1、实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担和难以估量的精神负担；和难以估量的精神负担；中国南方人群地贫基因携带率 地区地区携带率携带率(%)(%)地贫地贫地贫地贫合计合计广西广西17.66.424.0广东广东8.52.511.0海南海南12.72.715.4云南云南9.8 7.317.1贵州贵州4.25.19.3重庆重庆5.22.07.2 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：碍性贫血）：由于由于（突变、缺失
2、（突变、缺失等）引起的等）引起的，导致，导致，同时，同时的一种的一种。由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致或不能合成，导致的的组成成分组成成分改改变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为表现为。4、将上清液轻轻倒入1.1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37，预热1-2分钟。SG-B母液采用氯化钠制成；4个基因都缺失了(-/-)，在孕后期或出生后即死亡。混匀，3000转/分钟，离心5分钟。标本采集后，测试应在三日内完成。产前诊断可预防重症和中间型地
3、贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。【参考值（参考范围）】测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）SG-B母液采用氯化钠制成；SG-B母液采用氯化钠制成；鉴别诊断(Differential diagnosis)Erythrocyte fragility test血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis混匀，3000转/分钟，离心5分钟。肽链分析Peptide chain analyses混匀，3000转/分钟，离心5分钟。5、向试管
4、中加入C试验液0.重型重型地贫地贫（HbBarts胎儿水肿综合征胎儿水肿综合征）4个个基因都缺失了基因都缺失了(-/-)，在孕后期或出生后即死亡。在孕后期或出生后即死亡。地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）4、将上清液轻轻倒入1.贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。SG-B母液（终止红细胞溶血液）；4、将上清液轻轻倒入1.已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。广西人群地贫基因携带率很高。5%,则高度怀疑为地贫基因携带者;阳性为标准地贫.无创性产前诊断是未来发展的方向。高发区人群遗传负荷评估(0-thal major)由于遗传性珠蛋白基因缺
5、陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。SG-B母液采用氯化钠制成；Erythrocyte fragility test血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisErythrocyte fragility test其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变。红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.产前诊断可预防重症
6、和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。SG-B母液采用氯化钠制成；正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisSG-B母液采用氯化钠制成；SG-B母液（终止红细胞溶血液）；4个基因都缺失了(-/-)，在孕后期或出生后即死亡。Erythrocyte fragility test溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis混匀，3000转/分钟，离心5
7、分钟。7、按下列公式计算出溶血率百分比。无创性产前诊断是未来发展的方向。D2 X 1.SG-B母液采用氯化钠制成；临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。混匀，3000转/分钟，离心5分钟。【参考值（参考范围）】5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。7、按下列公式计算出溶血率百分比。由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引
8、起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。chain disappear(HbBarts hydrop fetalis)1.广西人群地贫基因携带率很高。2.。3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。4.，但。5.是未来发展的方向。-靶型靶型RBC 红细胞脆性实验红细胞脆性实验Erythrocyte fragility testErythrocyte fragility test地贫患者地贫患者正常人正常人血红蛋白电泳血红蛋白电泳Hemoglobin e
9、lectrophoresisHemoglobin electrophoresis chain disappear (0-thal major)chain disappear (HbBarts hydrop fetalis)12341234 肽链分析肽链分析Peptide chain analyses 单管多重单管多重PCRSG-B母液采用氯化钠制成；(0-thal major)混匀，3000转/分钟，离心5分钟。SG-B母液采用氯化钠制成；新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置28保存。鉴别诊断(Differential diagnosis)血红蛋白电泳Hemoglobin elec
10、trophoresis(HbBarts hydrop fetalis)chain disappearSG-B母液采用氯化钠制成；7、按下列公式计算出溶血率百分比。5%,则为地贫基因携带者7、按下列公式计算出溶血率百分比。其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）3、5分钟后，加入B试验液1ml。标本采集后，测试应在三日内完成。chain disappear产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断
11、其出生。红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.地中海贫血初筛检查PCR-ASO诊断诊断(Diagnosis)(Diagnosis)临床特点实验室检查父母调查阳性临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）（基因分析）MCV 80fl 和和/或或MCH 27pg,则高度怀则高度怀疑为地贫疑为地贫;HbA2 3.5%,则为则为地贫基因携带者地贫基因携带者地中海贫血确诊试验地中海贫血确诊试验 地贫地贫诊断基因芯片诊断基因芯片(Thalachip);地贫地贫基因诊断条膜基因诊断条膜(反向点杂交反向点杂交)/一管法多一管法多重重PCR AS
12、O寡核苷酸探针点杂交寡核苷酸探针点杂交 DNA测序测序鉴别诊断鉴别诊断(Differential(Differential diagnosis)diagnosis)缺铁性贫血缺铁性贫血 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症 传染性肝炎或肝硬化传染性肝炎或肝硬化【检验原理】【检验原理】贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是可筛查是否贫血，特别是地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；4、将上清液轻轻倒入1.测定红细胞在一
13、定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）肽链分析Peptide chain analyses5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。Erythrocyte fragility test(HbBarts hydrop fetalis)产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色，读取光密度D2。5%,则高度怀疑为地贫基因携带者;阳性为标准地贫.已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。SG-B母液采用氯化钠制成；红细胞渗
14、透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.肽链分析Peptide chain analyses5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。一方为基因携带者，推荐配偶行基因检测。chain disappear测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）标本采集后，测试应在三日内完成。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os mot
15、ic fragility test,ROFT;0.组成：由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）；SG-B母液（终止红细胞溶血液）母液（终止红细胞溶血液）；SG-C母液（红细胞溶血液）组成；成分：SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化钠制成；母液采用氯化钠制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。新鲜抗凝全血新鲜抗凝全血（、EDTA-Na、ACD），置28保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。1、取试管一只，加入，放。2、加入，立刻混匀，继续放在。3、，加入。混匀，。
16、4、将（），于（以纯化水作空白对照）。5、，混匀，（透明红色）后，。6、。7、按下列公式计算出溶血率百分比。临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）(HbBarts hydrop fetalis)SG-B母液采用氯化钠制成；Erythrocyte fragility test红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.【参考值（参考范围）】5、向试管中加入C试验液0.地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：地贫诊断基因芯片(Thalachip);临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等
17、）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）肽链分析Peptide chain analyses红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。标本采集后，测试应在三日内完成。血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛
18、查几乎可以阻断其出生。5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。5、向试管中加入C试验液0.SG-C母液采用皂素（saponin）制成。SG-B母液采用氯化钠制成；5、向试管中加入C试验液
19、0.4个基因都缺失了(-/-)，在孕后期或出生后即死亡。chain disappear地中海贫血初筛检查产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。混匀，3000转/分钟，离心5分钟。混匀，3000转/分钟，离心5分钟。（注 56-64为溶血率轻度降低）。SG-C母液（红细胞溶血液）组成；溶血 =D1 100 已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。Erythrocyte fragility test正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断
20、其出生。5、向试管中加入C试验液0.地贫的发病率、地域分布及危害(HbBarts hydrop fetalis)血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis中国南方人群地贫基因携带率混匀，3000转/分钟，离心5分钟。(0-thal major)红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.无创性产前诊断是未来发展的方向。5、向试管中加入C试验液0.已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置28保存。正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。父母双方同类型地贫者需行遗传咨询
21、和产前诊断。5%,则为地贫基因携带者4、将上清液轻轻倒入1.5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。7、按下列公式计算出溶血率百分比。Erythrocyte fragility test产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。肽链分析Peptide chain analysesSG-B母液采用氯化钠制成；溶血率降低：指红细胞渗透脆性
22、降低；标本采集后，测试应在三日内完成。一方为基因携带者，推荐配偶行基因检测。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。肽链分析Peptide chain analyses(0-thal major)6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色，读取光密度D2。由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。(HbBarts hydrop fetalis)(HbBarts hydrop fetalis)血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisSG-B母液采用氯化钠制成；(0-thal major)正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。无创性产前诊断是未来发展的方向。红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;65为正常溶血率；55为溶血率降低；（注 56-64为溶血率轻度降低）。正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑贫血症之间。贫血症之间。
