1、1 1、糖化血红蛋白的定义、糖化血红蛋白的定义糖化血红蛋白（GHb）是红细胞在生存期间HbA与己糖（主要是葡萄糖）缓慢、持续且不可逆地进行非酶促反应的产物。由于HbA所结合的成分不同，又分为HbA1a（与磷酰葡萄糖结合）、HbA1b（与果糖结合）、HbA1c（与葡萄糖结合），其中HbA1c含量最高，占60%-80%，是目前临床最常检测的部分。糖化血红蛋白的测定结果以百分率表示，指的是和葡萄糖结合的血红蛋白（HbA1c）占全部血红蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血红蛋白的水平为4 4%-6%-6%。正常成人体内的血红蛋白正常成人体内的血红蛋白HbHbHbA0HbA0HbA1HbA1HbA1aHbA
2、1aHbA1bHbA1bHbA1cHbA1cHbAHbA()HbA2HbA2()HbFHbF()97%97%0.5%0.5%2.5%2.5%成人成人 HbHb胎儿胎儿 HbHb未糖化未糖化糖化糖化6%6%94%94%-主要的糖化血红蛋白主要的糖化血红蛋白-80%80%A1a A1a 和和 A1bA1b含量极低含量极低HbA1cHbA1c由蛋白的非酶法糖化形成由蛋白的非酶法糖化形成不稳定的不稳定的SchiffSchiff（醛亚胺结构）（醛亚胺结构）可逆快速 稳定的稳定的HbA1c HbA1c （醛酮结构（醛酮结构 ）不可逆慢速葡萄糖进入红细胞后与HBA的 链链N N端缬氨酸残基缩合端缬氨酸残基缩
3、合 再经Amadori 分子重排后2 2、糖化血红蛋白的特性、糖化血红蛋白的特性（1 1）糖化血红蛋白比例高低的决定因素）糖化血红蛋白比例高低的决定因素 取决于血糖的浓度 血糖与血红蛋白的接触时间 红细胞的存活时间 血糖浓度越高，接触时间越长，HbA1c的比例越大（2 2）反应近）反应近2-32-3个月的平均血糖水平个月的平均血糖水平人体内红细胞的寿命一般为120天，在红细胞死亡前，血液中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因此糖化血红蛋白水平反映的是在检测前2-3个月内的平均血糖水平。稳定性好。糖化血红蛋白是逐渐生成的，且不易分解，短期内的血糖升高或降低，不会引起糖化血红蛋白的波动，能更好地反
4、映较长时间的血糖控制程度。（3 3）可以）可以随机抽血进行检测，简便易行，可重复性随机抽血进行检测，简便易行，可重复性好。好。HbA1c HbA1c的测定方法的测定方法 通常分为两大类：通常分为两大类：一类是基于GHb和Hb的电荷不同，如离子交换层析法、电泳法。另一类是基于Hb上糖化基团的结构特点，如亲和层析法、免疫法和酶法等。电泳法 与离子交换层析法一样也是基于糖化和非糖化的Hb所带的电荷不同进行分离。此法精密度高，但分析时间较长。亲和层析法 基于糖化和非糖化Hb结构不同进行分析的。除外HbA1c外，血液中的其他糖化的Hb也可与亲和物结合，因此该方法的检测结果为GHb总量，而不是HbA1C含
5、量免疫法 可在全自动生化分析仪上用免疫抑制比浊法测定HbAlc水平。具有良好的精密度和抗干扰能力。酶法 原理是在蛋白酶的作用下，切断HbAlc 的链N末端的糖化二肽，糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成过氧化氢，在过氧化氢酶的作用下与显色剂产生显色反应，通过测定吸光度求出定HbAlc 的百分数。床旁检验或快速检验（POCT）有2种方法，一种是利用硼酸亲和原理在颜色反射计上进行检测。HbAlc特异性地与硼酸复合物结合呈蓝色，而未糖化Hb呈红色，通过两者光强度的比例计算。另一种是基于免疫反应原理在荧光分析仪上检测含HbAlc 的荧光染料分子的斑点数，换算成HbAlc 的数值。此方法便携、快速，但精
6、密度较其他方法要差。离子交换色谱法离子交换色谱法 葡萄糖与血红蛋白链N端缬氨结合后等电点降低，导致糖化的Hb所带的正电荷比未糖化的Hb少，与树脂的附着力小，可分别用不同离子强度的缓冲液在不同时间将Hb从阳离子交换柱中洗脱下来，再根据峰值下面积来计算HbAlc占总Hb的比例。目前临床上较常采用高效液相色谱法（HPLC）和低压液相色谱（LPLC），HPLC被国际上列为测定HbAlc 的参考方法。干扰因素 1.1.HbHb的变异体对的变异体对HbAlc HbAlc 测定的影响测定的影响 常见的变异体有HbF即Hb的链由链替代：如地中海贫血、镰状细胞病患者。还如HbS、HbC、HbE等。Hb的变异体会
7、随着HbAlc 一起洗脱而影响HbAlc的测定值。2.2.HbHb的化学修饰产物的化学修饰产物 最常见的是氨基甲酰化Hb(肾病患者)和乙酰化Hb(接受阿司匹林治疗者)。氨甲酰化为高浓度尿素在体内形成异氰酸,结合到Hb N末端氨基酸上，形成氨基甲酰血红蛋白。其与HbAlc的等电点相似，使得HbAlc 测定结果假性升高。有关报道，此法测定HbAlc时，如果尿素浓度超过17mmol/L，每升高1mmol/L会使测定值升高0.04%。另外肾病患者常伴有贫血,红细胞寿命缩短,在解释检测结果时，要综合考虑。3.3.红细胞生存期的改变红细胞生存期的改变 当患有溶血、失血性贫血等时，红细胞代谢加快，HbAlc
8、值通常下降。缺铁性贫血时，衰老的红细胞所占的比例增高，HbAlc值会假性增高。全自动糖化血红蛋白测定装置ADAMSTMA1c HA-8160测定对象：全血测定项目：HbA1c、HbA1、HbF及图样测定原理：逆相分离阳离子交换层析柱样本使用量：约 4uL（全血样本）l样本容器：采血管（EDTA，NaF、肝素）必须样本量：采血管 1mL HA-8160HA-8160的特点的特点HPLC法：高速分离稳定性HbA1c，特异性强、精密度高。自动去除不稳定性HbA1c同时测定HbA1、HbF能发现变异Hb，修饰Hb高速测定：90秒/样本lHbA1c的测定范围在320%之间。HA-8160HA-8160波
9、形波形HbA1a1HbA1a2HbA1bCHbFHbA0HbA1cHA-8160HA-8160结果样图结果样图测定信息测定信息测定结果测定结果波峰信息波峰信息色谱图色谱图影响测定结果的标本因素影响测定结果的标本因素l测定前标本的储存 室温（15-25）下保存2周，冰箱（2-8）保存1个月，测定结果的变异率均低于3%，稳定性良好。lHbA1c通常用翻倒混合的血或者自然沉降血球。如用和血糖测定共用NaF抗凝采血管，也可用离心分离的血球。但要在700g(1500rpm)、5min左右温和的离心条件下做前处理，否则HbA1c的测定值有若干偏高的情况出现。l对于非重度溶血标本，可进行测定。HPLC分析图
10、中可出现变性峰形。l存在未检出结果的情况 贫血患者当Hb浓度太低时65g左右，低于最低检出量，可采取低速离心后适当弃去部分血浆调节Hb浓度至正常水平。HbA1cHbA1c的临床应用的临床应用主要有三方面主要有三方面l糖尿病的诊断l监测糖尿病患者长期血糖的控制状况 HbA1C的监测目的在于消除血糖波动对病情控制的影响。是国际公认的糖尿病监控“金标准”。l糖尿病并发症的风险评估 其水平高低与糖尿病并发症的风险密切相关 DM DM的诊断标准：的诊断标准：DM(1)具有糖尿病的症状，FPG7.0mmol/L（2）具有糖尿病的症状，随机血糖11.1mmol/L，且伴有尿糖阳性者。(3)OGTT峰值11.
11、1mmol/L，OGTT2hPG11.1mmol/LlIFG FPG 6.1-6.9mmol/L，2hPG7.8mmol/L。lIGT FPG7.0mmol/L，2hPG7.8-11.1mmol/L 临床症状不典型者，需要另1d重复检测确诊，但不主张做第3次OGTT。（一）（一）HbA1cHbA1c用于糖尿病的诊断用于糖尿病的诊断 随着HbA1c检测标准化的逐步完善，2010年美国DM协会（ADA）更新DM诊疗指南，将其和FPG、OGTT一起列为DM诊断标准之一。并指出 HbA1C 6.5作为诊断DM的标准，HbA1C在5.7-6.4%为DM前期，5.7-6.0%为DM高危期，6.1-6.5%
12、为DM超高危期。ADA的诊断标准是否适用于中国人，此标准颁布后，不少文献报告以OGTT为金标准评价HbA1C诊断糖调节受损（IGR）和DM的诊断效能。北京大学第一附属医院徐国宾教授在他的 HbA1C对糖调节受损和2型糖尿病的诊断价值文章中指出，推荐6.5%作为诊断DM的cut off 值或医学决定水平是合理的，其具有较高的特异性和阳性预测值，一般96%，生理变动较FPG低，但敏感性不如FPG，HbA1C 6.5%不能排除经血糖检测和OGTT试验确诊的DM患者。因此，与血糖联合检测有助于提高糖尿病诊断的敏感性和特异性。另外，在他的此项研究中不支持HbA1C在5.7-6.4%为IGR的诊断标准。（
13、二）（二）HbA1C HbA1C在妊娠期糖尿病中的诊断在妊娠期糖尿病中的诊断妊娠期糖尿病（GDM）是指在妊娠期发生或首次发现的不同程度的高血糖症，包括妊娠前已经存在但漏诊的孕前DM及孕期伴随发生的糖耐量异常。GDM发病率逐年呈上升趋势，孕期随着血糖水平的升高，妊高症、剖宫产率、巨大儿、胎儿畸形、早产以及子代患糖尿病、心血管疾病的风险也会增加。GDM对母婴近期和远期都会造成很多不良影响。美国糖尿病学会（ADA）2011年制定了新的GDM诊断标准，孕24-28周用75g葡萄糖进行口服葡萄糖耐量试（OGTT），以空腹、糖后1h 2h血糖5.1、10.0、8.5mmol/L作为cut off 值，3项
14、中任何1项值达到或超过上述标准即可诊断GDM。但此项检测过程需要多次采血，操作繁琐，给孕妇带来痛苦和不便。HbA1C 是否可以作为GDM一个辅助诊断指标，使用普通人群的 HbA1C cut off 值诊断GDM是否合理有待进一步探讨。我国有文献报道，HbA1C诊断GDM的最佳cut off值4.9%，他的特异性和敏感性均高于80%，诸多研究显示，孕期 HbA1C 升高的水平与孕期母婴健康关系密切。但HbA1C 并未被推荐作为GDM的诊断指标之一。这还需进行更广泛的临床验证。（妊娠期由于红细胞周转加快，红细胞寿命缩短，空腹血糖降低，使得糖化时间缩短，导致妊娠期HbA1C生理性下降）。（三）与应激
15、性高血糖的鉴别诊断（三）与应激性高血糖的鉴别诊断各种应激反应如手术、创伤，感染、急性心肌梗死、脑血管意外等疾病和输注了含葡萄糖注射液后，都可以使血糖升高，但这种高血糖的 HbAlc 不一定升高，若为糖尿病患者HbAlc则升高，对两者签别诊断和指导治疗很有价值，二二 监测糖尿病患者长期血糖的控制状况监测糖尿病患者长期血糖的控制状况对于血糖控制状态较为平稳的患者，每年至少应接受2次HbA1c的检测。对于血糖控制状态不稳定的、需要改变治疗方案及正在进行胰岛素治疗的患者，应该每3个月检测1次。(三三)评估糖尿病慢性并发症的发生与发展评估糖尿病慢性并发症的发生与发展HbAlc是监测糖尿病患者血糖控制情况
16、的金标准,是评估糖尿病并发症风险的有效指标.糖尿病足病、糖尿病性周围神经炎、眼病、肾病、心脏病以及脑血管病变等是DM最常见的慢性并发症。也是导致DM死亡的主要原因。DM的早期诊断、生活方式的干预、治疗、监控对于延缓并发症的发生具有重要意义。8%9%心力衰竭的几率Hb死亡的几率心肌梗死的几率中风的几率微血管病变的几率白内障摘除手术的几率1%21%14%12%37%19%16%糖化血红蛋白检测的标准化糖化血红蛋白检测的标准化实验室中由于不同的测定原理方法所得到的测定值存在较大差异，为了解决检测结果的可比性和溯源性问题，国际上GHb测定的标准化工作已进行了多年，美国（NGSP美国糖化血红蛋白标准化计划）、日本（JDS日本糖尿病学会）、瑞典（SFKK瑞典临床化学学会）等国家分别建立了HbA1c的国家标准计划。并且在参考方法、标准物质、检测与治疗界值、测定方法及数据转换公式上达成共识。l我国在GHb测定一致性和标准化工作方面也作出了不少努力并取得了一定成绩。lIFCC-NGSP换算公式 NGSP（%）=0.09148*IFCC（mmol/mol）+2.152谢谢谢谢
