1、v1 1）掌握标本的采集与送检原则、病毒感染的）掌握标本的采集与送检原则、病毒感染的快速诊断；快速诊断；v2 2）熟悉病毒感染的免疫预防、抗病毒治疗；）熟悉病毒感染的免疫预防、抗病毒治疗；v3 3）了解病毒的分离培养。）了解病毒的分离培养。docin/sundae_meng第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法病毒学实验室诊断有三个方面：病毒学实验室诊断有三个方面：u直接检测和分离鉴定；直接检测和分离鉴定；u检测病毒核酸和抗原成分；检测病毒核酸和抗原成分；u检测特异性抗体。检测特异性抗体。docin/sundae_meng第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法一、标本采
2、集与送检：一、标本采集与送检：1 1、采集的标本：通常采集血液、鼻咽分、采集的标本：通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。物、活检组织或尸检组织等。（一）供病毒分离培养、检测核酸和抗原（一）供病毒分离培养、检测核酸和抗原docin/sundae_meng2 2、采集原则、采集原则v（1 1）时间时间:在发病初期（急性期）采取，较易检出在发病初期（急性期）采取，较易检出病毒，越迟阳性率越低。病毒，越迟阳性率越低。v（2 2）类型类型:在感染部位采取。如呼吸道感染采取鼻在感染部位采取。如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰；咽洗
3、漱液或咯痰；v（3 3）运输运输:冷藏速送。病毒离活体后在室温下很易冷藏速送。病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得检材应尽快送检。远距离运送，应将死亡，故采得检材应尽快送检。远距离运送，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织则应保存于则应保存于50%50%的甘油缓冲盐水中。的甘油缓冲盐水中。v（4 4）处理：处理：无菌操作；污染检材，加双抗生素或无菌操作；污染检材，加双抗生素或氯仿处理。如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、氯仿处理。如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒链霉素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，
4、而影响病毒分离。分离。docin/sundae_meng（二）供血清学检查的标本的采集原则（二）供血清学检查的标本的采集原则1 1、检测特异性抗体需要采取、检测特异性抗体需要采取急性期与恢复急性期与恢复期双份血清期双份血清，第一份尽可能在发病后立即，第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后采取，第二份在发病后2 23 3周采取。周采取。2 2、血清标本放、血清标本放4-204-20保存，试验前血清保存，试验前血清标本以标本以56305630分钟处理去除非特异性物质分钟处理去除非特异性物质及补体。及补体。3 3、无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异、无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性性lgM
5、lgM。docin/sundae_meng二、形态学检查二、形态学检查v电子显微镜（电子显微镜（EMEM）:能观察病毒颗粒的形态和能观察病毒颗粒的形态和大小。大小。v光学显微镜光学显微镜:能观察病毒感染细胞内的病理变能观察病毒感染细胞内的病理变化，如包涵体或多核巨细胞等。化，如包涵体或多核巨细胞等。例如，狂犬病病毒感染后可在脑神经细胞浆中检例如，狂犬病病毒感染后可在脑神经细胞浆中检出嗜酸性包涵体，称为内基小体，可辅助诊断狂出嗜酸性包涵体，称为内基小体，可辅助诊断狂犬病。犬病。docin/sundae_meng三、病毒的分离培养三、病毒的分离培养（一）病毒分离的一般程序是（一）病毒分离的一般程序
6、是鉴定病毒种型鉴定病毒种型(血清学方法血清学方法)检验标本检验标本杀灭杂菌杀灭杂菌(青、链霉素青、链霉素)接种接种易感的动物易感的动物出现病状出现病状 鸡胚鸡胚病变或死亡病变或死亡细胞培养细胞培养细胞病变细胞病变docin/sundae_mengdocin/sundae_meng（二）分离病毒的鉴定（二）分离病毒的鉴定1 1病毒在细胞内增殖的指征病毒在细胞内增殖的指征（1 1）细胞致病作用）细胞致病作用(Cytopathogenic effect,CPE):(Cytopathogenic effect,CPE):病病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、毒在细胞内增殖引起细胞退形性变
7、，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性CPECPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，结合临床表现可做出预测性诊断。结合临床表现可做出预测性诊断。（2 2）红细胞吸附现象）红细胞吸附现象 （3 3）干扰现象）干扰现象 （概念、作用机理、意义）（概念、作用机理、意义）2 2病毒感染性的定量测定病毒感染性的定量测定 ：docin/sundae_meng病毒在细胞内增殖的指标病毒在细胞内增殖的指标正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞docin/sundae_mengu病毒诱导宿主细胞产生
8、干扰素病毒诱导宿主细胞产生干扰素:抑制被干扰病毒的抑制被干扰病毒的生物合成。生物合成。u竞争干扰：竞争干扰：一种病毒破坏宿主细胞的表面受体，一种病毒破坏宿主细胞的表面受体，因而阻断另一病毒吸附。因而阻断另一病毒吸附。u改变宿主细胞的代谢途经：改变宿主细胞的代谢途经：从而阻止第二种病毒从而阻止第二种病毒的的mRNAmRNA的合成或其他生物合成过程。的合成或其他生物合成过程。u产生缺陷病毒产生缺陷病毒:其基因不能正常复制，但能干扰感其基因不能正常复制，但能干扰感染性病毒体的复制，这种缺陷病毒称为缺陷干扰染性病毒体的复制，这种缺陷病毒称为缺陷干扰颗粒。颗粒。docin/sundae_meng四、病毒
9、成分（核酸及抗原）的直接检出四、病毒成分（核酸及抗原）的直接检出 docin/sundae_mengELISAMicroplate ELISA for HIV antibody:coloured wells indicate reactivitydocin/sundae_meng五、特异性抗体的检测五、特异性抗体的检测v病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗原免疫应答，特异性抗体效价升高或原免疫应答，特异性抗体效价升高或lgMlgM抗体抗体出现有辅助临床诊断的价值。出现有辅助临床诊断的价值。（一）补体结合试验（一）补体结合试验（CFCF）（二）中和试验（二
10、）中和试验（NTNT）（三）血凝抑制试验（三）血凝抑制试验 （HIAHIA）docin/sundae_meng光镜光镜-包涵体包涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交PCR六、六、病毒感染的快速诊断病毒感染的快速诊断docin/sundae_meng第二节第二节 病毒感染的免疫预防病毒感染的免疫预防docin/sundae_meng一、人工主动免疫一、人工主动免疫v人工主动免疫制剂人工主动免疫制剂病毒疫苗：病毒疫苗：（一）减毒活疫苗（一）减毒活疫苗是由从自然界或人工突变培育筛选出的致病性减弱是由从自然界或人工突变培育筛选出的致病性减弱或丧失的病毒突变株制备而成的
11、疫苗，如脊髓灰质炎或丧失的病毒突变株制备而成的疫苗，如脊髓灰质炎活疫苗。活疫苗。（二）灭活疫苗（二）灭活疫苗是利用某些理化因素处理活病毒，使其失去感染性后制是利用某些理化因素处理活病毒，使其失去感染性后制备而成。如乙型脑炎灭活疫苗。备而成。如乙型脑炎灭活疫苗。（三）亚单位疫苗（三）亚单位疫苗是将病毒中有效的免疫原成分提取制备而成。是将病毒中有效的免疫原成分提取制备而成。（四）基因工程疫苗（四）基因工程疫苗利用基因工程技术制备的病毒疫苗主要有：基因工程利用基因工程技术制备的病毒疫苗主要有：基因工程亚单位疫苗；基因工程载体疫苗；核酸疫苗。亚单位疫苗；基因工程载体疫苗；核酸疫苗。docin/sund
12、ae_mengdocin/sundae_meng二、人工被动免疫二、人工被动免疫v常用制剂有：常用制剂有：v抗病毒免疫血清抗病毒免疫血清:现有抗麻疹、现有抗麻疹、抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，这些抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，这些免疫血清具有显著的预防作用；免疫血清具有显著的预防作用；人免疫球蛋白制剂人免疫球蛋白制剂:包括人血清丙种球包括人血清丙种球蛋白、胎盘球蛋白蛋白、胎盘球蛋白 v特异性免疫球蛋白：特异性免疫球蛋白：从某种病毒感染者从某种病毒感染者的血清中提取、纯化后制备的免疫球蛋白，的血清中提取、纯化后制备的免疫球蛋白，可紧急预防相应的病毒感染，如乙型肝炎可紧急预防相应的病毒感染，如
13、乙型肝炎免疫球蛋白（免疫球蛋白（HBIgHBIg）。）。docin/sundae_mengv1 1抗病毒的化学制剂：抗病毒的化学制剂：目前抗病毒化学药物主要目前抗病毒化学药物主要有核苷类药物。有核苷类药物。（1 1）核苷类药物：）核苷类药物：通过阻抑子代病毒基因的合成与通过阻抑子代病毒基因的合成与表达，抑制病毒复制表达，抑制病毒复制 .常用药物有常用药物有:用于用于DNADNA病毒感染病毒感染:阿糖腺苷、碘尿苷、无环鸟苷阿糖腺苷、碘尿苷、无环鸟苷（阿昔洛韦）、丙氧鸟苷；（阿昔洛韦）、丙氧鸟苷；用于用于HIVHIV感染感染:叠氮脱氧胸苷（叠氮脱氧胸苷（AZTAZT）广谱抗病毒广谱抗病毒:3-3-
14、氮唑核苷，对多种氮唑核苷，对多种RNARNA或或DNADNA病毒有抑病毒有抑制作用。制作用。第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗docin/sundae_mengv（2 2）病毒蛋白酶抑制剂：）病毒蛋白酶抑制剂：通过抑制病毒通过抑制病毒蛋白酶的活性，阻止病毒的复制蛋白酶的活性，阻止病毒的复制.常用药物有印地那韦、利多那韦等，对常用药物有印地那韦、利多那韦等，对HIVHIV有一定抑制作用。有一定抑制作用。v（3 3）其它抗病毒药物：）其它抗病毒药物：金刚烷胺或甲基金刚烷胺或甲基金刚烷胺用于甲型流感的治疗，甲酸磷金刚烷胺用于甲型流感的治疗，甲酸磷霉素用于疱疹病毒感染的治疗。霉素用于疱疹病毒感染的治疗。docin/sundae_mengv2 2干扰素及干扰素诱生剂干扰素及干扰素诱生剂 :干扰素具有广谱抗病毒作用，主要用干扰素具有广谱抗病毒作用，主要用IFN-IFN-，副作用小，对某些病毒性疾病的防，副作用小，对某些病毒性疾病的防治有较好的效果治有较好的效果 。v3 3中草药中草药:黄芪、大青叶、板兰根、贯众。黄芪、大青叶、板兰根、贯众。v4 4其他其他:单克隆抗体、治疗性疫苗、细胞因单克隆抗体、治疗性疫苗、细胞因子等免疫制剂。子等免疫制剂。docin/sundae_meng
