1、非法酵革兰阴性杆菌特征非法酵革兰阴性杆菌特征及鉴定思路及鉴定思路张秀珍张秀珍内容内容 非发酵细菌分类 主要非发酵细菌特征 非发酵细菌耐药特征 临床最常分离非发酵细菌鉴定非法酵革兰阴性杆菌感染特点 引起临床各科室引起临床各科室 人体各部位感染人体各部位感染 鉴定比肠杆菌科复杂鉴定比肠杆菌科复杂 耐药谱广耐药谱广 临床治疗困难临床治疗困难l不发酵葡萄糖有氧方式代谢不发酵葡萄糖有氧方式代谢 u 非发酵菌的分类和命名非发酵菌的分类和命名l与肠杆菌科不同，非发酵菌不能简单地归与肠杆菌科不同，非发酵菌不能简单地归于具有明显特征的某一菌科，且很多非发酵于具有明显特征的某一菌科，且很多非发酵菌的正确分类问题仍
2、未解决菌的正确分类问题仍未解决l 主要的非发酵菌分为主要的非发酵菌分为6个科个科 1 分类不明分类不明非发酵细菌原分类:假单孢菌科 奈瑟菌科 未分科非发酵细菌现代分类 假单孢菌科 产碱杆菌科 甲基球菌科 根瘤菌科 黄杆菌科 莫拉菌科 未定临床常见非发酵菌的分类临床常见非发酵菌的分类 与鉴定方法相关的分组与鉴定方法相关的分组第一组第一组 有动力有动力,极鞭毛极鞭毛:假单胞菌科假单胞菌科 rRNA群群IV rRNA-I:假单孢菌属 类鼻疽类鼻疽;葱头葱头;唐菖蒲唐菖蒲;皮氏皮氏;丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属 食酸菌属食酸菌属嗜麦芽寡氧单胞菌嗜麦芽寡氧单胞菌木糖氧化产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种木
3、糖氧化亚种脱硝亚种脱硝亚种粪产碱杆菌粪产碱杆菌皮氏产碱杆菌皮氏产碱杆菌华丽杆菌属华丽杆菌属其余基因种未命名其余基因种未命名 氧化酶阴性氧化酶阴性 触酶反应不定触酶反应不定 吲哚吲哚 H2S 甲基红甲基红 VP反应均阴性反应均阴性 不产生赖、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解不产生赖、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶酶 有的种能产生苯丙氨酸脱氨酶有的种能产生苯丙氨酸脱氨酶 所有种不能还原硝酸盐所有种不能还原硝酸盐 大多数能利用枸橼酸盐大多数能利用枸橼酸盐 无动力，硝酸盐还原阴性无动力，硝酸盐还原阴性u 非铜绿非铜绿 鲍曼不动鲍曼不动 嗜麦芽嗜麦芽非法酵革兰阴性杆菌的共同特点 在中国兰或麦康开选择培养基上呈不
4、发酵乳糖的菌落(中国兰上粉红色)氧化酶大多阳性 有鞭毛或无鞭毛 革兰阴性杆菌或球杆菌 不能发酵糖 色素鉴定非发酵革兰阴性杆菌的基本步骤 初始菌落识别初始菌落识别:在中国兰或麦康开培养基上呈不分解乳糖的菌落在中国兰或麦康开培养基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶氧化酶 革兰染色革兰染色 色素色素 确认非发酵细菌确认非发酵细菌 O/F 鞭毛染色鞭毛染色 选择鉴定系统选择鉴定系统 API 20NE ATB VIEK2Compact等等临床常见非发酵革兰阴性细菌的耐药特征 铜绿假单孢菌 不动杆菌 嗜麦芽窄食单孢菌 绿脓杆菌耐药机制 膜蛋白缺失使通透性下降 高产ampC酶;产ESBL;产金属酶 泵出机制铜绿假
5、单孢菌 铜绿假单胞菌的细胞外膜上没有大多数革铜绿假单胞菌的细胞外膜上没有大多数革兰阴性细菌所具有的典型的高渗透性孔蛋兰阴性细菌所具有的典型的高渗透性孔蛋白，它的孔蛋白通道对小分子物质的渗透白，它的孔蛋白通道对小分子物质的渗透速度仅为典型孔蛋白通道的速度仅为典型孔蛋白通道的1%。产KPC酶国内：已在肠杆菌科的多个菌属中有报道。肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、产酸克雷伯菌、沙门菌属、弗劳地柠檬酸杆菌和铜绿假单胞菌等。铜绿假单胞菌等。该类酶除阴沟肠杆菌可有染色体介导外，其他各类细菌均可为质粒介导，已成为临床治疗难题如何检测?产KPC酶的菌株用常规药敏试验不容易检出。CLSI关于碳青霉烯类的判断
6、标准：厄他培南2g/ml 亚胺培南、美罗培南4g/ml 因此，MIC2g/ml 或4g/ml的菌株仍可判断为敏感的 警惕：在常规药敏中如遇第三、第四代头孢菌素以及其他的-内酰胺类耐药的菌株均应该进行稀释法测定碳青霉烯类的对这些菌株的MIC。检测KPC酶的最佳底物 厄他培南是检测KPC酶的最佳底物。建议1：可将该药列为常规药敏试验的品种 建议2：对所有具有ESBLs/AmpC酶样表型（即对第三、第四代头孢菌素耐药）的肠杆菌科细菌采用纸片法或MIC法（E-试验）进行厄他培南进行厄他培南（和其他碳青霉烯类）的测定。（和其他碳青霉烯类）的测定。如如MIC为为2或或4g/ml应视作有产应视作有产KPC酶
7、和其他碳酶和其他碳青酶霉烯酶的可能。青酶霉烯酶的可能。这时应与临床医师联系，并将该菌株送往参考试验室作进一步的研究。改良的Hodge 试验 0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌 ATCC25922涂布MH平板 中间贴亚胺培南（10g）纸片 接种待检菌的无菌接种环自 纸片外缘向平板边缘划线 35过夜培养 结果判断：亚胺培南抑菌圈内出现 待检菌矢状生长者为产碳青霉烯酶 菌株 PCR 扩增试验、DNA测序证实为某种KPC酶E coli ATCC25922KPC+？KPC-KPC+？不动杆菌的耐药机制 对多种窄谱内酰胺酶耐药由于TEM1和CARB型内酰胺酶 对新型三代头孢菌素耐药是因为产大量染色体头孢菌素酶和
8、超广谱的TEM酶 不动杆中最主要的碳青霉烯酶是不动杆中最主要的碳青霉烯酶是D D类酶类酶 OXA-23OXA-23、2424、2525、2626、2727、4040、4949、5151、5454、5555、5858、6060 该酶能水解亚胺培南、青霉素，但不水解三代该酶能水解亚胺培南、青霉素，但不水解三代头孢菌素头孢菌素.不动杆菌主要耐药机制不动杆菌主要耐药机制 不动杆菌中还不动杆菌中还产产IMPIMP或或VIMVIM型金属酶，型金属酶，该该酶水解底物范围广，包括碳青霉烯类、酶水解底物范围广，包括碳青霉烯类、青霉素类和头孢菌素抗生素，不被克拉青霉素类和头孢菌素抗生素，不被克拉维酸等酶抑制剂抑制
9、，但能被维酸等酶抑制剂抑制，但能被EDTAEDTA、2-2-巯基丙酸巯基丙酸抑制抑制 嗜麦芽窄食单胞菌 常感染严重衰弱和免疫力低下病人 在医院水龙头、污水排水孔呼吸机湿化器均可分离到 可引起菌血症、心内膜炎、医院获得性肺炎、尿路感染、皮肤、软组织 静脉放置插管是引起菌血症的主要原因，死亡率达4169嗜麦芽窄食单胞菌的耐药机制 细胞壁对抗生素的亲和力极差 膜蛋白对氨基糖甙渗透力低下 药泵外排机制 产二种内酰胺酶 L1 内酰胺酶L2内酰胺酶（金属酶）（头孢菌素酶）细菌定植的定义 定植是个”相对”的概念 定植 感染宿主因素宿主因素细菌本身因素细菌本身因素下呼吸道感染中,非发酵菌是临床棘手的问题 下呼吸道中,非发酵菌易定植 内源性:细菌抵抗力强-医源性 抗生素选择压力 一旦演化为感染,病情重,死亡率高MIC/药敏结果与临床治疗有矛盾分离株不一定是感染病原菌预防比治疗更重要 在治疗每一患者前用含酒精的洗手液洗手在治疗每一患者前用含酒精的洗手液洗手;清洁可能污染的物体表面清洁可能污染的物体表面;特别注意机械通气接口的消毒。特别注意机械通气接口的消毒。New antibiotics in the world during the last 20 years161410 3 7 Thank you
