1、6介绍几种新的感染性标志物介绍几种新的感染性标志物1218太工讲课太工讲课1/20/20232介绍几种新的感染标志物无锡二院胡锡池1/20/20239PCT 的实验室检测n免疫发光法免疫发光法(ILMA)法国梅里埃公司、美国罗氏法国梅里埃公司、美国罗氏 该方法敏感性高,特异性强，此法测定的低限值为0.1ng/ml,检测耗时约2h。nSPCT-Q-SPCT-Q-半定量快速实验半定量快速实验-德国评细替、武汉海特德国评细替、武汉海特 该方法操作简单、结果易观察的特点。其低限值为0.5ng/ml。检测耗时约0.5h。（无锡雷赛公司）n放射免疫学分析法 n透射免疫浊度法 1/20/202310不同人群
2、中血浆PCT的值1/20/202311PCT 与其它感染性指标的比较。与其它感染性指标的比较。nPCT PCT PSPS WBC WBC:特异性高特异性高：全身性感染既可导致白细胞升高,也可以引起白细胞减少。nPCT PCT PSPS CRPCRP：灵敏度好：灵敏度好：PCT可在感染后2个小时后检测；CRP在炎症过程开始812h 后，才能从血清中检测出。nPCT PCT PSPS IL-1IL-1、IL-6IL-6、TNF-TNF-:稳定性好：稳定性好：PCT 的半衰期较长(2024h)；IL半衰期很短(数分钟至几小时)。nE668511081/20/202312 内毒素检测内毒素检测1/20
3、/2023131.2.3.4.1/20/2023141/20/202315512341/20/2023161/20/2023171/20/202318n(13)-D-葡聚糖葡聚糖(G试验试验)n半乳甘露聚糖半乳甘露聚糖(GM试验试验)1/20/202319当前侵袭性真菌感染当前侵袭性真菌感染(IFI)检测的现状检测的现状n发病率呈逐年上升趋势，且漏诊率居高不下。据尸检研究发现，75%的IFI病例在生前漏诊，主要原因是IFI的临床表现不典型易被基础疾病所掩盖，导致诊断困难。n目前常规微生物学检查（直接涂片镜检和真菌培养）耗时长，干扰因素多。而分子生物学检查（真菌DNA的检测）门槛过高，且不能提示
4、现症感染。病理检查常因患者的病情所限难以实施。n因此寻找有效的感染性标志物对于快速诊断侵袭性真菌感染、制定正确的治疗方案、争取最佳治疗时间，意义重大。1/20/202320真菌感染的诊断真菌感染的诊断n深部真菌感染的临床表现 n深部真菌感染影像学特征 n微生物学检查 主要包括两方面:直接涂片镜检和真菌培养.n分子生物学检测-真菌DNA的检测 n真菌细胞壁组分检测(1,3)-D-葡聚糖(G试验)n真菌抗原检测 半乳甘露聚糖(GM试验)，分布于大多数曲霉属真菌胞壁中1/20/2023211-3-葡聚糖的检测葡聚糖的检测(G试验试验)n真菌在自然界中分布很广真菌在自然界中分布很广,其细胞壁主要成分其
5、细胞壁主要成分为为(1-3)-D-Glucan(1-3)-D-Glucan(葡聚糖葡聚糖).).n当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理，胞的吞噬、消化等处理，1-3-D葡聚糖可从葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液（如胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液（如尿、脑脊液，腹水，胸水等）中尿、脑脊液，腹水，胸水等）中1-3-D葡葡聚糖含量增高。聚糖含量增高。n浅部真菌感染中，浅部真菌感染中，1-3-D葡聚糖未被释放葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。出来，故其在体液中的量不增高。1/20/202322n快速检测血液等
6、体液中酵母菌、丝状真菌等细胞快速检测血液等体液中酵母菌、丝状真菌等细胞壁成分，不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、壁成分，不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属。镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属。n另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌感染的诊断，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体感染的诊断，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验表明，内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验表明，新生隐球菌产生的新生隐球菌产生的1-3-D葡聚糖量比念珠菌葡聚糖量比念珠菌和曲霉菌少。和曲霉菌少。n是早期真菌感染的敏感生物标志是早期真
7、菌感染的敏感生物标志n可鉴别致病菌和定植菌可鉴别致病菌和定植菌1-3-葡聚糖的临床意义葡聚糖的临床意义1/20/2023231-3-葡聚糖（葡聚糖（G试验）试验）-北京金山川北京金山川n酵母菌、丝状真菌细胞壁成分；n 不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属；n 不能检测：隐球菌和接合菌；n 美国FDA已批准，欧洲部分国家已注册；n 敏感性、特异性：90左右1/20/202324半乳甘露聚糖半乳甘露聚糖(GM试验试验)n半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（galactomannangalactomannan，GMGM）是曲霉菌细胞壁）是曲霉菌细胞壁的组成成分，当曲霉在组织生长时可释
8、放进入血循环。的组成成分，当曲霉在组织生长时可释放进入血循环。n检测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染检测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的的早期诊断。当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。GMGM释放量与菌量释放量与菌量成正比，可以反映感染程度。连续检测成正比，可以反映感染程度。连续检测GMGM可作为治疗可作为治疗疗效的监测。疗效的监测。1/20/202325GM检测的临床意义检测的临床意义nGMGM检测有助于检测有助于IPAIPA的早期诊断，而且还有助于抗曲霉治的早期诊
9、断，而且还有助于抗曲霉治疗的疗效以及疾病转归的判断疗的疗效以及疾病转归的判断n血清中血清中GMGM的量伴随的量伴随IPAIPA的进展会增加，也会随着药物的的进展会增加，也会随着药物的有效治疗而下降。如果在有效治疗而下降。如果在IPAIPA的治疗期间，其的治疗期间，其GMGM抗原血抗原血症持续保持较高水平者，其预后则较差，此时试着更症持续保持较高水平者，其预后则较差，此时试着更改治疗方案。相反，改治疗方案。相反，GMGM抗原血症清除早且明显者，其抗原血症清除早且明显者，其预后则较理想，应正确判定病情后及时撤药。预后则较理想，应正确判定病情后及时撤药。n跟踪研究发现，肾功能严重受损也会影响跟踪研究
10、发现，肾功能严重受损也会影响GMGM抗原血症抗原血症的清除。的清除。1/20/202326半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（GM试验）试验）-美国伯乐美国伯乐n曲霉菌细胞壁上一种多聚糖抗原n 可以从血清、脑脊业、胸水、BALF检测到n 方法：n ELISA（BioRad）：敏感性高1ng/mln Latex agglutination：15ng/ml1/20/202327G试验与试验与GM试验试验比较比较1/20/202328G试验在以下情况可出现假阳性试验在以下情况可出现假阳性n使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；或其他含有葡
11、聚糖的材料；n静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；制品；使用多糖类抗癌药物。服用多粘菌素使用多糖类抗癌药物。服用多粘菌素B,厄他培厄他培能能,头孢噻肟头孢噻肟,吡肟吡肟,优力欣优力欣,磺胺等药物磺胺等药物n链球菌血症；链球菌血症；n操作者处理标本时存在污染、标本溶血；操作者处理标本时存在污染、标本溶血；n放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等念珠菌经胃肠道进入血液等1/20/202329G试验在以下情况可出现假阴性试验在以下情况可出现假阴性n之前使用过抗真菌药物、
12、之前使用过抗真菌药物、n标本放置时间过长，导致分解代谢。标本放置时间过长，导致分解代谢。n试验操作过程中离心时间过长。试验操作过程中离心时间过长。1/20/202330GM试验在以下情况可出现假阳性试验在以下情况可出现假阳性n饮用牛奶或高蛋白食物；饮用牛奶或高蛋白食物；n血液透析；血液透析；n自身免疫性肝炎等；自身免疫性肝炎等；n食用污染的大米等。食用污染的大米等。1/20/202331GM试验在以下情况可出现假阴性试验在以下情况可出现假阴性n释放入血循环中的曲霉释放入血循环中的曲霉GM（包括甘露聚糖）（包括甘露聚糖）并不持续存在而是会很快清除；并不持续存在而是会很快清除；n以前使用了抗真菌药
13、物；以前使用了抗真菌药物；n粒细胞缺乏的患者。粒细胞缺乏的患者。1/20/202332G试验、试验、GM试验结果与临床诊断不符合时试验结果与临床诊断不符合时的原因分析的原因分析n患者是不是粒缺的状态患者是不是粒缺的状态n患者饮食或药物的干扰患者饮食或药物的干扰n操作是否规范操作是否规范(分析前分析前,分析中分析中,分析后等分析后等)n试剂和仪器是否状态良好试剂和仪器是否状态良好1/20/202333 MB-80MB-80检测仪（检测仪（1/20/2023341/20/202335呼吸道病毒呼吸道病毒7项检测（直接免疫荧光）项检测（直接免疫荧光）1/20/202336呼吸道病毒感染 概述n呼吸道
14、病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为入侵门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。n据统计，90%以上的急性上呼吸道感染由该类病毒引起。Karin M et al.Cell.2006 Feb 24;124(4):823-35.1/20/202337呼吸道病毒感染 病毒分类呼吸道病毒包括：呼吸道病毒包括：w正粘病毒科：正粘病毒科：流感病毒流感病毒w副粘病毒科：副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒w其他病毒科：其他病毒科：腺病毒、腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、冠状病毒、呼肠病毒1/20/202338呼吸道病毒感染 病毒分类症状症
15、状常见相关病毒常见相关病毒不常见相关病毒不常见相关病毒流感流感流感病毒流感病毒副流感病毒，腺病毒副流感病毒，腺病毒 假膜性喉炎假膜性喉炎副流感病毒副流感病毒流感病毒，流感病毒，RSV，腺病毒，腺病毒细支气管炎细支气管炎呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒流感病毒，腺病毒，副流感流感病毒，腺病毒，副流感病毒病毒支气管肺炎支气管肺炎流感病毒，流感病毒，RSV，腺病，腺病毒毒副流感病毒，麻疹，副流感病毒，麻疹，CMV，VZV卡他性鼻炎卡他性鼻炎鼻病毒、冠状病毒鼻病毒、冠状病毒流感，副流感，肠道和腺病流感，副流感，肠道和腺病毒毒1/20/202339呼吸道病毒感染 流行病学w流感病毒感染发生高峰期在北半球一般
16、是从11月到4月w腺病毒出现在深冬到夏初wRSV通常是在冬天到早春，持续5个月流行w副流感病毒爆发会持续一年。1/20/202340呼吸道病毒检测 临床意义Byington,C.L.,H.Castillo,et al.(2002).“The effect of rapid respiratory viral diagnostic testing on antibiotic use in a childrens hospital.”Arch Pediatr Adolesc Med 156(12):1230-4.n为临床合理用药指导依据，防止抗生素的滥用。n减少耐药菌的产生，节省病人开支。1/20
17、/202341呼吸道病毒检测 方法n分离培养需要专业技能，时间长，成本高。nPCR成本高，实验室条件要求高nEIA低敏感性，假阴性高，IgM&IgG nIF快速，稳定，敏感，特异性强1/20/202342检测解决方案 D3 Ultra TMn1983年成立，Ohio University，230名员工。n年销售额超过4亿美元。n呼吸疾病，疱疹&衣原体感染，甲状腺疾病等nAthens,Ohio&Cleveland,Ohion全球最大细胞株和病毒株供应商n江苏省代理：无锡赛拓基因生物科技有限公司1/20/202343检测解决方案 检测原理nFITC标记的某病毒特异性单克隆抗体与细胞中相应的病毒抗原
18、结合后，形成抗原抗体复合物，荧光显微镜下细胞内显示苹果绿荧光。而未发生抗原抗体特异性反应的细胞，被Evans蓝复染成红色。1/20/202344检测解决方案 产品特点n直接免疫荧光快速检测和鉴定种常见的呼吸道病毒（RSV，ADV，FLUA/B,PIV1/2/3）；n高敏感性、特异性和稳定性；n可作为其他快速检测的确认试验，减少假阴性结果；n2010年注册上市1/20/202345检测解决方案 临床验证n苏州大学附属儿童医院 n温州医学院附属第二医院n上海市儿童医院超过1000例样本 项目项目计算结果计算结果检测灵敏度（%）95.84检测特异度（%）98.74阳性预测值（%）98.37阴性预测值（%）96.96准确度（%）98.001/20/202346检测解决方案 检测流程阳性结果判断：阳性结果判断：n显示苹果绿荧光的细胞，为阳性细胞。n当放大倍数为200倍时，在视野中找到2个阳性细胞，判为标本阳性。液体样本1/20/202347总结n1、降钙素原（细菌感染降钙素原（细菌感染)n2、内毒素内毒素(革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌)n3、(13)-D-葡聚糖（真菌葡聚糖（真菌感染感染）n4、半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（真菌真菌感染）感染）n5、呼吸道病毒、呼吸道病毒7项检测（病毒感染）项检测（病毒感染）1/20/202348谢谢大家!49 结束语结束语
