1、实验四 病原性球菌 Content?示教?病原性球菌(金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌)形态和染色性?葡萄球菌的鉴别(培养、血浆凝固酶、甘露醇发酵等）?链球菌的培养特性?肺炎链球菌与甲型链球菌区别（培养、胆汁溶菌、菊糖发酵）?操作?抗“O”试验（ASO）?脓汁/喉拭子标本的分离和鉴定?溶菌酶测定结果观察?粪便肠道致病菌的分离和鉴定 划线分离 病原性球菌 病原性球菌（化脓性球菌）G+G-葡萄球菌 链球菌 肠球菌 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 病原性球菌 N.gonorrhoeae N.meningitidis S.pneumoniae staphylococcus S
2、treptococcus 葡萄球菌的鉴别 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 色素 金黄色 白色-溶血素 +血浆凝固酶试验 +耐热DNA酶试验 +甘露醇发酵试验 +致病力 强 弱或无 喉拭子/脓汁标本的处理 脓汁或 喉拭子 涂片、革兰染色、镜检 血琼脂平板 观察菌落特征 及溶血情况 生化反应、致病力试验及药敏试验 37 24h 操作操作：取脓汁标本中的两种菌落?革兰染色?接种甘露醇发酵管?药敏试验?血浆凝固酶实验（玻片法）取喉拭子标本中的菌落?革兰染色 药敏试验 对照 庆大霉素 链霉素 青霉素?用接种环取金葡菌菌落，均匀涂布于营养琼脂平板。?用无菌镊子镊取无菌抗菌素滤纸片，紧贴于琼脂表面。?置37培
3、养箱1618小时 后，取出，观察记录结果 （透明抑菌圈宽度）血浆凝固酶实验（玻片法）血浆凝固酶实验（玻片法）?取一滴生理盐水与洁净的玻片上?用接种环挑取一环细菌于生理盐水中并制成浓菌悬液?加一环血浆混合，静置 10s?观察结果：出现明显凝集者为阳性；否则为阴性 链球菌的鉴别 菌落小、半透明、菌落小、半透明、表面光滑、边缘整齐表面光滑、边缘整齐 不完全溶血 草绿色溶血环 完全溶血完全溶血 不溶血不溶血 丙型链球菌 乙型链球菌 肺炎链球菌 甲型链球菌 菊糖发酵实验 胆汁溶菌实验 菊糖发酵试验菊糖发酵试验 胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 肺炎链球菌肺炎链球菌（黄色）（澄清）甲型链球菌甲型链球菌（紫色）（混
4、浊）Optochin 动物 试验 试验 +-ASO试验?原理 对照血清对照血清 病人血清病人血清 溶血素溶血素O 抗抗O抗体抗体 乳胶颗粒乳胶颗粒 多余抗O抗体 凝集反应凝集反应 ASO操作方法(间接凝集试验)混匀，3min 混匀，2min SLO SLO 乳胶试剂 病人血清 对照（正常）血清 抗“O”试验中和试验?意义：风湿热及其活动性的辅助诊断 粪便标本肠道致病菌鉴别流程 标本 鉴别培养基（SS培养基）生化反应（双糖管）血清学鉴定 SS SS 平板挑取可疑菌落2 2个 (无色,透明,小菌落)接种双糖管 培养,观察 SS平板 分离肠道病原菌的强选择培养基分离肠道病原菌的强选择培养基 成分：?
5、基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红橙黄）作用：?乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。?胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。?病原菌:小,无色,透明?非致病菌:大,红色 EMB平板 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色 双糖管 发酵乳糖 H2S试验 发酵葡萄糖(产酸产气)及动力 上层：乳糖,Fe2+固体 下层：葡萄糖 半固体 指示剂:酚红（pH6.8-8.4,黄 红）致病菌红色致病菌红色 非致病菌黄色非致病菌黄色 观察：双糖管接种方法 穿刺斜面接种法 The End Thanks
