1、1.1.取乙酰唑胺取乙酰唑胺2g2g，加水，加水100ml100ml加热溶解后，迅速放冷，滤过，加热溶解后，迅速放冷，滤过，取滤液取滤液25ml25ml，依法检查氯化物，规定含氯化物不得超过，依法检查氯化物，规定含氯化物不得超过0.014%0.014%，应取标准氯化钠溶液（每，应取标准氯化钠溶液（每1ml1ml相当于相当于0.01mgCl0.01mgCl）多少多少mlml？2.2.溴化钠中检查砷盐杂质，规定含砷量不得超过百万分之四，溴化钠中检查砷盐杂质，规定含砷量不得超过百万分之四，取标准砷溶液（每取标准砷溶液（每1ml1ml相当于相当于0.001mgAs0.001mgAs）2ml2ml，依法
2、检查，依法检查，应取供试品多少克。应取供试品多少克。计算题计算题简答题简答题1 1、简述三种重金属检查法的原理及适用范围；简述三种重金属检查法的原理及适用范围；2 2、简述古蔡氏验砷法的原理简述古蔡氏验砷法的原理 芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物的分析 典型药物 鉴别试验 含量测定 体内药分练习与思考练习与思考 杂质检查第五章第五章 基本要求 基 本 要 求 一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的二、熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。基本原理与方
3、法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。返返 回回R COOH羧酸羧酸COOH芳酸芳酸结构与性质结构与性质 一、结构分析一、结构分析包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐 共同点：苯环、羧基共同点：苯环、羧基 不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）二、性质二、性质 （一）物理性质（一）物理性质 （1 1）固体）固体 具有一定的熔点具有一定的熔点 （2 2）溶解性）溶解性 游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难于有机溶剂；芳酸碱金属盐及
4、其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂。溶于有机溶剂。（二）化学性质（二）化学性质 1.1.芳酸具游离羧基，呈酸性，其芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKapKa在在3 36 6之之间，属中等强度的酸或弱酸；间，属中等强度的酸或弱酸；X X、NONO2 2、OHOH等吸电子取代基存在使酸性增强等吸电子取代基存在使酸性增强 CHCH3 3、NHNH2 2等斥电子取代基存在使酸性减弱等斥电子取代基存在使酸性减弱 邻位取代邻位取代 间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强 2.2.芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶
5、液呈碱芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱，所以其含量测定方法为双相滴定法性，但碱性太弱，所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。或非水碱量法。3.3.芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。4.4.UV UV 5.IR 5.IR 6.6.取代芳酸类药物可利用其取代基的
6、性质进行取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeClFeCl3 3反应反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化偶合反应鉴别、偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。亚硝酸钠滴定法测定含量。7.7.色谱法色谱法制剂分析制剂分析 一、水扬酸类一、水扬酸类 （一）典型药物结构（一）典型药物结构第一节第一节 典型药物分类与理化性质典型药物分类与理化性质OHCOOH水杨酸（水杨酸（salycylicsalycylic acidacid）COOHOCOCH3阿司匹林（阿司匹林（aspirin)aspir
7、in)COONaOHNH2 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠（sodium sodium aminosalicylateaminosalicylate)OCOCOOHOH双水杨酯（双水杨酯（salsalatesalsalate)COONHCOCH3OCOCH3贝诺酯（贝诺酯（benorilatebenorilate)1.1.酸性酸性 SA(pKa2.95)SA(pKa2.95)、ASA(pKa3.49)ASA(pKa3.49)、双水杨酯均有酸性。双水杨酯均有酸性。2.溶解性溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。3.UV和和IR光谱特性：
8、光谱特性：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UV和和IR特征吸收。特征吸收。4.芳伯氨基和酚羟基特性：芳伯氨基和酚羟基特性：5.水解特性：水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水对氨基水 杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。（二）主要理化性质（二）主要理化性质 （一）典型药物结构（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐苯甲酸及其钠盐(benzoic acid benzoic acid）二、苯甲酸类二、苯甲酸类COOH(Na)COOC2H5OH羟苯乙酯羟苯乙酯(ethylparoben)SO2COOHN(CH2C
9、H2CH3)2丙磺舒丙磺舒(probenecidprobenecid)NHCOOHCH3CH3甲芬那酸甲芬那酸(mefenamicmefenamic acid)acid)（二）主要理化性质（二）主要理化性质 1.溶解性溶解性:均为固体，有一定熔点。除钠盐溶于水，其余不溶。均为固体，有一定熔点。除钠盐溶于水，其余不溶。2.UV和和IR光谱特性：光谱特性：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UV和和IR特征吸收。特征吸收。3.具有酚羟基特性：具有酚羟基特性：4.分解反应特性：分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO2 5.酸性：酸性：苯甲酸、丙磺
10、舒和甲芬那酸有游离的羧基苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基，可用，可用 NaOH直接滴定测定其含量。直接滴定测定其含量。三、其他芳酸类三、其他芳酸类(一一)典型药物结构典型药物结构ClOCCH3CH3COOC2H5氯贝丁酯（氯贝丁酯（clofibrateclofibrate）CHCH3COOHCHCH2CH3CH3布洛芬（布洛芬（ibuprofenibuprofen）(二二)主要理化性质主要理化性质 1.1.溶解性：溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液 体；布洛芬为固体，有一定熔点。体；布洛芬为固体，有一定熔点。2.2.UVUV和和IRIR特征吸收
11、光谱：特征吸收光谱：基于基于分子结构中具有苯环和分子结构中具有苯环和 特征基团。特征基团。返返 回回 一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 含有酚羟基药物可与含有酚羟基药物可与FeClFeCl3 3反应；能与反应；能与FeClFeCl3 3反应反应不不 一定一定含酚羟基含酚羟基.第二节第二节 鉴别试验鉴别试验OHRAr-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物紫堇色铁配位化合物pH461.直接反应直接反应 SA在在中性或弱酸性中性或弱酸性条件下，与条件下，与FeClFeCl3 3生成紫堇色配生成紫堇色配位化合物位化合物赭色赭色苯甲酸（苯甲酸（中性或碱性中性或碱性水溶液）水溶液）+FeClFeCl3
12、3COOHCOOOHOFeFe+4FeCl3()2 3+12HCl6强酸性溶液中配位化合物分解强酸性溶液中配位化合物分解 丙磺舒丙磺舒与与NaOH成钠盐后，在成钠盐后，在pH 5.06.0中与中与FeCl3生成米黄色生成米黄色 布洛芬布洛芬与高氯酸羟胺，与高氯酸羟胺，N N，N-N-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，即显紫色应，即显紫色 JPJP（1414）方法方法。基于分子中。基于分子中-COOHCOOH的结构。的结构。2.水解或分解后与三氯化铁反应水解或分解后与三氯化铁反应ASAASA水解成水解成SASA后与后与FeClFeCl3 3 反应，呈紫堇色反应，呈紫堇色
13、丙磺舒丙磺舒加少量加少量NaOHNaOH试液使成钠盐溶解后（试液使成钠盐溶解后（pH=5.0pH=5.06.06.0），与），与FeClFeCl3 3试液反应，生成米黄色沉淀。试液反应，生成米黄色沉淀。COOSO2（CH3CH2CH2)2N3Fe布洛芬布洛芬布洛芬的无水乙醇溶液，加高氯酸羟胺的无水布洛芬的无水乙醇溶液，加高氯酸羟胺的无水乙醇试液及乙醇试液及N,N-N,N-双环己基羧二亚胺（双环己基羧二亚胺（DCCDCC）的无水乙醇溶液，混合，在温水中加热的无水乙醇溶液，混合，在温水中加热20min20min冷却后，加高氯酸铁的无水乙醇溶液，呈紫色。冷却后，加高氯酸铁的无水乙醇溶液，呈紫色。紫色
14、紫色CONHFe/3OCHCH2CHCH3H3CH3CCHCH3COOHCHCH2CH3CH3氯贝丁酯氯贝丁酯氯贝丁酯的乙醚溶液（氯贝丁酯的乙醚溶液（110110）数滴，加盐酸）数滴，加盐酸羟胺的乙醇饱和溶液与氢氧化钾的乙醇饱和溶羟胺的乙醇饱和溶液与氢氧化钾的乙醇饱和溶液各液各2 23 3滴，水浴加热滴，水浴加热2min2min，冷却，加稀盐酸，冷却，加稀盐酸使成酸性，加使成酸性，加1%FeCl1%FeCl3 3 溶液溶液1 12 2滴，显紫色。滴，显紫色。该反应用于羧酸及其酯类的鉴别该反应用于羧酸及其酯类的鉴别CONHFe/3OClO CCH3CH3（异羟肟酸铁）（异羟肟酸铁）ClOCCH3
15、CH3COOC2H5 二、重氮化二、重氮化-偶合反应偶合反应 凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。的药物均可反应。OHOHNNArAr-NH-COCH3H2OAr-NH2NaNO2+HClAr-N2Cl 1.1.直接反应直接反应 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠 2.2.水解后反应水解后反应 贝诺酯具有潜在芳伯氨基贝诺酯具有潜在芳伯氨基 3.3.甲芬那酸甲芬那酸与与对对-硝基苯重氮盐硝基苯重氮盐在在NaOHNaOH介质中介质中偶合偶合产产 生生橙红色橙红色。CH3CH3NHCOOHCOOHNHCH3CH3NaOHNNO2NN N+NO2C
16、OONHCOCH3OCOCH3NHCOOHCH3CH3 +K K2 2CrCr2 2O O7 7 深蓝色深蓝色 棕绿色棕绿色 甲芬那酸甲芬那酸+H H2 2SOSO4 4 黄色黄色 绿色绿色荧光荧光 JP(14)JP(14)三、氧化反应三、氧化反应 1.1.ASAASA酸水解生成酸水解生成SASA（白色沉淀，可测定熔点）（白色沉淀，可测定熔点）和和CHCH3 3COOHCOOH（醋酸气味）（醋酸气味）2.2.双水杨酯水解生成双水杨酯水解生成SASA 3.3.氯贝丁酯碱水解后氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成在弱酸条件下再与三氯化
17、铁反应生成紫色紫色的异的异 羟肟酸铁。羟肟酸铁。四、水解反应四、水解反应ClOCCH3CH3COOC2H5 1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。苯甲酸升华物，可用于鉴别。2.丙磺舒与丙磺舒与NaOH熔融分解成熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成经硝酸氧化成 Na2SO4。3.丙磺舒加热分解丙磺舒加热分解，生成，生成SO2气体，有臭味气体，有臭味五、分解产物反应五、分解产物反应 1.测定测定max ；min。例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备溶液制备0.25mg/ml；max ；265nm,273nm;min。245nm,271nm。2.在在m
18、ax 处测定一定浓度供试液的吸光度处测定一定浓度供试液的吸光度A。例如：羟苯乙酯，例如：羟苯乙酯，5g/ml max =295nm;A =0.48 3.在在max 处测定供试液的百分吸收系数。处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺酯在例如：贝诺酯在max =240nm;E1%1cm=730760 六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法 4.在规定的波长测定吸光度比值（即双波长吸光度在规定的波长测定吸光度比值（即双波长吸光度 比值法）比值法）例如：甲芬那酸例如：甲芬那酸14g/ml;A278280/A348352 =1.151.30 七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3700
19、2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H苯环：苯环：C=C 1610,1570,1480,1440cm-1C=C 1610,1570,1480,1440cm-1羧基羧基C=O 1660cm-1 -OH 3300-2300 cm-1C=O 1660cm-1 -OH 3300-2300 cm-1酚羟基酚羟基Ar-OH 3300Ar-OH 3300 cm-1 cm-1返返 回回37002900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水
20、杨酸钠的红外吸收图谱第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查 一、阿司匹林中特殊杂质的检查一、阿司匹林中特殊杂质的检查 1.1.合成工艺合成工艺ONaONaCOONa CO2OHCOOH H+OHCOOH 乙酰化乙酰化OCOCH3COOH+（CH3CO)2O+CH3COOH2 2、检查、检查1 1).).溶液的澄清度溶液的澄清度 主要检查主要检查NaNa2 2COCO3 3中不溶物，有苯酚、中不溶物，有苯酚、醋酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯。醋酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯。ASAASA可溶于可溶于NaNa2 2COCO3 3，因此溶液应澄清。因此溶液应澄清。2）.游离水杨酸检查游离水杨
21、酸检查 利用利用SA 可与可与FeCl3呈色，用比色呈色，用比色法检查。法检查。3）.易炭化物检查易炭化物检查 主要检查主要检查ASA中能被硫酸炭化显色中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。查。主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基 酚易氧化呈色，而且有酚易氧化呈色，而且有毒性毒性，因此要严格控制。，因此要严格控制。双相滴定法双相滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g 样品用乙醚提取后样品用乙醚提取后0.02mol/L测定方法测定方法 HCl
22、滴定滴定V0.3ml。HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 甲芬那酸是以邻甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在二甲基苯胺在Cu的催化下的催化下 缩合而成，因此成品药物中要检查缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐铜盐及及有关物质有关物质。分光光度法：利用分光光度法：利用Cu 2+与与Na-DDC呈色后测定呈色后测定A 1.铜盐检查法铜盐检查法 原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：BP（2000）2.有关物质的检查有关物质的检查 主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲主
23、要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲 酸。各国药典多采用酸。各国药典多采用TLC法中的法中的自身高低浓度对照自身高低浓度对照法。法。中国药典中国药典(2010年版年版)采用采用HPLC法法。三、甲芬那酸中特殊杂质的检查三、甲芬那酸中特殊杂质的检查NHCOOHCH3CH3四、氯贝丁酯中特殊杂质的检查四、氯贝丁酯中特殊杂质的检查n主要检查成品药物中主要检查成品药物中酸度酸度、残留的、残留的对氯酚对氯酚原料和原料和挥发性杂质挥发性杂质GC-FID法法HPLC法：以对法：以对-羟乙基酚作内标，用正羟乙基酚作内标，用正相相HPLC2.挥发性杂质的检查方法挥发性杂质的检查方法 GC法法1.对氯酚检查对氯酚
24、检查返返 回回ClOCCH3CH3COOC2H5 一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法（一）直接滴定法（一）直接滴定法 基于本类药物基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如可用碱直接滴定，如 ASA的含量测定，其原理如下：的含量测定，其原理如下：P73第四节第四节 含量测定含量测定1.原理：原理：2.条件：条件：在在中性乙醇中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。3.应用：应用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；定；USP和和BP还用于甲芬那酸的测定。还用于甲芬那酸的测定。COOHOCOCH3+NaOHCO
25、ONaOCOCH3+H2O中性乙醇：溶解供试品中性乙醇：溶解供试品 防止酯水解。防止酯水解。目的：扣除乙醇中酸的影响。目的：扣除乙醇中酸的影响。对指示剂对指示剂(酚酞酚酞)而言为中性，而言为中性，可消除滴定误差可消除滴定误差缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、酸性杂质干扰（如水杨酸）；酸性杂质干扰（如水杨酸）；n含量含量%=TVF/W%=TVF/W10001000（二）水解后剩余滴定法（二）水解后剩余滴定法 1.ASA含量测定含量测定原理：原理：条件：条件：水溶液水溶液2NaOH+H2SO4Na2SO4 +2H2OCOOHOCOCH3+2NaOH
26、COONaOH+CH3COONa 注：碱受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐；当用酸回滴定时，酸滴定液的消注：碱受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐；当用酸回滴定时，酸滴定液的消耗体积减少，致使结果偏高；需在相同条件下进行空白校正。耗体积减少，致使结果偏高；需在相同条件下进行空白校正。具体试验：具体试验：I 份份NaOHI 份份NaOHVVOVo-V相当于相当于ASA消耗消耗 氢氧化钠的氢氧化钠的ml数数阿司匹林阿司匹林 USPUSP（2929）取本品约取本品约1.5g1.5g，精密称定，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L0.5mo1/L）50.0m150.0m1，混合，缓
27、缓煮沸，混合，缓缓煮沸10min10min，放冷，加酚酞指示液，用硫，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（酸滴定液（0.25mo1/L0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每用空白试验校正。每1ml1ml的氢氧化钠滴定液（的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l0.5mol/l）相当）相当于于45.04mg45.04mg的的C9H8O4C9H8O4。注：注：反应摩尔比为反应摩尔比为1212 氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（0.5mol/L0.5mol/L）相对于阿司匹林的滴定度为：）相对于阿司匹林的滴定度为：T=0.5T=0.51/21/
28、2180.16=45.04(mg/ml)180.16=45.04(mg/ml)优点：消除了酯键水解的干扰优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰缺点：酸性杂质干扰%100)(%)0WTFVV含量W W：阿司匹林样品称取量；：阿司匹林样品称取量；F F：硫酸滴定液浓度校正因素；：硫酸滴定液浓度校正因素；V V0 0、V V：分别为空白试验与样品消耗硫酸滴定液的体积（：分别为空白试验与样品消耗硫酸滴定液的体积（mlml）。）。2.羟苯乙酯的含量测定羟苯乙酯的含量测定2NaOH+H2SO4Na2SO4 +2H2OCOOC2H5HO+NaOHCOONaHO+C2H5OH（三）两步滴定法（三）两步
29、滴定法 P741.ASA片的含量测定片的含量测定第一步为中和第一步为中和ASA +NaOHASA-Na +H2O水解产物水解产物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂酸性稳定剂+NaOH中性盐中性盐第二步为水第二步为水 解与测定解与测定OCOCH3COONaOHCOONa+NaOH+CH3COONa注：消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰注：消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰;阿司匹林肠溶片和氯贝丁酯采用同法测定阿司匹林肠溶片和氯贝丁酯采用同法测定;片剂含量测定结果的计算片剂含量测定结果的计算%100/%100%片）标示量（）平均片重（）供试品重（）测得量（标示量每片含量标示
30、量gggg%100%0标示量平均片重）（标示量smFVVT注：注：氢氧化钠与阿司匹林反应摩尔比为氢氧化钠与阿司匹林反应摩尔比为1:11:1；故氢；故氢氧化钠的滴定度为：氧化钠的滴定度为：T=0.1T=0.11/11/1180.16=18.02180.16=18.02（mg/ml)mg/ml)片剂含量测定结果的计算片剂含量测定结果的计算 2.2.氯贝丁酯含量测定氯贝丁酯含量测定 P82P82 第一步：第一步：中和酸性杂质中和酸性杂质 第二步：第二步：水解与测定水解与测定ClOCH3CCOOC2H5CH3+NaOHClOCH3CCOONaCH3+C2H5OHNaOH +HClNaCl +H2O 二
31、、亚硝酸钠滴定法二、亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠有芳伯氨基对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在在HCl中与中与NaNO2发生重氮化反应发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O 因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。法在下章重点讨论。三、双相滴定法三、双相滴定法 P78 是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：的含量测定：生成的苯甲酸不溶于水，终点生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定
32、中产生苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。显。COONa+HClCOOH+NaClHCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸钠)0.5mol/L25ml1.5g50ml 优点：消除了反应产物的干扰优点：消除了反应产物的干扰;乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底应进行到底;滴定中要强力振摇滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。
33、取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。（一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 P79 丙磺舒片的测定：丙磺舒片的测定：Ch.P(2010)在在HCl中，采用百分吸收系数法。中，采用百分吸收系数法。BP(1998)在盐酸在盐酸-乙醇乙醇,采用百分吸收系数法采用百分吸收系数法.USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。用氯仿提取后，采用对照品比较法。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法SO2COOHN(CH2CH2CH3)2注射液注射液含量测定结果的计算含量测定结果的计算%100%标示实测标示量cc紫外分光光度法紫外分光光度法 吸收系数法吸收系数法 P79P79%100100%1
34、1标示标示量cnlEAcm如果是片剂按如果是片剂按P79P79进行进行（二）离子交换（二）离子交换-紫外分光光度法紫外分光光度法 氯贝丁酯及其制剂氯贝丁酯及其制剂 Ch.P(2010)Ch.P(2010)采用酸碱滴定法；当含采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质有酸性杂质对氯酚对氯酚时，可采用时，可采用强碱性阴离子强碱性阴离子交换树脂交换树脂吸附酸吸附酸性杂质性杂质后，在甲醇溶液中，后，在甲醇溶液中，226226nmnm波长处，波长处，采用采用对照品比较对照品比较法法。(外标法外标法)具体计算：具体计算：Au/As=Cu/Cs Cu=Cs(Au/As)氯贝丁酯不发生电离，而对氯贝丁酯不发生电离，而对-
35、氯酚等可发生酸性解离，采用阴氯酚等可发生酸性解离，采用阴离子交换色谱分离后，再用紫外离子交换色谱分离后，再用紫外-可见分光光度法测定。可见分光光度法测定。ClOCCH3CH3COOC2H5（三）柱分配色谱三）柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法 USP(29)采用此法同时测定采用此法同时测定ASA胶囊中胶囊中 ASA和和SA。1.SA的限量测定的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试 品溶液的制备。品溶液的制备。2.2.ASAASA的含量测定的含量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。供试品溶液的
36、制备。供试品液：供试品液：CHCl3液液洗脱液洗脱液1：CHCl3洗脱液洗脱液2：HAC-乙醚乙醚洗脱液洗脱液3:CHCl3硅藻土，硅藻土，FeClFeCl3 3-尿素尿素 玻璃棉玻璃棉硅藻土，硅藻土，NaHCONaHCO3 3供试品液：供试品液：CHCl3-HCl液液洗脱液洗脱液1:CHCl3洗脱液洗脱液2：HAC-CHCl3 (1:10)10ml洗脱液洗脱液3：HAC-CHCl3 (1:100)85ml 1-ASA及杂抽先洗脱及杂抽先洗脱2-配位化合物解离配位化合物解离3-SA后洗脱后洗脱 max=306nm AuAs1-杂质先洗脱杂质先洗脱2-SA被洗脱被洗脱3-ASA后洗脱后洗脱 ma
37、x=280nm ASA(mg)=C(Au/As)注：注：在硅藻土在硅藻土-NaHCO3-NaHCO3色谱柱中，阿司匹林及水色谱柱中，阿司匹林及水杨酸成钠盐保留在柱上，先用三氯甲烷杨酸成钠盐保留在柱上，先用三氯甲烷洗脱除去中性或碱性杂质。洗脱除去中性或碱性杂质。再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，继而被三再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，继而被三氯甲烷洗脱。氯甲烷洗脱。注：注：水杨酸与三氯化铁水杨酸与三氯化铁-尿素生成紫色配位化合尿素生成紫色配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上物，保留于硅藻土色谱柱上;用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化合物移动较慢合物移动较慢;以冰醋
38、酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷洗脱。洗脱。Ch.P(2010)ASACh.P(2010)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。的胶囊剂的含量测定采用此法。USPUSP（2929）ASAASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、五、HPLCHPLC法法（一）（一）ASAASA栓剂的含量测定栓剂的含量测定色谱条件色谱条件系统适用性试验系统适用性试验具体计算：具体计算：求出校正因子；求出校正因子；求
39、出供试液浓度；求出供试液浓度；求出百分含量或占标示量百分数求出百分含量或占标示量百分数1 1、校正因子、校正因子f=AsCr/CsArf=AsCr/CsAr S:S:内标物内标物 A A：对照品：对照品2 2、供试品浓度、供试品浓度Cx=fAxCs/AsCx=fAxCs/As3 3、标示量、标示量%=Cx n/W%=Cx n/W平均片重平均片重/标示量标示量 n：稀释倍数稀释倍数 W:供试品重量供试品重量内标法计算公式内标法计算公式 色谱条件：色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱色谱柱苯基硅胶柱；流动相为流动相为NaHNaH2 2POPO3 3 0.1%0.1%HAC HAC液液-0.1%0.1%HAC
40、 HAC乙腈液乙腈液(50:50);(50:50);检测波长检测波长254254nmnm。系统适用性试验：系统适用性试验：n n 3900;T 3900;T 2.3;2.3;重复性重复性 RSDRSD1.5%1.5%具体计算：具体计算：（二（二）丙磺舒原料的含量测定丙磺舒原料的含量测定W W 1/100=C1/100=Cu u(mg/ml);C(mg/ml);Cu u=A=Au u/A/As s C C 供试品中丙磺舒供试品中丙磺舒(mg)=100C(Amg)=100C(Au u/A/As s)返返 回回 一、血清中一、血清中ASAASA和和SASA浓度的浓度的HPLCHPLC法法 色谱条件：
41、色谱条件：色谱柱为色谱柱为ODS-CODS-C1818(150mm(150mm 4.6mm,5m)4.6mm,5m)流动相为甲醇流动相为甲醇-水水-正丁醇正丁醇(30:20:1)(30:20:1)检测波长为检测波长为237237nmnm；内标物为苯甲酸。内标物为苯甲酸。血清样品预处理血清样品预处理 血清血清100100ll +HClO4 50l+l+不同浓度不同浓度ASAASA和和SA+SA+内标液内标液 涡旋混合涡旋混合2 2min min 离心离心5 5min min 取上清液取上清液20 20 ll进样。进样。第五节第五节 体内药物分析体内药物分析 回归方程：回归方程：以峰高比（以峰高比
42、（H H标标/H H内内）对浓度回归）对浓度回归 ASA ASA的回归方程：的回归方程：Y=5.8Y=5.81010-3-3+5.29+5.291010-2-2X r=0.9996X r=0.9996 SA SA的回归方程：的回归方程：Y=6.0Y=6.01010-3-3+8.33+8.331010-2-2X r=0.9981X r=0.9981 ASA ASA和和SASA的线性范围分别为：的线性范围分别为：1 120 20 g/ml;2g/ml;230 30 g/mlg/ml回收率：回收率：空白血清空白血清+五种不同浓度测定，五种不同浓度测定，ASAASA为为96.0%96.0%106.0%
43、;106.0%;SA SA为为92.0%92.0%119.5%;119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）（五种不同浓度均应在线性范围内）色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为LiChrospher100RP(125mm4mm,5m)流动相为流动相为25%乙腈溶液乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。内标物为依他尼酸。尿样品预处理：尿样品预处理：C C8 8固相萃取柱，固相萃取柱，100100mgmg填料填料/mlml用甲醇用甲醇1.01.0ml,ml,然后然后 用用0.50.5mlml蒸馏水活化。蒸馏水活化。2.0 2.0m
44、lml尿样尿样+内标内标300300l(10g/ml)上柱上柱 1.0ml水洗水洗 脱生物杂质脱生物杂质 再用甲醇再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内洗脱保留在柱上的丙磺舒和内 标。洗脱液标。洗脱液0.45m浸滤膜滤过，取浸滤膜滤过，取5l直接进样分析。直接进样分析。二、尿中丙磺舒的固相萃取净化二、尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLCHPLC法法(运动员违禁药物运动员违禁药物)线性关系和回收率线性关系和回收率：取空白尿样取空白尿样2.0ml+不同浓度丙磺舒不同浓度丙磺舒+内标液内标液 按上述方法按上述方法分析分析(浓度范围为浓度范围为0.10.1g/ml 100100g/ml);A A丙
45、丙/A A内内对对C C丙丙回归。回归。回收率：回收率：丙磺舒为丙磺舒为100%100%3%(3%(n=14)n=14)；内标为内标为101%101%3%(3%(n=12)n=12)；人尿样测定人尿样测定：丙磺舒丙磺舒(单剂量单剂量500mg)500mg)尿排泄药尿排泄药-时曲线时曲线 三、三、HPLCHPLC法测定人血浆中布洛芬含量法测定人血浆中布洛芬含量 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为Shim-packCLC-ODS(150mm6mm,10m)预柱为预柱为YWG-C18；流动相为甲醇流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢磷酸二氢 钾冲溶液钾冲溶液(70:30,pH=4.0);流速为流速
46、为1.0ml/min;检测波长为检测波长为221nm；内标物为肉桂酸内标物为肉桂酸。样品预处理：样品预处理：取肝素抗凝血浆取肝素抗凝血浆0 0。2424ml+ml+内标液内标液+甲醇甲醇0.50.5ml,ml,振荡振荡 混匀，离心混匀，离心(1000(1000r/min)15min,r/min)15min,取上清液取上清液10 10 l直直 接进样分析。布洛芬和肉桂酸接进样分析。布洛芬和肉桂酸tR为为5.15和和2.85min。回归方程：回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：Y=4.05 10-2C 2.0 10-3,r=0.
47、9999。回收率测定：回收率测定：空白血浆空白血浆+布洛芬对照品高、中、低三种浓度，布洛芬对照品高、中、低三种浓度，按样品处理项下测定，测得平均回收率为按样品处理项下测定，测得平均回收率为99.2 1.6%1.6%。精密度：精密度：日内精密度为日内精密度为RSDRSD1.8%1.8%；日间精密度为日间精密度为2.8%2.8%。1.01.0，1.51.5，2.02.0，3.03.0，4.04.0，6.06.0，8.08.0，10.010.0，12.012.0h h自肘静脉自肘静脉 取血取血1.51.5mlml，肝素抗凝，按肝素抗凝，按“样品处理方法样品处理方法”项下操作，求算血项下操作，求算血
48、药浓度。药浓度。试验结果：试验结果：1.1.血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱 回收率高，分析速度快回收率高，分析速度快(6(6minmin完成完成)，分离效果好。，分离效果好。2.2.口服一次后口服一次后TmaxTmax=30min=30min90min90min；体内维持体内维持4 4h h6h6h。与文与文 献报道的结果一致。献报道的结果一致。3.3.本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。人血浆样品测定：人血浆样品测定：受试者受试者8 8人；给药剂量人；给药剂量
49、600600mgmg，给药后给药后0.50.5，0.750.75返返 回回 练习与思考1 1阿斯匹林中检查的特殊杂质是阿斯匹林中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B.B.砷盐砷盐 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.苯甲酸苯甲酸 E.E.苯酚苯酚2 2对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B.B.间氨基酚间氨基酚 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.苯甲酸苯甲酸 E.E.苯酚苯酚A.A.FeClFeCl3 3反应反应 B.B.水解后水解后FeClFeCl3 3反应反应 C.AgNOC.AgNO3 3反应反应 D.D.重氮化重氮化-偶合反应偶合反应 E.E
50、.麦芽酚反应麦芽酚反应 1.1.阿斯匹林阿斯匹林 2.2.水杨酸水杨酸 3.3.SMZSMZ 4.4.苯甲酸钠苯甲酸钠BADAA.A.直接酸碱滴定法直接酸碱滴定法 B.B.两步酸碱滴定法两步酸碱滴定法 C.C.亚硝酸钠溶液滴定法亚硝酸钠溶液滴定法 D.HPLCD.HPLC法法 E.E.双相滴定法双相滴定法 5.5.苯甲酸钠苯甲酸钠 6.6.阿斯匹林阿斯匹林 7.7.阿斯匹林栓剂阿斯匹林栓剂 8.8.对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠EBDC 9.9.直接能与直接能与FeClFeCl3 3产生颜色反应的药物有产生颜色反应的药物有A A。水杨酸水杨酸 B.B.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因C.C.对氨基水杨酸
