1、教学目的n1、掌握血细胞分析仪的库尔特原理n2、掌握白细胞、红细胞、血小板直方图的临床意义。n3、理解血细胞分析仪的质量控制2021/1/122教学重点、难点n教学重点：1、血细胞分析仪电阻抗原理 2、细胞直方图的分析n教学难点：细胞直方图的分析2021/1/123授课内容授课内容n概述n血细胞分析仪检测原理n血细胞分析仪类型n血细胞分析仪检测工程n血细胞直方图2021/1/1241.显微镜计数：原理简单、方便实用比较费时费力、影响因素较多。2.血液分析仪检测工程多速度快精度高信息含量大易标准化、标准化 概概 述述2021/1/125血液分析仪创造者库尔特先生血液分析仪创造者库尔特先生35岁的
2、美国人库尔特创造了粒子计数技术；50年代初期，血细胞计数仪开场应用于临床。科技为人类安康效劳，热心社会公益事业。2021/1/1262021/1/1272021/1/128 2021/1/129库尔特美国通用电气公司员工在上海工作时所拍照库尔特美国通用电气公司员工在上海工作时所拍照2021/1/1210血细胞分析开展史1.1953年美国Coulter公司研制成功第一台电阻抗是血细胞分析仪；2.六十年代已普遍应用到临床，当时可检测RBC、Hb、WBC、MCV、MCH、MCHC等工程；3七十年代，增加了PLT；4七十年代末至八十年代开发了DC及RDW及MPV等新工程；5九十年代以来，RET、NRB
3、C、淋巴细胞亚群分析等指标。2021/1/1211现代分析仪进展n1自动化程度越来越高；n2提供参数越来越多；n3精细度越来越高；n4速度越来越快；n5越来越注重环保；n6质控功能得到加强；n7智能化程度越来越高。2021/1/1212一一 血液分析仪检测原理血液分析仪检测原理血液分析仪检测原理大致分为两类：血液分析仪检测原理大致分为两类：电阻抗法库尔特原理电阻抗法库尔特原理 光散射法光散射法其中电阻抗法是血液分析仪的设计根底其中电阻抗法是血液分析仪的设计根底血液分析仪主要能完成两大功能：血液分析仪主要能完成两大功能：细胞计数功能细胞计数功能 细胞分类功能细胞分类功能 2021/1/1213一
4、一 电阻抗法原理库尔特原理电阻抗法原理库尔特原理1 1 库尔特原理是利用电阻抗法测量库尔特原理是利用电阻抗法测量 细胞的数量和体积。其内容为：血细细胞的数量和体积。其内容为：血细 胞是电的不良导体，当一个细胞通过胞是电的不良导体，当一个细胞通过 计数小孔时，会导致小孔两端电阻的计数小孔时，会导致小孔两端电阻的 变化，将其转化成脉冲，感应器通过变化，将其转化成脉冲，感应器通过 检测脉冲的数量及大小，从而计算出检测脉冲的数量及大小，从而计算出 通过小孔的细胞数量及体积。通过小孔的细胞数量及体积。2021/1/1214 细胞计数池中，小孔内外细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一两个电极和稀释
5、液构成一个电流回路，在负压作用个电流回路，在负压作用下，细胞通过小孔，电极下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻能感应到一个瞬间的电阻变化，并将其转换成脉冲变化，并将其转换成脉冲，脉冲的数量代表细胞数，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞体量，脉冲大小反映细胞体积大小积大小。2021/1/12153 3 电阻抗法仪器的主要组成电阻抗法仪器的主要组成2021/1/1216红细胞直方图红细胞直方图 红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数相似。数相似。100 200 300 400(fl)%2021/1/1217WBCWBC直方图直方图2021/1/12
6、18血小板直方图血小板直方图随红细胞在一个系统中进展检测。随红细胞在一个系统中进展检测。直方图在直方图在2 228fl28fl不同仪器不一。不同仪器不一。10 20 30(fl)10 20 30(fl)%2021/1/1219二白细胞系检测原理n1.电阻抗法 n n标本 单个白细胞 按体积大小分类溶血素稀释液电阻抗法淋巴细胞单个核细胞中性粒细胞2021/1/1220仪器将体积为仪器将体积为3535450fL450fL的血细胞，分为的血细胞，分为256256个通道个通道channelchannel。每个通道：。根据。每个通道：。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞大小，分别置于不同的通
7、道中，显示血细胞体积分布直方图细胞体积分布直方图(Histogram)(Histogram)。2021/1/1221 白细胞检测原理白细胞检测原理 根据电阻抗的原理，不同体积白细胞根据电阻抗的原理，不同体积白细胞(35-450)fL(35-450)fL产生产生脉冲大小的明显差异而区分相应的脉冲大小的明显差异而区分相应的细胞：细胞：3590f1160fl以上90160f12021/1/1222经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！以细胞的有形成分作为细胞的了变化！以细胞的有形成分作为细胞的大小大小第一群第一群353590fl90fl小细胞区：淋巴细胞
8、小细胞区：淋巴细胞体积最小。体积最小。第二群第二群9090160fl160fl单个核细胞区，中单个核细胞区，中间细胞：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱间细胞：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。第三群第三群160fl160fl以上大细胞区：嗜中性粒细以上大细胞区：嗜中性粒细胞体积最大。胞体积最大。2021/1/1223二光散射法血液分析仪检测原理二光散射法血液分析仪检测原理n光散射法组合应用电学、光学、细胞化学光散射法组合应用电学、光学、细胞化学n 多项技术检测血液细胞，可得出较准确多项技术检测血液细胞，可得出较准确的的n 细胞计
9、数和分类计数的结果。细胞计数和分类计数的结果。n 这些测试原理的改进主要表达在对白细胞这些测试原理的改进主要表达在对白细胞n 分类部分的改进，即电阻抗法的白细胞分类部分的改进，即电阻抗法的白细胞三分三分n 群开展为多项技术对白细胞五分类。群开展为多项技术对白细胞五分类。2021/1/12241 1、白细胞检测、白细胞检测 1 1 容 量、电 导、光 散 射 容 量、电 导、光 散 射 v o l u m ev o l u m e，conductivityconductivity，scatter,VCS scatter,VCS法法原理原理细胞体积技术测量细胞细胞体积技术测量细胞大小大小电导性技术
10、测量细胞内电导性技术测量细胞内部构造部构造光散射技术测量细胞形光散射技术测量细胞形态、细胞核和细胞颗粒态、细胞核和细胞颗粒。2021/1/1225 体积 电导 光散射2021/1/1226VCSVCS可显示可显示3 3种细胞散点图种细胞散点图DF1DF1体积值和散射光值体积值和散射光值DF2DF2体积值和电导值体积值和电导值DF3DF3体积值和电导值体积值和电导值2021/1/12272 2电阻抗与射频法能透入细胞内，测电阻抗与射频法能透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少。量核的大小及颗粒的多少。RF:RF:射频电流射频电流 细胞内部构造信息细胞内部构造信息DC:DC:直流电直流电 细胞大小的
11、信息细胞大小的信息 2021/1/1228 3激光与细胞化学法 过氧化物酶检测通道 嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道。2021/1/12294 4多角度偏振光散射多角度偏振光散射multi-angle multi-angle polarized scatter separation of polarized scatter separation of white cell,MAPSSwhite cell,MAPSS法法 0 0：前角光散射：前角光散射1 13 3，可粗略，可粗略测定细胞大小。测定细胞大小。10 10：狭角光散射：狭角光散射7 71111，可测，可测定细胞内部构造相对特征。定细胞内部
12、构造相对特征。90 90：垂直光散射：垂直光散射7070110110，测定，测定细胞核分叶情况。细胞核分叶情况。90 90：消偏振光散射：消偏振光散射7070110110，区分，区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。嗜酸性粒细胞与其他细胞。2021/1/12302021/1/12311红细胞计数红细胞计数RBC和红细胞比积和红细胞比积Hct 1RBC原理脉冲数的多少原理脉冲数的多少 2Hct/PCV原理脉冲的高度与叠加原理脉冲的高度与叠加 3白细胞数的干扰白细胞数的干扰 4红细胞体积分布直方图红细胞体积分布直方图100 200 flRBC三红细胞测试原理2021/1/1232红细胞检测原理红细胞检测原理
13、 红细胞计数和血细胞比容测定与白细红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数相似。胞计数相似。100 200 300 400(fl)%正态分布,峰顶在8296fl2021/1/1233 稀释血液中含有白细胞，正常时，血液红细胞稀释血液中含有白细胞，正常时，血液红细胞与白细胞的比例约为与白细胞的比例约为500500：1 110001000：l l，因此，因此，白细胞因素可忽略不计。白细胞因素可忽略不计。当病理情况下，如白血病时，白细胞数明显当病理情况下，如白血病时，白细胞数明显 增高，同时又伴有贫血时，使所得红细胞参增高，同时又伴有贫血时，使所得红细胞参 数可产生明显误差。数可产生明显误差。2021
14、/1/12342.2.血红蛋白测定原理血红蛋白测定原理2021/1/1235有关溶血剂有关溶血剂nICSHICSH推荐的推荐的HICNHICN法：最大吸收峰在法：最大吸收峰在n 540nm 540nm。血红蛋白衍生物是。血红蛋白衍生物是HICNHICN，n 试剂反响时间长，试剂反响时间长，5 5分钟，不合适分钟，不合适n 全自动仪器。另外，氰化血红蛋白全自动仪器。另外，氰化血红蛋白n CN-HBCN-HB：试剂成分氰化钾剧：试剂成分氰化钾剧毒。毒。n2 2 非氰化溶血剂如非氰化溶血剂如SDS-HBSDS-HB：n SDS-HB SDS-HB与与HICH-HBHICH-HB吸收光谱相似。吸收光谱
15、相似。2021/1/1236(四四)血小板检测原理血小板检测原理 根据电阻抗法，血小板随红细胞在一根据电阻抗法，血小板随红细胞在一 个系统中进展检测，在红细胞血小板计个系统中进展检测，在红细胞血小板计 数池中计数数池中计数2fl2fl30fl30fl的颗粒。的颗粒。2021/1/1237血小板检测原理血小板检测原理血小板计数血小板计数platelet,PLTplatelet,PLT：随红细胞在一个系统中进展检测。随红细胞在一个系统中进展检测。直方图在直方图在2 230fl30fl不同仪器不一。不同仪器不一。10 20 30(fl)10 20 30(fl)%呈偏态，峰顶510fl2021/1/1
16、238n血细胞分析仪工作流程2021/1/1239二、血细胞分析仪类型二、血细胞分析仪类型n 一单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点一单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点 n(1)检测参数：检测参数：约约20项左右。项左右。n(2)白细胞分类：只能对白细胞进展三分群。白细胞分类：只能对白细胞进展三分群。n(3)直方图：直方图：3种直方图。种直方图。n(4)报警功能：报警功能：以文字和以文字和(或或)图标提示图标提示n 异常检测结果的信息。异常检测结果的信息。n 2021/1/1240血液细胞分析仪 2021/1/1241 二综合光学和电学等技术血液分析仪特点二综合光学和电学等技术血液分析仪特点(1)(
17、1)检测参数：检测参数：约约2020至至4040项左右项左右(2)(2)白细胞分类：能对白细胞进展五分类。白细胞分类：能对白细胞进展五分类。(3)(3)直方图和散点图：直方图和散点图：3 3种直方图和散点图。种直方图和散点图。(4)(4)报警功能：报警功能：以文字和以文字和(或或)图标显示图标显示 异常检测结果的信息。异常检测结果的信息。注意：各类型血液分析仪不具备识别异常细胞注意：各类型血液分析仪不具备识别异常细胞 形态的才能，故不能完全代替镜检。形态的才能，故不能完全代替镜检。2021/1/12422021/1/1243三全自动多功能血细胞分析仪n检测速度为每小时110150份标本n工作形
18、式：CBC nCBC+DIFFnCBC+NRBC nCBC+DIFF+NRBC nCBC+RETnCBC+DIFF+RETnCBC+DIFF+NRBC+RET2021/1/1244三三 检测参数检测参数 血液分析仪一般能检测血液分析仪一般能检测2020余项参数，功能余项参数，功能较全的仪器最多的能检测较全的仪器最多的能检测4040余项参数。常见血余项参数。常见血 液分析检测报告的术语及英文缩写词。见下表：液分析检测报告的术语及英文缩写词。见下表：2021/1/1245血液细胞分析仪 2021/1/12462021/1/1247红细胞体积分布宽度 RDWn概念外周血红细胞体积大小异质性，用变异系
19、数来表示CVn参考值n 11.6%15.0%2021/1/1248临床意义：n1缺铁性贫血IDA早期诊断和疗效观察 95%以上的IDA和RDW均异常n2鉴别IDA和轻型-地中海贫血 均为小细胞低色素贫血，前者RDW增高；后者RDW根本正常。n3MCV/RDW贫血分类法有助于贫血的形态学分类 n4用于贫血病因学鉴别诊断：肾性贫血RDW正常；肝性贫血RDW增高 2021/1/1249 鉴别缺铁性贫血和鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血珠蛋白生成障碍性贫血 1共同点：小细胞性贫共同点：小细胞性贫 血，峰左移。血，峰左移。2鉴别点：鉴别点：aRDW增高，峰底宽增高，峰底宽 bRDW正常，峰底窄正常
20、，峰底窄 bNfl100 200 a2021/1/1250根据MCV、RDW进展贫血形态学分类 2021/1/1251一细胞直方图的应用 1WBC直方图/及“分类计数 1初步估计细胞群体的变化 2技术因素或病理变化400 100 200 300 400 fl100 200 300 flfl分析仪各项参数及直方图临床意义2021/1/12521 1、白细胞直方图、白细胞直方图正常白细胞直方图正常白细胞直方图异常白细胞直方图异常白细胞直方图2021/1/1253红细胞直方图概念红细胞直方图概念正常红细胞主要分布在正常红细胞主要分布在50-200fl50-200fl。正常直方图上可见正常直方图上可见
21、两个细胞群体：两个细胞群体：50-50-125fl125fl区域有一个几乎区域有一个几乎两侧对称、较狭窄的两侧对称、较狭窄的正态分布曲线正态分布曲线2021/1/1254100200fl2RBC体积直方图体积直方图 要注意观察图形峰的位置、峰底的宽度、峰顶的要注意观察图形峰的位置、峰底的宽度、峰顶的形状及有无双峰现象。形状及有无双峰现象。1缺铁性贫血缺铁性贫血 2轻型轻型Hb合成障碍合成障碍 3铁粒幼细胞性贫血铁粒幼细胞性贫血 4叶酸缺乏的巨幼细胞性贫血叶酸缺乏的巨幼细胞性贫血 5其他其他2021/1/1255红细胞直方图红细胞直方图1 1正常红细胞分布：正常红细胞分布：5050200fl 2
22、00fl 2 2异常红细胞直方图异常红细胞直方图2021/1/1256 血小板直方图血小板直方图 电阻抗法在电阻抗法在2-30fl2-30fl范围内分析范围内分析PLTPLT，但大多，但大多数在数在2-15fl2-15fl范围，正常血小板直方图，呈现左范围，正常血小板直方图，呈现左偏态分布。偏态分布。2021/1/1257 当血小板计数和血小板体积直方图呈现异常现象时，均当血小板计数和血小板体积直方图呈现异常现象时，均应检查血液是否有血小板凝聚和微小血块，必要时作血涂片应检查血液是否有血小板凝聚和微小血块，必要时作血涂片检查，观察是否有小红细胞、红细胞碎片或大血小板增多现检查，观察是否有小红细
23、胞、红细胞碎片或大血小板增多现象。象。20 30 fl10 2021/1/12583 3、血小板直方图、血小板直方图正常血小板直方图呈左偏态分布：正常血小板直方图呈左偏态分布：2 230fl30fl分布，主要在分布，主要在2 215fl15fl。异常血小板直方图2021/1/1259MPV的变化：鉴别血小板减少的变化：鉴别血小板减少 PLT而而MPV：Plt破坏增多破坏增多如如DIC、ITP等等 PLT而而MPV：M增生不良、增生不良、AIDS、M纤维化、再障、纤维化、再障、M瘤、白血病化疗、败瘤、白血病化疗、败血症等血症等 三三 血小板参数的临床意义血小板参数的临床意义2021/1/1260
24、先进技术预览图图1半自动分析仪半自动分析仪 把把20l 血液样血液样品在机外稀释，混匀后放品在机外稀释，混匀后放在样品架上，按下计数键在样品架上，按下计数键它就可以对它就可以对15种血液指标种血液指标和和3个细胞直方图进展一次个细胞直方图进展一次分析。测定完成后结果会立分析。测定完成后结果会立即在即在LCD上显示并将结果打上显示并将结果打印出来。印出来。2021/1/1261 这是一台用于临这是一台用于临床实验室体外诊断的床实验室体外诊断的全自动血液分析仪，全自动血液分析仪，能每小时分析能每小时分析80份样品份样品，打印出，打印出18份参数和份参数和3种种细胞分布曲线图。操作简细胞分布曲线图。
25、操作简便，便，快速。快速。图图2全自动分析仪全自动分析仪2021/1/1262图图3CD-3500 血球计数分析仪血球计数分析仪30个参数，个参数，10项白细胞分类，项白细胞分类，7个分布图，个分布图，7个散射表示图个散射表示图可以做网织红细胞分析，以及动物血液测试高达可以做网织红细胞分析，以及动物血液测试高达60个品种个品种采用最先进的激光技术和电阻法技术采用最先进的激光技术和电阻法技术20个质控程序，个质控程序，120个带个带25个参数的质控样品的均值个参数的质控样品的均值2021/1/1263图图4HS血液常规检查流水线血液常规检查流水线HST-330 SE-9000/R-3000/SP
26、-100 从血球计数、白血球分类到网织红细胞测定以及标本从血球计数、白血球分类到网织红细胞测定以及标本的推片、染色，全面实现了自动化。的推片、染色，全面实现了自动化。实现了高效率的检测。实现了高效率的检测。2021/1/1264小结n本节课我们要求同学掌握电阻抗原理和血细胞直方图的临床意义，为临床实习打好根底！2021/1/1265考虑题n电阻抗检测原理白细胞分类原理？2021/1/1266Thank You世界触手可及世界触手可及携手共进，齐创精品工程携手共进，齐创精品工程NoImage内容总结血细胞分析仪1。4七十年代末至八十年代开发了DC及RDW及MPV等新工程。计数小孔时，会导致小孔两端电阻的。阈值调节计数不同细胞有不同阈值。DF3体积值和电导值。0：前角光散射13，可粗略测定细胞大小。10：狭角光散射711，可测定细胞内部构造相对特征。90：垂直光散射70110，测定细胞核分叶情况。鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血。携手共进，齐创精品工程
