1、Graduation thesis of medicinexxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx研 究 生：xxx导 师：xxx研究的背景及意义1材料与方法2实验结果与讨论3总 结4目录CONTENTS不足与展望5致 谢6研究的背景及意义The research background and significance01对缺血性脑中风发病机制及防治的研究已成为医学界关注的重点。01缺血大脑迅速获得血液供应是阻止缺血性神经元损伤的首要措施，然而，大量的血液迅速再灌注又进一步加重缺血组织的损伤-即缺血再灌注损伤。02氧化应激和炎症是缺血再灌注损伤病理生理机制的
2、重要组成部分。脑缺血再灌注早期即有大量活性氧产生，并迅速启动损伤级联，加剧了初始损害最终导致神经元不可逆的损伤。因此，再灌注早期阻断氧化应激损伤是有效降低迟发性神经元死亡的关键。03Genistein具有酪氨酸激酶抑制剂活性和抗氧化作用。04Genistein作为酪氨酸激酶抑制剂可有效减弱短暂全脑缺血造成的神经元的延迟性死亡；一个单纯的氧诱导的脑缺血小鼠模型显示Genistein具有抗氧化活性。05eNOS活性的升高对脑中风具有有益作用。另研究发现，Genistein能够诱导eNOS活性并激活核因子NF-E2相关因子(Nrf2)，进而诱导抗氧化酶表达、减少心血管疾病的发生。06研究的背景及意义
3、研究的背景及意义文字添加文字添加文字添加文字添加2018201720162015 那么，Genistein postconditioning(GPC，即缺血后给予Genistein)是否能通过eNOS/Nrf2/ARE信号通路降低氧化应激，从而发挥抗缺血性神经元损伤的作用？目前尚未见报道。本研究采用四动脉结扎(4-VO)全脑缺血模型，观察GPC对缺血性神经元的保护作用，并探讨其可能的分子机制，为临床防治缺血性脑中风提供理论依据。材料与方法Materials and methods02主要实验仪器和试剂0201组织裂解液BCA蛋白浓度测定试剂盒eNOS、p-eNOS、Nrf2、HO-1一抗及其相
4、应的二抗NBT/BCIP显色液 NeuN、4-HNE、8-OHdG一抗及对应的荧光二抗TUNEL试剂盒大鼠脑立体定位仪大鼠脑微量注射泵冰冻切片机激光扫描共聚焦显微镜酶标仪电泳设备摇床Morris水迷宫超低温冰箱等实验分组ShamI/RVeh1(IR+DMSO)GPCVeh2(GPC+NaCl)L-NAME30m24hI10mI10mI10mI10mI10m30m6h1d5d椎动脉电凝并分离颈总动脉缺血尾静脉注射Genistein 1mg/kg侧脑室注射L-NAME1mg/5l0.9%NaCl0.1%DMSO3d7d9dSPF级成年雄性SD大鼠随机分组及4-VO模型技术路线图TUNEL染色及Ne
5、uN染色蛋白免疫印迹技术Morris水迷宫再灌注5d检测海马CA1区神经元的凋亡及存活BDAC免疫荧光染色法再灌注30min,6h,1d,3d 观察p-eNOS,Nrf2,HO-1蛋白表达再灌注3d观察海马CA1区神经元8-OHdG,4-HNE,Nrf2,HO-1蛋白的表达及定位再灌注7-9d，检测大鼠的空间学习和记忆能力实验方法及检测指标统计学分析 数据整理后，应用SigmaStat3.5统计软件进行统计学分析。所有计量资料数值以均数标准差表示，采用单因素方差分析(ANOVA)，多个实验组与一个对照组比较用最小显著差法(LSD)，各实验组之间比较采用q检验(Newman-keuls test
6、)，P 0.05为差异有统计学意义。实验结果与讨论The experimental results and discussion03实验结果与讨论图1 图A：NeuN(红色)染色：生存的神经元；TUNEL(绿色)染色：凋亡样神经元；图B：海马CA1区1mm 长度内NeuN 阳性神经元数量统计图；图C：海马CA1区1mm长度内 TUNEL阳性神经元数量统计图;*P0.05 vs.I/R 组，#P0.05 vs.GPC 组，n=5;40,bar=50mNeuN positive cell050100150200250300*#ShamI/RGPC L-NAMEABTUNEL positive ce
7、ll050100150200250*#ShamI/RGPCL-NAMEC小结1vGenistein后处理是否诱导eNOS激活（磷酸化）?Genistein后处理对缺血性神经元损伤具有保护作用，eNOS激酶抑制剂L-NAME减弱了该作用，说明eNOS可能参与了此保护作用。小结1AB图2 GPC对大鼠海马CA1区神经元eNOS、p-eNOS蛋白表达的影响图A：再灌注不同时间点p-eNOS、eNOS蛋白的表达；Sh：Sham组；R：再灌注；：I/R组；：GPC组；GPC:Genistein后处理；图B：p-eNOS蛋白表达统计图：n=4；*p0.05 vs.I/R组 小结1AB图3 L-NAME对再
8、灌注3d大鼠海马CA1区神经元eNOS磷酸化水平的影响 图A：各实验组再灌注3 d p-eNOS蛋白表达；图B：各实验组再灌注3 d p-eNOS蛋白表达统计图，n=5，*p0.05 VS.I/R 组；#p0.05 VS.Vehicle2 组小结2Genistein后处理可诱导全脑缺血大鼠海马CA1区eNOS磷酸化水平升高，eNOS激酶抑制剂L-NAME可有效降低GPC诱导的eNOS磷酸化水平。90%80%70%95%结果揭示：eNOS磷酸化水平升高参与了Genistein的神经保护作用。Genistein后处理是否能有效降低缺血再灌注后神经元的氧化应激损伤呢?4-HNE是脂质过氧化的最终产物
9、，被公认为氧化应激最稳定的标记物 8-OHdG，是DNA氧化损伤的特异产物小结2图4 全脑缺血再灌注3 d，各实验组大鼠海马CA1区4-HNE及8-OHdG免疫荧光染色图A：绿色:NeuN；红色:4-HNE；图B：红色:DAPI；绿色:8-OHdG；n=4-5；40；bar=50 m部门一部门二部门三部门四GPCI/RBGPCI/R小结3l GPC能有效降低氧化应激损伤；eNOS激酶抑制剂L-NAME废除了此神经保护作用。lNrf2/ARE信号是生物体内抗氧化应激反应最重要的内源性防御系统。那么，GPC是否通过eNOS诱导了此信号通路?小结3ACShFold changes0.0.2.4.6.
10、81.01.21.41.61.8I/RGPCR30m R6h R1dR3d*Bl 图5 A-C GPC促进大鼠海马CA1区Nrf2蛋白表达；l 图A：再灌注不同时间点核内Nrf2蛋白表达；图B：再灌注不同时间点核内Nrf2蛋白表达统计图，n=4，*p0.05 vs.I/R组；图C：再灌注3d 各实验组Nrf2 蛋白的表达及统计图；*p0.001 vs.I/R组，#p0.001 vs.Vehicle2 组。小结3图5 D 免疫荧光染色法观察大鼠再灌注3d海马CA1区神经元内Nrf2 的表达及定位此处输入标题绿色：Nrf2；红色:NeuN；黄色：二者的共定位；40；bar=30m.此处输入标题小结
11、3右键点击图片选择设置图片格式可直接替换图片，在此录入上述图表的综合描述说明，右键点击图片选择设置图片格式可直接替换图片，在此录入上述图表的综合描述说明，图6 大鼠再灌注3d海马CA1区神经元内HO-1蛋白表达及其与Nrf2的共定位图A-B：HO-1蛋白表达及其统计图；图C：HO-1与Nrf2蛋白的共定位，*p0.05 VS.I/R 组；#p0.05 VS.vehicle2组；绿色：Nrf2；红色：HO-1；蓝色：DAPI；合成图为三者的共定位；40；n=4-5；bar=50m；此处输入标题此处输入标题小结4010203GPC可显著增加海马CA1区神经元胞核中Nrf2蛋白的表达并引起下游靶基因
12、HO-1的表达，而L-NAME阻断了此作用。此结果进一步揭示GPC通过eNOS诱导了Nrf2/HO-1抗氧化信号通路，从而阻断了缺血再灌注后迟发性神经元损伤。海马是学习和记忆的重要部位，而海马CA1区是缺血最敏感的区域。那么，GPC是否能改善大鼠缺血后空间学习记忆能力?小结4图7 GPC对大鼠缺血后空间学习和记忆能力的影响图A-B：潜伏实验和探索实验统计图；n=5；*p0.05 vs.I/R组；#p0.05 vs.GPC 组.图C-D：潜伏实验和探索实验大鼠游泳路程轨迹图Quadrant Occupancy(sec)01 02 03 04 05 06 07 0S h a mI/RG P CL-
13、N A M E*#P r o b e tr ia l9 dB小结5点击此处输入标题GPC能有效的改善大鼠缺血后的空间学习和记忆能力。点击此处输入标题GPC能有效的改善大鼠缺血后的空间学习和记忆能力。点击此处输入标题GPC能有效的改善大鼠缺血后的空间学习和记忆能力。总 结T o t a l k n o t04总结GPC对缺血性神经元损伤具有保护作用。GPC能有效改善大鼠短暂全脑缺血后的认知功能。GPC可通过诱导eNOS磷酸化水平并上调Nrf2/HO-1信号通路，从而降低脑缺血诱导的氧化应激损伤。不足与展望D e f i c i e n c y a n d prospect05不足与展望GPC是否
14、也触发了其它促生存信号转导通路（如雌激素受体信号），从而起到抗缺血性神经元损伤的作用。其确切的机制还有待多层面、多角度的进一步探究。此处输入标题GPC是否可增加Nrf2的DNA结合活性有待进一步研究。此处输入标题致 谢T o t h a n k06致谢感谢河北联合大学研究生学院、基础医学院病理教研室以及形态中心的各位老师所给予我的指导、关心与包容！感谢我的父母、亲人和工作单位对我的支持与鼓励，正是他们的理解和关怀使我顺利的完成学业！实验和论文的最终完成是我的导师*教授精心指导的结果。谨借此机会，向我敬爱的恩师表示最衷心的感谢！感谢河北联合大学研究生学院、基础医学院病理教研室以及形态中心的各位老
15、师所给予我的指导、关心与包容！THANK YOU FOR WATCHINGxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx研 究 生：xxx导 师：xxx答辩人：XXX答辩日：XXX目的分析心血管内科护理人员职业压力产生原因以及特点，并提出积极的应对干预措施。方法以我院2017年8月2018年3月心血管内科75名护理人员为研究对象，采用问卷调查的形式评估其职业压力产生的具体原因及相关特点，进而予以积极的干预措施。对比干预前后护士的焦虑、抑郁情况。结果75名心内科护士中，主诉职业压力大的原因以护理任务重、夜班加班较多为主，占比分别为93.33%，88.00%。经干
16、预后，心内科护士焦虑和抑郁评分都低于干预前，差异具有统计学意义（P0.05）。结论致使心内科护士出现心理压力的职业因素较多，管理者应针对实际状况予以积极的引导干预，以改善其抑郁、焦虑情绪，减轻护理工作压力。心血管内科护士职业压力一资料与方法二结果与分析三讨论与分析四参考文献资料与方法Materials and Methods一以我院2017年8月2018年3月心血管内科75名护理人员为调查对象，均为女性，均属于心内科注册护士且工作时间超过1年；年龄20岁47岁，中位年龄（28.75.05）岁；护理从业年限1年24年，平均（7.43.15）年；文化水平：20例本科及以上，50例大专，5例中专。1
17、.1 一般资料20岁47岁（28.75.05）岁60%40%1.2.1 调查方法调查方法 由接受培训后考核合格的调查员向心内科护士发放职业压力主诉调查问卷，该问卷为第三方机构按照本科室实际情况设计，内容涵盖日常工作量、专业技能、护理环境、人际关系、护理管理等多个方面。调查方法 75份问卷都由护士个人自愿填写，填完后当场收回；实施干预措施后再次发放调查问卷；问卷以不记名方式填写，统一由专业评审员分析评定。干预前后对75名护士进行焦虑、抑郁程度的评估，以掌握其实时心理健康状况。1.2.2 干预措施对于心内科护士职业压力及心理状况的调查结果出来后，向护士予以下面几项针对性的干预措施：积极改善护理工作
18、环境。管理者应为护理人员营造一个优质、舒适的护理工作环境，调整治疗室、护办室等办公区的物品放置，使其井然有序，明确各类物品的标识，方便查找及拿放。同时，还需主动关心护士的内心感受，对存在负性情绪的人员进行积极疏导，护士正确释放自身压力，并有意识培养护士的积极意志与情感，提升护理团队心理耐受能力。实行科学、弹性排班制度。护士长针对心内科实际工作情况，合理调配护理人力，科学安排每位护士的日常工作量，尽量做到新老人员搭配，工作能力强、弱协调。另外，需按照护士个人情况进行弹性排班，充分理解各位护士既是妻子、也是母亲、还是女儿的角色身份，帮助其缓解工作、家庭方面的双重压力，在条件允许下满足护士合理需求。
19、1.2.2 干预措施科学弹性注重提高护士工作应对能力。管理者应注重增强护理人员的培训力度，既要提高其基本护理技能与综合素养，也要指导护士积极调节心态，培养正确的工作观、价值观，进而客观看待工作上的得失；并注重提升护士与患者、同事及领导的交流沟通能力。1.2.2 干预措施争取管理层及同事的积极支持。护士职业需要受到社会、患者以及同事的广泛支持，尤其是需要得到管理者的积极支持。例如为其提供继续深造的机会，组织护士群体活动，运用网络技术传递医务信息等，通过合理手段为护士创设情感交流的平台、园地，使其在出现心理困扰时能够自主寻求心理咨询及治疗，以确保护士心理处于健康状态。1.2.2 干预措施配置充足的
20、心内科护理人力。人力资源得到合理调配，可使护理人员的工作安排更加科学，以减少护士身心疲惫、超负荷工作的现象出现。要实现护理人力的科学调配，需尽量保障护士和患者的合理比例，继而减轻护士护理工作的压力。1.2.2 干预措施1.3 评估指标1、评分超出14分为存在显著焦虑2、在714分之间为存在焦虑倾向3、低于7分为没有焦虑选用汉密尔顿焦虑量表对心内科护士的焦虑程度进行评估，具体评价标准：1、评分超出16分为存在显著抑郁2、在816分之间为存在抑郁倾向3、低于8分为没有抑郁3低于7分为没有焦虑。选用汉密尔顿抑郁量表对心内科护士的抑郁程度进行评估使用SPSS22.0统计学软件分析数据，计量资料以xs表
21、示，采用t检验，计数资料采用2检验，P0.05为差异具有统计学意义。1.4 统计学方法结果与分析Discussion and analysis二75例心内科护士中，主诉职业压力大的原因以护理任务重、夜班加班较多为主，其占比分别为93.33%，88.00%。2.1 心内科护士职业压力调查情况经干预后，心内科护士焦虑和抑郁评分都低于干预前，差异均具有统计学意义（P0.05）。2.2实施干预前后护士的焦虑和抑郁评分对比P0.05讨论与分析Materials and Methods三一、讨论与分析经过对本院心血管内科护士进行职业压力主诉的问卷调查后得知，护理职业压力大的原因以护理任务重、夜班加班较多为
22、主，另外还涉及工作分配不够合理、假期过少、医患关系不和谐、同事间配合度差、工资以及福利待遇偏低、缺乏家庭及社会的支持和害怕工作中出错等多个方面的因素4。Materials and Methods针对此调查结果，我院心内科提出相应的减轻压力的心理积极干预措施，为护士开展针对性心理辅导，通过改善护理工作环境、实行弹性排班制度、培养护士工作应对能力、争取管理层及同事积极支持、配置充足护理人力资源等一系列相关措施，有效减轻了心内科护士的不良心理状态，使其抑郁、焦虑症状得以显著改善5。一、讨论与分析本次调查的75名心内科护士经积极干预后，其焦虑和抑郁评分都低于干预前（P0.05）。说明干预引导方案具有积极作用，可帮助护士改善因职业压力而导致的不良心理。综上所述，导致心内科护士出现心理压力的职业因素较多，管理者应当针对实际状况给予有效的引导干预，以改善其抑郁、焦虑情绪，减轻护理工作压力。积极干预引导方案参考的文献Reference四1温慧敏，缪羽，郭佳馨.护理执业环境现状的研究进展J.护理管理杂志，2017，17（10）：733-7352钱瑞莲，高颖，陶筱琴.对护士实施小组心理减压的实践J.中国护理管理，2017，17（3）：306-309.3花瑞红.医务人员心理健康状况及应对研究J.预防医学论坛，2016，22（10）：791-794、797.答辩人：XXX答辩日：XXX
