1、第一节第一节 病毒感染的检病毒感染的检查查第2页/共45页病毒感染的检查病毒感染的检查*检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗抗体体:ELISAELISA、免、免疫荧光法等疫荧光法等 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸:PCR:PCR 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包含体光镜检查包含体 分离培养分离培养第3页/共45页一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似，但，但应注意：应注意：1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温低温保存保存，尽快送检尽快送
2、检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清第4页/共45页二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定第5页/共45页二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定 第6页/共45页 1.1.细胞培养细胞培养 第7页/共45页 黄祯祥院士：黄祯祥院士：首创病毒体外培养法新技术，为现代病毒学奠定了基首创病毒体外培养法新技术，为现代病毒学奠定了基础，被称为础，被称为“在医学病毒学的发展史上第二次技术革命在医学病毒学的发展史上第二次技术革命”；第一次；第一次使病毒定量测定的显微镜观察法被革新为肉眼观察法。使病毒定量测定的显微镜观察法被革新为肉眼观察法。第8页/共45页体内常带有潜伏病毒免疫标记技术中
3、草药鸡胚接种（egg inoculation）多种病毒鉴定病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）(3)干扰现象（interference）(3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno-特点：对多种病毒敏感应用：人群免疫情况的调查第一次使病毒定量测定的显微镜观察法被革新为肉眼观察法。流感病毒的初次分离蛋白酶抑制剂四、病毒感染的快速诊断特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒嗜神经病毒卵黄囊（50 tissue culture鸡胚接种（egg inoculation）血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）第9页/共45页第10页/共45页组织组织 组织块组织块 分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞 剪碎剪碎
4、 培养基培养基蛋白酶蛋白酶 第11页/共45页第12页/共45页(2)(2)二倍体细胞培养二倍体细胞培养特点特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒不带病毒，无致瘤潜能无致瘤潜能 可传可传5050代左右代左右第13页/共45页(3)(3)传代细胞培养传代细胞培养第14页/共45页第15页/共45页第16页/共45页第17页/共45页3.3.动物接种动物接种第18页/共45页第19页/共45页第20页/共45页第21页/共45页第22页/共45页风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()pH变化减慢(5)细胞的病毒标记*:免疫荧光/酶标技术等光学显微镜：
5、可见大病毒（痘类病毒），卵黄囊细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）细胞代谢变慢特点：对多种病毒敏感早期抗体检测（IgM）鸡胚接种（egg inoculation）（一）病毒的分离培养*体内常带有潜伏病毒鸡胚接种（egg inoculation）生物制品 动物免疫血清早期抗原的抗体细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒黄祯祥院士：首创病毒体外培养法新技术，为现代病毒学奠定了基础，被称为“在医学病毒学的发展史上第二次技术革命”；缺点：有饲养条件要求，费用高，动物多种病毒鉴定第23页/共45页第2
6、4页/共45页红细胞吸附现象红细胞吸附现象第25页/共45页第26页/共45页(5)(5)细胞的病毒标记细胞的病毒标记*:免疫荧光免疫荧光/酶标技术等酶标技术等(6)(6)病毒核酸病毒核酸*:PCR:PCR等等第27页/共45页2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定第28页/共45页3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定第29页/共45页核酸扩增技术(5)细胞的病毒标记*:免疫荧光/酶标技术等重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒第一次使病毒定量测定的显微镜观察法
7、被革新为肉眼观察法。干扰素和干扰素诱生剂光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）传代细胞系（continuous cell line）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒(5)细胞的病毒标记*:免疫荧光/酶标技术等不带异种蛋白(人源性)病毒中和抗体 病毒失去感染性(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)痘苗病毒、人类疱疹病毒第三节 病毒感染的治疗(6)病毒核酸*:PCR等应用：人群免疫情况的调查(3)干扰现象（interference）3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定第30页/共45页第31页/共45页第32页/共45页第33页
8、/共45页第34页/共45页第35页/共45页(3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno-细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；病毒囊膜表面血凝素(HA)不带病毒，无致瘤潜能应用：尚无敏感细胞的病毒培养核酸疫苗（nucleic acid vaccine）卵黄囊(3)干扰现象（interference）细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；流感病毒的初次分离infectious dose,TCID50）查特异性抗体:ELISA、免疫荧光法等缺点：有饲养条件要求，费用高，动物(5)细胞的病毒标记*:免疫荧光/酶标技术等（50 tissue culture动物：兔、鼠、黑猩猩、
9、猴等为证实所分离的病毒的临床意义羊膜腔病毒中和抗体 病毒失去感染性应用：尚无敏感细胞的病毒培养第36页/共45页第37页/共45页电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普通光学显微镜检查 包涵体包涵体第38页/共45页第39页/共45页第40页/共45页第41页/共45页第42页/共45页 第43页/共45页第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂 中草药中草药 基因治疗剂基因治疗剂 治疗性疫苗治疗性疫苗 干扰
10、干扰RNA 第44页/共45页思考题思考题1.分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？2.常用组织培养法有几种？各有何应用？3.病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？4.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？5.预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？6.诊断病毒的核酸技术有哪些？第45页/共45页风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()动物接种（animal inoculation）不带病毒，无致瘤潜能风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()EAV衣壳抗原抗体特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒埃可病毒(-)可诊断急性感染EAV衣壳抗原抗体病毒成分（抗原或核酸）动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等活疫苗（li
11、ving vaccine）EBV早期抗原抗体鸡胚接种（egg inoculation）第一次使病毒定量测定的显微镜观察法被革新为肉眼观察法。目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒(1)原代和次代细胞培养早期抗体检测（IgM）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒血清丙种球蛋白第一节第一节 病毒感染的检病毒感染的检查查第2页/共45页二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定第5页/共45页第15页/共45页3.3.动物接种动物接种第18页/共45页(5)(5)细胞的病毒标记细胞的病毒标记*:免疫荧光免疫荧光/酶标技术等酶标技术等(6)(6)病毒核酸病毒核酸*:PCR:PCR等等第27页/共45页第32
12、页/共45页第37页/共45页流感病毒的初次分离原则基本与细菌相似，但应注意：常用组织培养法有几种？各有何应用？(3)干扰现象（interference）应用：尚无敏感细胞的病毒培养病毒酶类：如逆转录酶羊膜腔痘苗病毒、人类疱疹病毒蛋白酶抑制剂核酸疫苗（nucleic acid vaccine）光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），(3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno-单层细胞培养（monolayer cell culture）(5)细胞的病毒标记*:免疫荧光/酶标技术等（一）病毒的分离培养*特点：对多种病毒敏感性高非核苷类反转录酶抑制剂特点：特异性低，抗体出现早，消失快缺点：有饲养条件要求，费用高，动物临床诊断少用光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），第39页/共45页
