchcross Blood)二，交叉配血的方法交叉配血的方法 1.只能检出不配合的完全抗体 盐水介质法盐水介质法 2.可检出不配合的不完全抗体 抗人球
44、蛋白法抗人球蛋白法 蛋白酶法蛋白酶法 低离子介质法低离子介质法等 3.改良的交叉配血方法改良的交叉配血方法交叉配血交叉配血(Matchcross Blood)聚凝胺（Polybrene)配血法 利用高价阳离子的多聚季氨盐溶解后产生的大量正电荷可中和红细胞表面的负电荷缩小其之间的距离微柱凝胶配血法（卡式配血法）利用葡聚糖凝胶具有分子筛效应几种交叉配血试验的方法学评价配血方法 优点 缺点盐水配血试验 简单、快速 检不出不相配IgG型抗体酶介质试验 简便、经济 准确性、稳定性差抗球蛋白试验 准确、可靠 复杂、费时、试剂贵凝聚胺试验 快速、准确 需特殊试剂及器材微柱凝胶试验 灵敏 成本高交叉配血交叉配
45、血(Matchcross Blood)三，交叉配血不合的原因三，交叉配血不合的原因（一）主侧不合：Ps+Dc 主要针对Ps 1.不规则抗体 有同种抗体或自身抗体 2.有高频抗体，与谱细胞凝，自身不凝 3.冷凝集 4.A2抗A1 5.Dc的DAT+交叉配血交叉配血(Matchcross Blood)二）次侧不合：Pc+Ds1.Pc做DAT：阳性见于自身抗体，输血反应，HDN2.Ds中有不规则抗体3.忽略ABO亚型误定血型4.冷凝集素吸附于Pc5.异型输血A,B AB,O AB,A,B 四，交叉配血的注意事项四，交叉配血的注意事项1.时间与速度2.水温箱的温度3.水质4.用新鲜的标本5.做抗人球实验时最好用血清6.注意输血史，妊娠史7.注意溶血的结果感谢下感谢下载载
