1、免疫学检测技术一、一、免疫学检验原理免疫学检验原理抗原抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度特异性特异性结合结合反应。由于实验所用的抗体存在于血清中，故又称血清学反应。由于实验所用的抗体存在于血清中，故又称血清学反应（反应（serological reaction)serological reaction)应用：应用：用已知抗原检测未知抗体；用已知抗原检测未知抗体；用已知抗体检测未知抗原：用已知抗体检测未知抗原：定性或定量检测体内各种分子；定性或定量检测体内各种分子；用已知抗体检测半抗原物质。用已知抗体检测半抗原物质。1.特异性和交叉反应
2、 特异性：一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体结合。分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。（一）抗原-抗体反应的特点交叉反应交叉反应（cross reactioncross reaction）性：若两种抗原分子有一个或）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。与另一种抗原发生反应。结合价：天然抗原分子表面一般含多种抗原决定基，可与多个抗体分子结合，为多价。单体形式的抗体分子有两个Fab段，能结合两个相同的抗原决定基，为两价。2.比例性比例合适：比例合适：若抗原、抗
3、体的数量比例合适，抗体分子的两个若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个FabFab段分别与两个抗原段分别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体网格状复合体，则反应体系中基本不存在游，则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。前带现象（前带现象（prozone）和后带现象）和后带现象(postzone)Ab过剩和过剩和Ag过剩过剩前带现象（prozone）和
4、后带现象(postzone)Ab过剩和Ag过剩参考值：AFP25ug/L（ELISA）2-微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白；急性HBV感染恢复期ASO250U/L主要用于连续的随访检测，可用于恶性肿瘤手术后的疗效观察及预后判断，也可用于对化疗病人的疗效观察。本中抗原含量越多。的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比RIA快。参考值：血清t-PSA300ng/mL，但也有18%的病人AFP并不升高。反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性（3）生殖腺胚胎性肿瘤患者血清中AFP浓度可见升高。作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定 检测HIV
5、-1和HIV-2第二步:指示系统利用剩余补体的反应用已知抗体检测未知抗原：将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即发生肉眼可见的凝集。手术和化疗后期水平很快下降。此法适用于检验各种二价或二价以上的大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。乙肝标志物中HBsAb的检测常采用本法。1、2-微球蛋白（2-MG）（1）酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)（二）、抗原-抗体反应的影响因素妊娠免疫诊断试验妊娠免疫诊断试验 孕妇尿中，绒毛膜促性
6、腺激素（孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCGHCG）含量明显增高。（）含量明显增高。（HCGHCG是可是可溶性抗原溶性抗原 ）反之，非孕妇尿中反之，非孕妇尿中HCGHCG含量甚微，不足以消耗掉抗含量甚微，不足以消耗掉抗HCGHCG抗体。抗体。HCG检测为间接凝集试验的应用Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细菌滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成出现肉眼可见的沉淀物的现象称为沉淀反应。沉淀反应（Precipitation Tests）用于沉淀反应中的抗原称沉淀原(precipitonogen)。用于沉淀反应中的抗体称沉淀素（precipitin)。大多沉淀反应大多沉淀反应多
7、用半固体琼脂凝胶作为介质进行多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散琼脂扩散或或免疫扩散免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。1 1单向免疫扩散单向免疫扩散(single immunodiffusion)(single immunodiffusion)2 2双向免疫扩散双向免疫扩散(double immunodiffusion)(double immunodiffusion)沉淀反应单向免疫扩散单向免疫扩散(Single Immunodiffusion)(Single Immunodi
8、ffusion)是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的抗原孔为中心的沉淀环沉淀环，环的直径，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清于测定血清IgGIgG、IgMIgM、IgA IgA 和和 C C 3 3等的含量。等的含量。含抗体的凝胶沉淀环双向免疫扩散双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion)Double Immunod
9、iffusion)是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成相遇，在比例合适处形成沉淀线沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性体的定性 、组成和两种抗原相关、组成和两种抗原相关性分析的检测。性分析的检测。补体结合试验（Complement Fixation test,CFT)补体结合试验(complement fixation test，C
10、FT)将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应 系统中抗原或抗体的传统方法。5 450/630nm下测定OD值灵敏度明显高于放射免疫分析，约为放射免疫分析的10100倍。（2）加入稀释的待测标本：孵育后样品中的IgM抗体被、混合溶液，使之与固相抗体反应，孵育洗 涤。亲和力(affinity)是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。1%的患者AFP300ng/mL，但也有18%的病人AFP并不升高。可见的反应阶段：反应慢，出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象。（2）加入稀释的待测标本：孵育后样品中的IgM抗体被、IRMA）根据此特点，可借助亲和层析法纯
11、化抗原或抗体。用已知抗体检测未知抗原：交叉反应（cross reaction）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。抗链球菌溶血素“O”（ASO）（2）免疫放射分析法（immunoradiometric assay,关键在于根据抗原结构的不同制备酶标抗原。（3）单独使用t-PSA和f-PSA升高来诊断前列腺癌时很难排除前列腺肥大对前列腺癌诊断的影响，特别是当t-PSA在5ng/mL20ng/mL时。亲和素-生物素-ELISA法指示系统（溶血系统）：SRBC与相应溶血素。（二）、抗原-抗体反应的影响因素（1）原发性肝细胞癌患者血清中A
12、FP浓度明显升高，约77.急性HBV感染早期，传染性强抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，与两者的浓度和比例密切相关颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应(agglutination)。反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗体。随着年龄的增大，血清PSA会逐渐增加。此法适用于检验各种二价或二价以上的大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。急性HBV感染早期，传染性强胎儿发育早期，由肝脏和卵黄囊合成的一种血清糖蛋白，电泳时位于白蛋白和1球蛋白之间，胎儿出生后不久即逐渐消失。分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间
13、空间构型的互补性。HIV抗体不确定（）此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种类等均可影响抗原-抗体反应。是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。风湿热、急性肾小球肾炎、结节性红斑、猩红热、急性扁桃体炎等ASO明显升高。用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。PSA属于酶类肿瘤标记物，具有糜蛋白酶样和胰蛋 酶的
14、活性是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。（1）原发性肝细胞癌患者血清中AFP浓度明显升高，约77.在系统性红斑狼疮活动期，造血系统恶性肿瘤，如慢性淋巴细胞性白血病时，尿液2-MG也有升高。(平均 8-10 年)试验原理作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定5种成分，3个系统 反应系统（溶菌系统）：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原）补体系统：指示系统（溶血系统）：SRBC与相应溶血素。试验时常将其预先结合，成为致敏绵羊红细胞（sensitized sheep red blood cell,SRBCS）。溶菌系统反应分
15、两步进行 第一步:反应系统与补体的作用 第二步:指示系统利用剩余补体的反应不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为试验阴性 已知抗原加入血清（检测抗体）已知抗原加入血清（检测抗体）加入标准量补体加入包被抗体的红细胞检测红细胞溶解情况AgPatientsserum AbNo AbAg 用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。免疫标记技术（Immunolabelling technique）用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标
16、本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。1免疫荧光法(immunofluorescence,IF)（1 1）直接荧光法：）直接荧光法：荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。该法荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。该法优点是特异性高，缺点是检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。优点是特异性高，缺点是检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。（2 2）间接荧光法：）间接荧光法：用一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的用一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。该法优点是敏感度比直接法高，制备一种荧光二抗进行检测。该法优点是敏感度比直接法高，制备一种荧光素标
17、记的二抗即可用于多种抗原的检测素标记的二抗即可用于多种抗原的检测,但非特异性反应亦增强。但非特异性反应亦增强。免疫荧光法分类免疫荧光法图示 此法将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，借助酶作用于底物的显色反应判定结果。应用酶标测定仪测定光密度（OD）值可反映抗原含量，灵敏度达ng/ml甚至pg/ml水平。常见的标记物为：辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)常用的方法如下：常用的方法如下：（1 1）酶联免疫吸附试验）酶联免疫吸附试验 (enzyme linked (enzyme linked immunosorben
18、t assayimmunosorbent assay，ELISA)ELISA)是酶免疫测定中应用最广的技术，用于测定可溶性抗原或抗体。优点：灵敏度高、操作简便、稳定性强，可自动化检测，从而被广泛用于检测多种病原体抗原或抗体、血液及其他体液中微量蛋白成分、细胞因子等。分类：（1 1）放射免疫分析法）放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)(radioimmunoassay,RIA)（2 2）免疫放射分析法（）免疫放射分析法（immunoradiometric assay,immunoradiometric assay,IRMA IRMA）3放射免疫技术 乃用放射性核素标记抗原或
19、抗体进行免疫学检测。该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原-抗体反应的特异性，检测灵敏度达pg水平。常用于标记的放射性核素为125I和131I，分为液相和固相两种方法。该法常用于测定微量物质，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素，吗啡、地高辛、IgE等。放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)属于非竞争性放射性配体结合分析技术。他与属于非竞争性放射性配体结合分析技术。他与RIARIA为代表为代表的竞争性放射性配体分析技术的区别主要有两点：一，放射性的竞争性放射性配体分析技术的区别主要有两点：一，放射性核素标记的是抗体而不是抗原，其二是采用过量抗体而不是限核素标记的是抗体而不是
20、抗原，其二是采用过量抗体而不是限量抗体。量抗体。RIMARIMA与与RIARIA相比较，提高了检测的灵敏度并使检测范围相比较，提高了检测的灵敏度并使检测范围增宽，特异性和精确度进一步提高。增宽，特异性和精确度进一步提高。免疫放射分析法（immunoradiometric assay,IRMA）免疫放射分析法有以下特点：1.1.以标记抗体作为示踪剂以标记抗体作为示踪剂2.2.反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性 的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比RIARIA快。快。3.3.灵敏度明显高于放射免疫分析
21、，约为放射免疫分析的灵敏度明显高于放射免疫分析，约为放射免疫分析的1010100100倍。倍。4.4.标准曲线工作范围宽。标准曲线工作范围宽。5.5.特异性高。特异性高。6.6.稳定性好。稳定性好。金标记免疫技术 胶体金标记技术(Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示踪标记物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。其升高原因主要是由于受损伤的肝细胞再生而形成幼稚化细胞，幼稚化的肝细胞具有产生AFP的能力。可见的反应阶段：反应慢，出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象。用已知抗原检测未知抗体；反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性用于凝集反应中的抗原称
22、凝集原(agglutinogen)。类风湿因子（rheumatoid factor,RF）（2）加稀释的受检样本，其中的特异抗体与固 相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物，孵育洗涤。（1）原发性肝细胞癌患者血清中AFP浓度明显升高，约77.将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应急性HBV感染早期，传染性强参考值：CA12-5250U/L250U/L时，才被认为有诊断价值。时，才被认为有诊断价值。抗链球菌溶血素“O”（ASO）类风湿因子（rheumatoid factor,RF）类风湿性关节炎（RA）是由自身抗体免疫复合物引起的自身免疫性疾病。类风湿因子是由于感染因子（细菌、病毒等）引起体内产生
23、的以变性IgG为抗原的一种抗体，故又称抗抗体。原理：原理：将变性将变性IgGIgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在与待测血清中的与待测血清中的RFRF相遇时，即发生肉眼可见的凝集。相遇时，即发生肉眼可见的凝集。参考值：参考值：正常人正常人1 1：2020稀释血清为阴性。稀释血清为阴性。类风湿因子（rheumatoid factor,RF）临床意义：临床意义：1.1.约约90%90%类风湿性关节炎（类风湿性关节炎（RARA）患者的）患者的RFRF呈阳性。呈阳性。2.2.某些自身免疫病，如冷球蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、某些自身免疫病，
24、如冷球蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、SLESLE等。等。3.3.一些其他疾病如血管炎、一些其他疾病如血管炎、肝病肝病、慢性感染也可出现、慢性感染也可出现RFRF。类风湿因子（rheumatoid factor,RF）酶联免疫吸附试验（ELISA）原理：原理：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。结合在固相载体上的酶量与标本中受检
25、物质的量成一定的比例。结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关与标本中受检物质的量直接相关 。ELISA主要有以下几种类型：1.1.双抗体夹心法测抗原（常用）双抗体夹心法测抗原（常用）2.2.双抗原夹心法测抗体双抗原夹心法测抗体3.3.间接法测抗体（常用）间接法测抗体（常用）4.4.竞争法测抗原竞争法测抗原5.5.竞争法测抗体竞争法测抗体6.6.捕获包被法测抗体捕获包被法测抗体7.7.亲和素亲和素-生物素生物素 ELISAELISA法法包被特异
26、性抗体加入待测样品加酶标特异性抗体底物显色洗涤孵育洗涤孵育双抗体夹心法测抗原 待测抗原须有两个可以与抗体结合的部位，其一端与包被于固相载体上的抗体结合，另一端与酶标记的特异性抗体结合。此法适用于检验各种二价或二价以上的大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。不能用于分子量小于5000的半抗原或小分子单价抗原的测定。双抗原夹心法测抗体 反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定。乙肝标志物中HBsAb的检测常采用本法。关键在于根据抗原结构的不同制备酶标抗原。间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法。原理
27、：利用酶标记的抗体检测已与固相结合的 受检抗体，故称为间接法。操作步骤：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相 抗原，洗涤。（2）加稀释的受检样本，其中的特异抗体与固 相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物，孵育洗涤。（3）加酶标抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶，孵育洗涤。（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。间接法的特点 本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗体检测相应抗体。间接法成功的关键在于抗原的纯度。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质。若抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响
28、包被效果。竞争法测抗原 操作步骤：（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗 体洗涤。（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的 混合溶液，使之与固相抗体反应，孵育洗 涤。（3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原 最多，故颜色最深。待测管颜色越淡，表示标 本中抗原含量越多。参考管颜色深度与待测管 颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。竞争法测抗体 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。捕获包被法测抗体 样品中针对某些抗原的
29、特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法。先将所有样品IgM（包括特异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原-抗体反应的特异性，检测灵敏度达pg水平。抗链球菌溶血素“O”（ASO）天然抗原分子表面一般含多种抗原决定基，可与多个抗体分子结合，为多价。补体系统：抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度特异性结合反应。的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比RIA快。常见的标记物为：辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）（1）原发性肝细胞癌患者血清中AFP浓度明显升
30、高，约77.参考值：CA19-9300ng/mL，但也有18%的病人AFP并不升高。（2）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者AFP浓度有不同程度的升高，但其水平通常低于100ng/mL。其升高原因主要是由于受损伤的肝细胞再生而形成幼稚化细胞，幼稚化的肝细胞具有产生AFP的能力。但随着受损肝细胞的修复，AFP逐渐恢复正常。（3）生殖腺胚胎性肿瘤患者血清中AFP浓度可见升高。（4）妇女妊娠3个月后，血清AFP浓度开始升高，78个月时达到高峰，一般在400g/L以下，分娩后3周恢复正常。若孕妇血清中AFP异常升高，应考虑胎儿神经管缺损畸形的可能性。2 2、癌胚抗原、癌胚抗原CEACEA 是一种可溶性
31、糖蛋白，胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、是一种可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏。胃肠道恶性肿瘤时可见血清胰腺和肝脏。胃肠道恶性肿瘤时可见血清CEACEA升高，在乳腺癌、升高，在乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤中也可出现表达，并分泌于体液中。肺癌及其他恶性肿瘤中也可出现表达，并分泌于体液中。（1）血清CEA升高主要见于结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌，其他恶性肿瘤也有不同程度的阳性率。（2）随着临床应用的发展，CEA变得越来越广谱。主要用于连续的随访检测，可用于恶性肿瘤手术后的疗效观察及预后判断，也可用于对化疗病人的疗效观察。（3）某些良性疾病，如直肠息肉、结肠炎、
32、肝硬化、肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高，但阳性率较低。（4）98%的非吸烟者CEA5ng/mL 临床意义1、糖类抗原糖类抗原12-512-5（CA12-5CA12-5）是卵巢癌和子宫内膜癌的肿瘤标志物 分子量为20万的糖蛋白 可被单克隆抗体OC125所识别 在卵巢肿瘤上皮和Mullerian副肾管来 源的病理和正常组织中表达，其生物学功能不明。（1）卵巢癌病人血清中CA125水平明显升高。手术和化疗后期水平很快下降。当复发时，在临床确诊前几个月便可呈现CA125增高，尤其卵巢癌转移患者的血清CA125更明显高于正常参考值。（2）其他非卵巢恶性肿瘤也有一定阳性率，如乳腺癌40%，胰腺癌50%，
33、胃癌47%，肺癌41.4%，结肠直肠癌34.2%，其他妇科肿瘤43%。（3）非恶性肿瘤，如子宫内膜异位症、盆腔炎、卵巢囊肿、胰腺炎、肝炎、肝硬化等疾病也有不同程度升高，但阳性率较低，诊断时应注意鉴别。（4）在许多良性和恶性胸腹水中发现有CA125升高，羊水中也能检出较高浓度的CA125。（5）早期妊娠的头3个月内，也有CA125升高的可能。临床意义2 2、糖类抗原糖类抗原1515-3-3（-CA15-3CA15-3是乳腺癌的最重要的特异性标志物。是乳腺癌的最重要的特异性标志物。30%-50%30%-50%的乳腺癌患者的的乳腺癌患者的CA15-3CA15-3明显升高，是乳腺癌患者明显升高，是乳腺
34、癌患者诊断和监测术后复发、观察疗效的最佳指标。诊断和监测术后复发、观察疗效的最佳指标。（1）乳腺癌患者常有CA15-3升高，但在乳腺癌的初期敏感性较低，约为60%，转移性乳腺癌阳性率可达80%。CA15-3可以作为原发性乳腺癌的辅助诊断指标，也可以作为手术后随访，监测肿瘤复发、转移的指标。（2）其他恶性肿瘤，如肺癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、原发性肝癌等也有不同程度的阳性率。（3）肝脏、胃肠道、肺、乳腺、卵巢等非恶性肿瘤疾病，阳性率一般低于10%。临床意义3 3、糖类抗原糖类抗原19-919-9（CA19-9CA19-9）CA19-9是胰腺、胃、胆囊和肠癌的标记物。（1）胰腺癌、
35、胆囊癌、胆管壶腹癌患者血清CA19-9水平明显升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清CA19-9浓度可达40万U/mL，阳性率约为74.9%，是重要的辅助诊断指标。（2）胃癌阳性率约为50%，结肠癌阳性率约为60%，肝癌阳性率约为64.6%。（3）急性胰腺炎、胆囊炎、胆汁淤积性胆管炎、肝硬化、肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，应注意鉴别。临床意义酶类肿瘤标志物前列腺特异性抗原（前列腺特异性抗原（PSAPSA）PSA是前列腺的特异性标记物 属于器官特异性抗原，不具备肿瘤特异性 PSA属于酶类肿瘤标记物，具有糜蛋白酶样和胰蛋 酶的活性 PSA在正常男性含量小于4 g/L 参考值：血清t-PSA
36、4.0ug/L（ELISA）f-PSA0.2（1）PSA是前列腺癌标志物。随着年龄的增大，血清PSA会逐渐增加。（2）前列腺肥大、前列腺炎、肾胀和泌尿生殖系统的疾病患者，也可见t-PSA和f-PSA水平轻度升高，必须结合其他检查进行鉴别。（3）单独使用t-PSA和f-PSA升高来诊断前列腺癌时很难排除前列腺肥大对前列腺癌诊断的影响，特别是当t-PSA在5ng/mL20ng/mL时。此时应用f-PSA/t-PSA来判断。根据文献报道f-PSA/t-PSA25%时提示前列腺增生。其特异性达90%，正确率80%。（4）女性乳腺癌部分患者也会PSA阳性。临床意义 糖蛋白类激素，由蛋白核心与位于羧基端的
37、以唾液酸为终止的侧链组成 由合胞体滋养层细胞产生 被证实是一种原始物质 (可作为一种有用的肿瘤标志物)（1）-HCG在妊娠妇女血液中有较高水平，胎儿出生后2周降至正常水平。（2）在绒毛膜上皮癌以及生殖系统的恶性肿瘤等中，-HCG可见升高，经手术或化疗后降低。因此，-HCG可作为临床治疗的监测指标。（3）-HCG在胰腺癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、肝癌、支气管癌、乳腺癌、睾丸癌也有不同程度的阳性率。（4）当子宫内膜异位症、卵巢囊肿等非肿瘤状态时，-HCG含量也会增高。临床意义蛋白类肿瘤标志物1 1、2-2-微球蛋白（微球蛋白（2-MG2-MG）2-2-微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的
38、一种小分子球蛋白；微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白；2-2-微球蛋白可以从肾小球自由滤过，微球蛋白可以从肾小球自由滤过，99.9%99.9%在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏；故而正常情在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏；故而正常情况下况下2-2-微球蛋白的排出是很微量的；微球蛋白的排出是很微量的；-测定主要用于监测近端肾小管的功能。在急性肾小管损伤或坏死、测定主要用于监测近端肾小管的功能。在急性肾小管损伤或坏死、慢性间质性肾炎、慢性肾衰等情况下，均可使得尿慢性间质性肾炎、慢性肾衰等情况下，均可使得尿2-MG2-MG显著升高。显著升高。肾
39、移植患者血、尿肾移植患者血、尿2-MG2-MG明显增高，提示机体发生排异反应；肾移明显增高，提示机体发生排异反应；肾移植后连续测定植后连续测定2-MG2-MG可作为评价肾小球和肾小管功能的敏感指标。可作为评价肾小球和肾小管功能的敏感指标。糖尿病肾病早期有肾小管功能改变，尿糖尿病肾病早期有肾小管功能改变，尿2-MG2-MG也会升高。也会升高。在系统性红斑狼疮活动期，造血系统恶性肿瘤，如慢性淋巴细胞性在系统性红斑狼疮活动期，造血系统恶性肿瘤，如慢性淋巴细胞性白血病时，尿液白血病时，尿液2-MG2-MG也有升高。可以和血液也有升高。可以和血液2-MG2-MG共同测定，共同测定，共同用于上述疾病的诊断
40、。共同用于上述疾病的诊断。临床意义2 2、铁蛋白（、铁蛋白（FerritinFerritin）由肝脏合成，其量的多少是判断体内是否缺铁的敏感指标。由肝脏合成，其量的多少是判断体内是否缺铁的敏感指标。血清铁蛋白的升高与肿瘤有关，癌细胞有较强的合成铁蛋白的能力。血清铁蛋白的升高与肿瘤有关，癌细胞有较强的合成铁蛋白的能力。协助对肿瘤的诊断和预后评估。协助对肿瘤的诊断和预后评估。-各种恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤、胰腺、肺或肝脏的实体肿瘤及乳腺癌复发转移时，血清铁蛋白（Serum Ferritin,SF）含量明显升高。各种炎症感染，肝硬化、肝坏死及其他肝病，急性心肌梗死早期，反复输血等疾病，SF含量会增
41、加。临床意义肿瘤标志物的联合应用 单一肿瘤标志物的监测诊断由某一种恶性肿瘤的阳性率不是很高，一般不会超过单一肿瘤标志物的监测诊断由某一种恶性肿瘤的阳性率不是很高，一般不会超过60%60%，特异性也会受，特异性也会受到一定的限制，联合检测多种肿瘤标志物有利于提高检出得阳性率，其综合阳性检出率可达到一定的限制，联合检测多种肿瘤标志物有利于提高检出得阳性率，其综合阳性检出率可达80%80%以上，为此以上，为此选择一些特异性较高，可以互补的肿瘤标志物联合测定，对提高肿瘤得诊断率是很有价值的。选择一些特异性较高，可以互补的肿瘤标志物联合测定，对提高肿瘤得诊断率是很有价值的。交叉反应交叉反应（cross
42、reactioncross reaction）性：若两种抗原分子有一个或）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。与另一种抗原发生反应。交叉反应交叉反应（cross reactioncross reaction）性：若两种抗原分子有一个或）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。与另一种抗原发生反应。用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，
43、抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。1免疫荧光法(immunofluorescence,IF)用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。1免疫荧光法(immunofluorescence,IF)HIV抗体检测结果处理规范检测方法检测方法检测结果检测结果检验报告检验报告处理处理筛查试验筛查试验阴性阴性HIVHIV抗体阴性抗体阴性阴性告知阴性告知阳性阳性HIVHIV抗体待复查抗体待复查上送确证上送确证确证试验确证试验阴性阴性HIVHIV抗体阴性（抗体阴性（-）阴性告知阴性告知阳性阳性HIVHIV抗体
44、阳性（抗体阳性（+）阳性告知，个案调查阳性告知，个案调查不确定不确定HIVHIV抗体不确定（抗体不确定（）告知，告知，3 3个月后复查共个月后复查共2 2次次HIV抗体检测结果处理规范检测方法检测方法检测结果检测结果检验报告检验报告处理处理筛查试验筛查试验阴性阴性HIVHIV抗体阴性抗体阴性阴性告知阴性告知阳性阳性HIVHIV抗体待复查抗体待复查上送确证上送确证确证试验确证试验阴性阴性HIVHIV抗体阴性（抗体阴性（-）阴性告知阴性告知阳性阳性HIVHIV抗体阳性（抗体阳性（+）阳性告知，个案调查阳性告知，个案调查不确定不确定HIVHIV抗体不确定（抗体不确定（）告知，告知，3 3个月后复查共
45、个月后复查共2 2次次 临床意义（1）原发性肝细胞癌患者血清中AFP浓度明显升高，约77.1%的患者AFP300ng/mL，但也有18%的病人AFP并不升高。（2）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者AFP浓度有不同程度的升高，但其水平通常低于100ng/mL。其升高原因主要是由于受损伤的肝细胞再生而形成幼稚化细胞，幼稚化的肝细胞具有产生AFP的能力。但随着受损肝细胞的修复，AFP逐渐恢复正常。（3）生殖腺胚胎性肿瘤患者血清中AFP浓度可见升高。（4）妇女妊娠3个月后，血清AFP浓度开始升高，78个月时达到高峰，一般在400g/L以下，分娩后3周恢复正常。若孕妇血清中AFP异常升高，应考虑胎儿神
46、经管缺损畸形的可能性。临床意义（1）原发性肝细胞癌患者血清中AFP浓度明显升高，约77.1%的患者AFP300ng/mL，但也有18%的病人AFP并不升高。（2）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者AFP浓度有不同程度的升高，但其水平通常低于100ng/mL。其升高原因主要是由于受损伤的肝细胞再生而形成幼稚化细胞，幼稚化的肝细胞具有产生AFP的能力。但随着受损肝细胞的修复，AFP逐渐恢复正常。（3）生殖腺胚胎性肿瘤患者血清中AFP浓度可见升高。（4）妇女妊娠3个月后，血清AFP浓度开始升高，78个月时达到高峰，一般在400g/L以下，分娩后3周恢复正常。若孕妇血清中AFP异常升高，应考虑胎儿神经管缺损畸形的可能性。
