1、白细胞计数课件实验一、实验一、白细胞计数白细胞计数 1.原理血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。2.试剂器材 白细胞稀释液冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝 3滴 加蒸馏水 至100ml器材器材 改良牛鲍血细胞计数板及改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、专用盖片、微量吸管、带孔吸头、带孔吸头、1ML刻度刻度移液管、小试管、洁移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、净软纱布、干棉球、光学显微镜。光学显微镜。毛细血管采血标准操作程序毛细血管采血标准操作程序 操作步骤操作步骤1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，采血部位成人
2、以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。两侧采血。2 轻轻按摩采血部位。轻轻按摩采血部位。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。紧捏刺血部位，使其自然充血。5 用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度 23mm，稍加挤压以血液流出为宜。，稍加挤压以血液流出为宜。6 用干棉球擦去第一滴血。用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。按需要依次采血。8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。微量吸管的使用微
3、量吸管的使用n1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；n2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；中指轻微挤压排出适量空气；n3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；n4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），用干棉球
4、顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；n5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血液，用上清液冲洗管内余血23次，轻摇试管混匀；次，轻摇试管混匀；n6拔出微量吸管弃入污物桶。拔出微量吸管弃入污物桶。38ml白细胞稀释液。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 1064 紧捏刺血部位，使其自然充血。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区稀释液和采血量要准确，充分
5、混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。计数区域分为9个大方格白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。超过上述标准者为不合格2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。计数板上下各一个计数池采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血
6、时间太长引起血液凝固。计数板上下各一个计数池改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。2 轻轻按摩采血部位。3.操作步骤操作步骤（1）加稀释液加稀释液 用移液管用移液管向小试管内加入向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。白细胞稀释液。（2）采血、稀释用微量吸管采血）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试，拭去管外余血，释放于小试 管管底部，用上部底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管轻摇试管混匀，静置等其混匀，静置等其溶血。溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向
7、前推轻放于两）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。细胞悬液，充入计数池内。静置静置2-3min，使细胞沉于，使细胞沉于计计数池底面数池底面。（5）调试显微镜）调试显微镜 将计数板放置载物台上，将计数板放置载物台上，选择（选择（4 ）低倍镜，调节聚低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（低倍镜（10），调节），调节光亮光亮。（6）计数
8、计数 低倍镜下计数四角低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞个大方格内白细胞总数，压线细胞数上数上不数下，数左不数右不数下，数左不数右。血细胞计数板的方格n计数板上下各一个计数池n计数区域分为9个大方格n四角的大方格各划分为16个中方格n中央大方格划分为25个中方格n四角的大方格为白细胞计数区n中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区 结果计算结果计算白细胞总数白细胞总数=4大格白细胞数（大格白细胞数（N）/410 20 106 =N 20 109/L用用.109/L（小数点后一位）表示（小数点后一位）表示 注意事项注意事项n 稀释液，小试管、计数板稀释液，小试管、计数板n 采血
9、采血n 充池充池 n 计数原则计数原则n WBC过多过多n WBC过少过少 n WBC校正校正n 显微镜调试显微镜调试 5.注意事项注意事项(1).稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。(2).采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。液渗入或采血时间太长引起血液凝固。(3).稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气
10、泡，细胞分布均匀。足、外溢和气泡，细胞分布均匀。(4).白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差差10个以上，两次重复计数误差不得超过个以上，两次重复计数误差不得超过10。(5).白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。个大方格的白细胞数或取双倍血量。(6).一些贫血患者血液中有核红细胞增多，会计数在一些贫血患者血液中有核红细胞增多，会计数在白细胞总数内，应校正。白细胞总数内，应校正。校正公式：白细胞校正数校正公式：白细胞校正数/L
11、=M（100/100+N）M为未校正前白细胞数，为未校正前白细胞数，N为在白细胞分类时，计数为在白细胞分类时，计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。(7).调试显微镜调试显微镜将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内分隔线条为止。至看清计数区域内分隔线条为止。采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。实验一、白细胞计数实验一、白细胞计数校正公式：白细胞校正
12、数/L=M（100/100+N）稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。计数区域分为9个大方格白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。评价：白细胞 4.超过上述标准者为不合格1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。注意事项中央大
13、方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；稀释液，小试管、计数板 WBC过少（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。6.细胞计数原则细胞计数原则n大方格四边压大方格四边压线细胞数左不线细胞数左不数右，数上不数右，数上不数下，数下，n弓形移动弓形移动7.正常参考值正常参考值成人成人：（4.0-10.0）109/L新生儿：新生儿：（15.0-20.0）109/L6拔出微量吸管弃入污物桶。采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入
14、或采血时间太长引起血液凝固。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 106稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。WBC过少2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；2 轻轻按摩采血部位。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。（5）调试显微镜 将计数板放置载物台上，选择（4 ）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10），调节光亮。毛细血管采血标准操作程序38ml白细胞稀释液。白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。（3）清洁计数板及
15、盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。白细胞稀释液冰乙酸 2.改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。2 轻轻按摩采血部位。稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。（6）计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 106加蒸馏水 至100ml白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8
16、个大方格的白细胞数或取双倍血量。2 轻轻按摩采血部位。2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；计数区域分为9个大方格8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。加蒸馏水 至100ml白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区超过上述标准者为不合格中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长
17、引起血液凝固。实验一、白细胞计数（6）计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。2 轻轻按摩采血部位。采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。稀释液，小试管、计数板中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区 109/L（小数点后一位）表示原理血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。大方格四边压线细胞数左不
18、数右，数上不数下，超过上述标准者为不合格白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。超过上述标准者为不合格0109/L者，RCS30%四大格所见白细胞最大值最小值中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，
19、无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；8.考核评价考核评价 a.常规考核标准常规考核标准 （RCS）RCS=100%评价：评价：白细胞白细胞 4.0109/L者，者，RCS30%白细胞在（白细胞在（4.1-14.9）109/L者者 RCS20%白细胞白细胞15.0 109/L者者 RCS15%超过上述标准者为不合格超过上述标准者为不合格 b.其他方法其他方法四大格所见白细胞最大值四大格所见白细胞最大值最小值最小值四大格所见白细胞数平均值四大格所见白细胞数平均值
