1、第二章第二章 快速的样品前处理技术快速的样品前处理技术SolidPhaseExtractionSPEAndSolidphaseMicro-ExtractionSPME经典的真空固相萃取装置经典的真空固相萃取装置 SPESPE的分类及一般操作程序的分类及一般操作程序课后思考题课后思考题SPE的操作SPE的操作试样试样20g加入内标，剧烈摇均后放置加入内标，剧烈摇均后放置10min萃取萃取丙酮15ml液液-液萃取：电磁搅拌液萃取：电磁搅拌2min+15min；静置分层（时间视情况而定）静置分层（时间视情况而定）水300ml NaCl3g 正己烷3.5ml小心吸取获得有机相小心吸取获得有机相40摄氏
2、度，氮气吹干摄氏度，氮气吹干乙酸乙酯溶解乙酸乙酯溶解GC/MS微量液微量液-液萃取操作步骤液萃取操作步骤SPMESPME的发展历史的发展历史SPMESPME装置装置o装置外型如一只微量进样装置外型如一只微量进样器，由器，由手柄（手柄（holderholder）和）和萃取头或纤维头（萃取头或纤维头（fiberfiber）两部分构成，萃取头是一两部分构成，萃取头是一根根1 1长，涂有长，涂有吸附剂吸附剂（萃取相）（萃取相）的熔融纤维，的熔融纤维，接在不锈钢丝上，外套细接在不锈钢丝上，外套细不锈钢管（保护纤维不被不锈钢管（保护纤维不被折断），纤维头在钢管内折断），纤维头在钢管内可伸缩或进出，细不锈钢
3、可伸缩或进出，细不锈钢管可穿透橡胶或塑料垫片管可穿透橡胶或塑料垫片进行取样或进样。手柄用进行取样或进样。手柄用于安装或固定萃取头，可于安装或固定萃取头，可永远使用永远使用SPEMSPEM原理原理Fiber SPMEFiber-SPME-HPLC课后思考题课后思考题oSPE、SPME与液-液萃取相比，有何优点？在应用上，有何局限优缺点优缺点图示【大肠菌群】图示【大肠菌群】123456平面平面凹面凹面大肠菌群测试片大肠菌群测试片是一种预先制备好的培养基系统，是一种预先制备好的培养基系统，含有含有VRB 培养基，冷水可溶性凝培养基，冷水可溶性凝胶和胶和TTC指示剂，可增强菌落计指示剂，可增强菌落计数
4、效果。表面覆盖的胶膜，可截数效果。表面覆盖的胶膜，可截留发酵乳糖的大肠菌群产生的气留发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。培养结束后计数红点周围有体。培养结束后计数红点周围有气泡的菌落为大肠菌群数。气泡的菌落为大肠菌群数。培养培养24h 2h后应立即计数，可目测、用标准菌落计数器、显微镜、或自动后应立即计数，可目测、用标准菌落计数器、显微镜、或自动判读仪来计数。红色有气泡的菌落确认为大肠菌群数。培养圆形面积边缘上判读仪来计数。红色有气泡的菌落确认为大肠菌群数。培养圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不作计数。当培养区域出现大量气泡，大量不明显小菌落及边缘以外的菌落不作计数。当培养区域出现大量气泡，大量不明显
5、小菌落或培养区呈暗红色三种情况，表明大肠菌群的浓度较高，需要进一步稀释样或培养区呈暗红色三种情况，表明大肠菌群的浓度较高，需要进一步稀释样品来获得准确的读数。品来获得准确的读数。3MTM快速涂抹棒（快速涂抹棒（Quick Swab)干式取样干式取样 当待测表面潮湿时当待测表面潮湿时1.标记每个涂抹棒标记每个涂抹棒2.拧扭管子使球茎拧扭管子使球茎末端和涂抹棒管相末端和涂抹棒管相连处分开连处分开3.30度角缓慢并全度角缓慢并全面涂抹待测表面面涂抹待测表面,每涂抹一次注意翻每涂抹一次注意翻转涂抹棒头的方向转涂抹棒头的方向4.取样后取样后,完整地完整地把涂抹棒放回管中把涂抹棒放回管中5.用大拇指掰断球
6、茎用大拇指掰断球茎中的红色阀门中的红色阀门,听到听到啪的一声啪的一声,阀门打开阀门打开,Leetheen 肉汤流入肉汤流入管中和浸湿涂抹棒管中和浸湿涂抹棒6.用力挤压球茎末用力挤压球茎末端端,使使Leetheen 肉汤肉汤流入管中流入管中7.在实验室里在实验室里,充充分振荡涂抹棒至分振荡涂抹棒至少少10分钟分钟,使菌与使菌与涂抹棒分离涂抹棒分离8.在管壁上挤拧出在管壁上挤拧出涂抹棒头上的内容涂抹棒头上的内容物物,按通常工业用标按通常工业用标准方法处置弃去涂准方法处置弃去涂抹棒抹棒9.小心地倾注管中小心地倾注管中的全部内容物到的全部内容物到3M PetrifilmTM测试片测试片上上10.按包装
7、内说明按包装内说明培养测试片培养测试片 3MTM快速涂抹棒（快速涂抹棒（Quick Swab)湿式取样湿式取样 当待测表面干燥时当待测表面干燥时1.标记每个涂抹棒标记每个涂抹棒4.拧扭管子使球茎拧扭管子使球茎末端和涂抹棒管相末端和涂抹棒管相连处分开连处分开5.30度角缓慢并全面度角缓慢并全面涂抹待测表面涂抹待测表面,每涂抹每涂抹一次注意翻转涂抹棒一次注意翻转涂抹棒头的方向头的方向6.取样后取样后,完整地把完整地把涂抹棒放回管中涂抹棒放回管中2.用大拇指掰断球茎中用大拇指掰断球茎中的红色阀门的红色阀门,听到啪的听到啪的一声一声,阀门打开阀门打开,Leetheen 肉汤流入管中和肉汤流入管中和浸湿
8、涂抹棒浸湿涂抹棒3.用力挤压球茎末用力挤压球茎末端端,使使Leetheen 肉汤肉汤流入管中流入管中7.在实验室里在实验室里,充分振充分振荡涂抹棒至少荡涂抹棒至少10分钟分钟,使菌与涂抹棒分离使菌与涂抹棒分离8.在管壁上挤拧出涂在管壁上挤拧出涂抹棒头上的内容物抹棒头上的内容物,按按通常工业用标准方法通常工业用标准方法处置弃去涂抹棒处置弃去涂抹棒9.小心地倾注管中小心地倾注管中的全部内容物到的全部内容物到3M PetrifilmTM测试片测试片上上10.按包装内说明按包装内说明培养测试片培养测试片 Hygicult Hygicult 琼脂载片是一块两面覆有为特定细菌生长的琼脂培养基的琼脂载片是一
9、块两面覆有为特定细菌生长的琼脂培养基的塑料载片并根据欧盟（塑料载片并根据欧盟（EUEU）相关法规而设计，用来检测各类表面、原材）相关法规而设计，用来检测各类表面、原材料、食品原料中的微生物（菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌）存在料、食品原料中的微生物（菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌）存在状况（其使用不会影响被采样本的质量）。该培养基上另含有吐温和卵状况（其使用不会影响被采样本的质量）。该培养基上另含有吐温和卵磷脂以中和残留的消毒剂对微生物生长的影响。磷脂以中和残留的消毒剂对微生物生长的影响。HygicultHygicult琼脂载片检测微生物介绍琼脂载片检测微生物介绍TPC：菌落总数 CF：大肠菌群 E：大肠杆菌 Y&F：霉菌和酵母 操作步骤操作步骤接种培养判读第一步第一步第二步第二步第三步第三步其他几种微生物菌落生长情况及结果判读其他几种微生物菌落生长情况及结果判读 TPC E E/beta-GUR Y&F 细菌总数细菌总数 肠杆菌科肠杆菌科 大肠杆菌大肠杆菌 酵母菌酵母菌&真真菌菌
