1、麻疹麻疹/风疹风疹/腮腺炎腮腺炎/水痘水痘标本采集、处理、保存及运送标本采集、处理、保存及运送湖南省疾病预防控制中心微生物检验科2012.11.29主要内容 方案中关于标本的要求 病毒感染过程与机体免疫反应 操作流程 注意事项u每个散发病例都要采集血清学标本来确诊病例；每个散发病例都要采集血清学标本来确诊病例；u出疹后出疹后3天内采集的血标本检测麻疹天内采集的血标本检测麻疹IgM抗体阴性或可疑的抗体阴性或可疑的病例，应在出疹后病例，应在出疹后4-28天采集第天采集第2份血标本份血标本；u对每起麻疹暴发疫情至少采集对每起麻疹暴发疫情至少采集5例暴发早期病例血清学标本例暴发早期病例血清学标本（5例
2、以下应全部采集）例以下应全部采集）；u实验室血清检测结果实验室血清检测结果7天内（从标本采集至网上结果录入）天内（从标本采集至网上结果录入）上报至麻疹监测信息系统。上报至麻疹监测信息系统。麻疹消除前后血清学监测工作的要求麻疹消除前后血清学监测工作的要求u基因分型需要在有资质的实验室进行基因分型需要在有资质的实验室进行 通过盲样考核通过盲样考核 u每个散发病例都要采集病原学标本鉴定病毒来源每个散发病例都要采集病原学标本鉴定病毒来源-消除阶消除阶段；段；u要在接触病例的第一时间采集标本；要在接触病例的第一时间采集标本；u每次爆发要针对每个可能的传播链都要采集标本，以鉴别每次爆发要针对每个可能的传播
3、链都要采集标本，以鉴别每个传播链的传播来源；每个传播链的传播来源；u各省要提高散发和暴发疫情病原学标本采集率、病毒分离各省要提高散发和暴发疫情病原学标本采集率、病毒分离率和率和基因型别的及时鉴定率基因型别的及时鉴定率-引入分子生物学方法引入分子生物学方法；u强调病毒分离的重要性：强调病毒分离的重要性：仍要进行病毒分离！仍要进行病毒分离！u各项指标严格按照麻疹监测方案执行：各项指标严格按照麻疹监测方案执行：病毒株的及时上送病毒株的及时上送；u有能力进行基因分型的省份，须及时将原始序列峰图结果有能力进行基因分型的省份，须及时将原始序列峰图结果上报上报NML,同时按月上送病毒分离物至同时按月上送病毒
4、分离物至NML进行复核；进行复核；麻疹消除前后病毒学监测工作的要求麻疹消除前后病毒学监测工作的要求u每年采集每年采集10份左右典型散发病例病原学标本，并同时采集份左右典型散发病例病原学标本，并同时采集血清学标本，分离分析野病毒株特征，获得基因特征本底血清学标本，分离分析野病毒株特征，获得基因特征本底资料资料u每次爆发每次爆发从从爆发爆发的早期和晚期采集的早期和晚期采集510份标本份标本，分析野分析野毒株，监测它们的分布和流行毒株，监测它们的分布和流行腮腺炎、水痘病毒学监测工作的要求腮腺炎、水痘病毒学监测工作的要求没有并发症的首次感染麻疹病毒的过程没有并发症的首次感染麻疹病毒的过程 天天过程过程
5、0呼吸道飞沫中的麻疹病毒接触鼻咽部的上皮细胞表面。感染上皮细胞和呼吸道飞沫中的麻疹病毒接触鼻咽部的上皮细胞表面。感染上皮细胞和病毒复制。病毒复制。1-2病毒传播至局部淋巴结病毒传播至局部淋巴结2-3初次病毒血症初次病毒血症3-5麻疹病毒在呼吸道上皮，局部淋巴结和远端组织的复制麻疹病毒在呼吸道上皮，局部淋巴结和远端组织的复制5-7第第2次病毒血症次病毒血症7-11感染皮肤和其他组织，包括呼吸道感染皮肤和其他组织，包括呼吸道11-14病毒到达血液，呼吸道，皮肤和其他器官病毒到达血液，呼吸道，皮肤和其他器官15-17病毒血症减轻以至停止，随着免疫屏障的建立，病毒及其产物迅速减少。病毒血症减轻以至停止
6、，随着免疫屏障的建立，病毒及其产物迅速减少。急性麻疹病毒感染的免疫反应急性麻疹病毒感染的免疫反应 在鼻咽标本中可以检测到麻疹病毒在血标本中可以检测到麻疹病毒免疫抑制出疹后天数出疹感染相对水平在鼻咽标本中可以检测到麻疹病毒在血标本中可以检测到麻疹病毒免疫抑制出疹后天数出疹感染相对水平在鼻咽标本中可以检测到麻疹病毒在血标本中可以检测到麻疹病毒免疫抑制出疹后天数出疹感染相对水平典型风疹病毒感染的临床特征典型风疹病毒感染的临床特征疾病发生的时间进程疾病发生的时间进程 天进程0患者呼吸道分泌物中的风疹病毒侵入接触者鼻咽上皮表面而感染易感者。在呼吸道上皮组织中建立局部感染，然后病毒传播到局部淋巴结。1-2
7、2病毒在鼻咽部和局部淋巴结复制3-8病毒首次从鼻咽部排出6-20病毒血症8-14在皮肤和其它部位出现感染灶10-17大量的病毒血症和病毒尿症10-24大量的病毒自鼻咽部排出（在出疹前3天至疹后7天）17-19病毒血症减少，随后停止典型风疹病毒感染的免疫反应典型风疹病毒感染的免疫反应 麻疹麻疹/风疹控制和消除阶段中实验室的作用风疹控制和消除阶段中实验室的作用 阶段 监测活动 控制*通过IgM检测，在暴发期间证实最初的病例*从选择的病例中分离分析野病毒株特征，获得基因特征本底资料预防暴发和消除*证实可疑病例的临床诊断，早期发现病毒循环。*从选择的病例中分离分析野病毒株，鉴定正在循环的基因型，追溯病
8、毒传播途径，了解全球麻疹和风疹病毒基因型分布和循环，帮助评估免疫策略的效果*在必要的情况下，建立人群血清流行病调查，帮助预测暴发。由于出疹后由于出疹后3-5天内采集的标本病毒分离天内采集的标本病毒分离率较高，因此用于病毒分离标本的采集不率较高，因此用于病毒分离标本的采集不能等到对疑似病例进行实验室证实之后才能等到对疑似病例进行实验室证实之后才开始开始，建议在首次接触病人时同时采集血，建议在首次接触病人时同时采集血清学标本、咽拭子标本和尿液标本清学标本、咽拭子标本和尿液标本标本采集的记录标本采集的记录 所有采集到的标本都要有记录，最好使用标准化实验室表格。下表中提供了一个标准的实验室表格范例。标
9、准的实验室表格应至少包含以下信息：唯一的识别码（采用统一格式）；实验室编码；病人姓名；年龄（或者用标准格式标明出生日期）；省份（或地区）；县或区；国家编码；麻疹和（或）风疹疫苗的最后接种日期；出疹日期；病人是否符合病例定义？标本类型；标本采集日期；标本送出日期。用于抗体检测的血清学标本采集与处理用于抗体检测的血清学标本采集与处理 采集方法与采集量：静脉穿刺取血收集于无菌管中，儿童和成人取5ml，婴儿取2ml，幼儿取适量 处理：全血在进行血清分离前可置48 保存24小时，但不可冷冻保存。待全血凝集后，于1500rpm/20分钟分离血清，在无菌条件下，将血清移至外螺旋盖带垫圈的无菌管中，避免吸到红
10、血球 保存和运输：无菌分离的血清在运输之前应置于48保存，保存时间不能超过7天。如果需要保存更长时间，则应置于-20或更低温度冷冻保存，运送过程中要放置冰袋保温。要求保存所有血清学标本以备复核要求保存所有血清学标本以备复核咽拭子标本采集咽拭子标本采集避免在进食后两小时内取标本；患者对光而坐，头部上仰口张大；口腔进入伸向鼻咽部，到达咽后壁涂擦取标本；用无菌棉签适度用力擦拭腭弓两侧、咽、扁桃体；注意棉签不触及其他部位；在酒精灯火焰上消毒试管口；棉签插入试管、塞紧；采完后迅速把拭子放到有旋转盖的并装有病毒保存液的带垫圈的螺口塑料冻存管中,在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖。在48小时内冷藏运输到实验室
11、（4-8）。不同病毒咽拭子标本采集的要求不同病毒咽拭子标本采集的要求 麻疹病人可采集柯氏斑于同一病毒采样管中，以提高病毒分离阳性率；腮腺炎病人可通过咬另一根干净棉签后收集唾液于同一病毒采样管中，以提高病毒分离阳性率；水痘带状疱疹病人可通过无菌采集病人疱疹液于同一病毒采样管中，以提高病毒分离阳性率。采咽拭子的器材和容器采咽拭子的器材和容器尿液标本采集尿液标本采集收集10-50ml中段尿液标本于无菌离心管中，注意不收集晨尿；1500rpm，4离心5分钟，沉淀细胞。（最好在收集标本后24小时内离心）；弃上清，并用2-3ml病毒运输液重悬沉淀，并保存在带螺旋盖的冻存管中，-70保存；在离心重悬沉淀前不
12、要冻融尿液标本。备注：风疹病毒不适宜病原学标本的处理与保存病原学标本的处理与保存市级实验室收到病原学标本（鼻咽拭子、尿液重市级实验室收到病原学标本（鼻咽拭子、尿液重悬液）后，首先加入悬液）后，首先加入2%三抗处理，然后将标本三抗处理，然后将标本分成分成3份，份，1份约份约200ul用于核酸检测，用于核酸检测，1份约份约1ml用于病毒分离，用于病毒分离，1份约份约2ml用于保存用于保存用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测 24小时内能检测的标本，置于小时内能检测的标本，置于4保存；保存；不能于不能于24小时内接种的标本，置于小时内接种的标本，置于-
13、70或以或以下保存。下保存。注：标本运送期间应避免反复冻融。注：标本运送期间应避免反复冻融。病原学标本送检的时限要求病原学标本送检的时限要求能承担病毒分离工作的麻疹实验室能承担病毒分离工作的麻疹实验室在接到标本后在接到标本后28天内天内完成病毒分离完成病毒分离工作，分离到的毒株在工作，分离到的毒株在14天内送中国疾病预防控制中心病毒病预防控制天内送中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所麻疹实验室（以下简称国家麻疹实验室）进行病毒基因定型所麻疹实验室（以下简称国家麻疹实验室）进行病毒基因定型；不能承担病毒分离工作的实验室在接到标本后不能承担病毒分离工作的实验室在接到标本后7天内天内将所有处理好的将
14、所有处理好的病原学标本送至湖南省疾病预防控制中心麻疹实验室进行病毒分离，并病原学标本送至湖南省疾病预防控制中心麻疹实验室进行病毒分离，并完整填写标本送检单，附上核酸检测结果；完整填写标本送检单，附上核酸检测结果；特殊标本，如国外输入病例、暴发疫情病例、媒体关注、社会影响较特殊标本，如国外输入病例、暴发疫情病例、媒体关注、社会影响较大的病例、疫苗相关病例等，在标本采集后要快速送检（一般要求为标大的病例、疫苗相关病例等，在标本采集后要快速送检（一般要求为标本采集后本采集后48小时内小时内）至省麻疹实验室进行核酸检测和病毒分离。省麻疹）至省麻疹实验室进行核酸检测和病毒分离。省麻疹实验室在完成核酸检测
15、后进行病毒分离和标本上送至国家麻疹实验室进实验室在完成核酸检测后进行病毒分离和标本上送至国家麻疹实验室进行行病毒基因定型病毒基因定型标本送检的生物安全要求标本送检的生物安全要求标本放入专用运输箱内，四周放置冰袋，空隙部分用具有标本放入专用运输箱内，四周放置冰袋，空隙部分用具有吸水和缓冲性能的材料充填，所有运送容器外必须具有生物吸水和缓冲性能的材料充填，所有运送容器外必须具有生物危险标识。危险标识。标本的运送应遵循标本的运送应遵循病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院第（国务院第424号令）和卫生部有关规定号令）和卫生部有关规定。实验室生物安全实验室生物安全 实验室必须具备麻疹、风疹、腮腺炎、水痘病毒检测的实验条件，实验室必须具备麻疹、风疹、腮腺炎、水痘病毒检测的实验条件，从事麻疹、风疹、腮腺炎、水痘检测的技术人员必须经过生物安全培从事麻疹、风疹、腮腺炎、水痘检测的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能训和具备相应的实验技能
