1、LOGO猪Thrsp基因的多态性及其与猪背膘的相关性研究LOGO国内外研究概况国内外研究概况研究的主要内容研究的主要内容预期结果预期结果 主要内容选题的依据选题的依据研究工作中面临的技术难点和拟研究工作中面临的技术难点和拟采取的解决办采取的解决办法法选题的目的和意义选题的目的和意义研究方法及技术路线研究方法及技术路线 研究的创新点研究的创新点 1 选题的目的和意义 随着社会经济和人们消费水平的提高，改善肉质已经成为适应消费需求和应对畜禽业提高质量与寻求发展的重要议题之一。脂肪含量是影响肉质性状的一个重要的因素，且在动物维持正常的生理代谢和生理功能中起着非常重要的作用。脂肪是机体的主要成分之一，
2、是维持正常生命活动所必需的物质基础。合理的脂肪储备是必须的，但当所摄入的能量超过维持身体正常需要时，多余的能量便被转化为体脂而沉积下来。在动物体内，脂肪蓄积的组织主要是脂肪组织，维持适当含量的皮下脂肪，可以使胴体的外观比较好，提高产品等级；适当的肌间脂肪(IMF)可以提高口感，产品的风味、嫩度和多汁性。因此，如何控制胴体脂肪沉积已经成为畜禽遗传育种学研究的热点之一。1 选题的目的和意义 本研究旨在对猪THRSP基因序列进行分析研究，以鉴别THRSP基因调控区的功能及其与猪产脂能力之关联性。试验所用的试验猪为胴体脂肪较多的中国地方猪种（定远猪、绩溪黑猪和皖南花猪）和瘦肉型猪（长白猪、大白猪、杜洛
3、克及其杂种），提取猪耳组织基因组，利用PCR技术克隆THRSP基因序列，利用测序、结构预测、SNP检测、电泳酶切等方法来研究其基因多态性以及与猪背膘厚的关联分析。2 选题依据2.1 理论依据 动物脂肪代谢途径、动物脂肪的沉积调控、激素与脂肪沉积 引物设计、DNA提取 PCR、酶切电泳、SNP2 选题依据对实验猪进行猪耳采样，提取组织DNA猪耳采样根据现有的理论基础，设计引物，对目标基因序列进行PCR扩增。引物设计对扩增出来的片段进行酶切电泳操作，观察其基因多态性。序列检测序列检测SNPSNP（snSNPSpssnSNPSps）2.2技术依据3 国内外研究概况3.1、Thrsp基因概况 甲状腺激
4、素是由甲状腺分泌的胺类激素,包括四碘甲腺原氨酸(Thyroxine,T4)和三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)两种形式,T4 转化为有效活性形式T3,与下丘脑 垂体 肝脏轴中的生长激素(Growth hormone,GH)、胰岛素样生长因子1(Insulinlikegrowth factor,IGF-1)等协同作用,调节动物体生长发育和物质代谢过程。甲状腺激素不与胞浆受体结合进入核内发挥作用,直接与核受体结合调节核内基因的表达1,其中甲状腺激素应答Spot 14(Thyroid hormone responsive spot 14,THRSP)是核内3 国内外研究概况 受
5、甲状腺激素诱导表达的基因之一,该基因启动子区含有3 个甲状腺素应答元件(Thyroid responseelements,TRE),对甲状腺激素刺激产生快速应答。THRSP 基因编码的蛋白又称Spot 14 或S 14,是一种小分子量、酸性的细胞核内蛋白,最初从小鼠肝脏分离出的mRNA 中发现,现已证实S14 作为一种甲状腺素受体正调控或负调控辅激活转录因子,在组织特异的脂类代谢调控中起重要作用,它能够有效调节苹果酸酶等参与调控线粒体三羧酸循环脂肪合成酶系基因的表达3 国内外研究概况 3.2 THRSP基因的序列研究 目前，有关THRSP基因的研究多见于人、大鼠和小鼠。周倩倩等（2011年）通
6、过检测脂肪型猪和瘦肉型猪THRSP基因编码区的遗传变异，结果发现，猪 THRSP基因编码区的核苷酸序列与人和牛的同源性分别为 86%和 88%，存在 2个 SNPs位点（G123A 和A308G）分别位于距 CDS起点的123bp 和 308bp处，其中 G123A为同义突变，而 A308G导致 THRSP蛋白质 103位的赖氨酸变为精氨酸，引起了酪蛋白激酶磷酸化位点由 TKEE转变为TREE，并产生了2种类型的 mRNA折叠和蛋白质二级结构，从而影响THRSP 基因的最终功能和作用，进而对脂肪生成相关基因表达的调节，造成猪产脂能力的变化。3 国内外研究概况 牛的THRSP基因位于第29号染色
7、体上，包含两个外显子，一个内含子，且只有第一外显子编码蛋白，第一外显子长度为490 bp。Gene Bank中提供的牛THRSP 基因的序列登录号：No.NC_007330。在人体中，THRSP编码基因被定位于11q13，人THRSP基因与大鼠基因序列有81%同源，都属单拷贝基因，含有一段较长的5调控区、两个外显子和一个内含子，外显子 1 包含整个编码区和部分 3非翻译区，外显子 2 为3非翻译区。在氨基酸方面有78%同源性，免疫组化分析表明，该蛋白在大鼠中属核蛋白，并在肝脏中与其他脂肪生成酶呈带状分布。4 研究内容通过对样本DNA的提取，进行酶切检测，观测目标基因的SNP。根据SNPs型的检
8、测结果，选配和选择不同基因型的后代，组织饲养，监测样本的生长性状。根据检测结果，计算基因频率，分析SNPs与性状之间的关联性。内容5 研究内容及方法研究内容及方法 样本采集 5.1.1 15.2.1 15.3.1 15.4.1 15.5.1 15.6通过对混合DNA进行克隆测序分析获得多态性位点，酶切，电泳检测 DNA提取 引物设计和PCR 酶切电泳SNPs检测饲养管理根据GenBank发布的基因序列，采用软件设计引物，进行目的DNA片段PCR扩增。选取样本猪不低于200头，采取猪耳组织。用液氮处理。使用试剂盒提取样本的DNA.对扩增片段进行酶切，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测，观察电泳条带。对样
9、本进行相同水平的饲养，监测状况。DNA提取方法图2 本试验技术路线实验材料的选择加工预试验选择合适的条件进行试验试件外观测量测定密度、pH值测定机械性能分析化学成分综合分析试验结果评价软木及其产品耐老化性6 预期结果获得软木原材料及聚结软木制品、软木橡胶制品、软木革的耐候性情况，对软木的耐候性进行评价，为以后软木室外制品的发展提供依据。获得有涂层和无涂层的软木制品耐候性的差异，从而得出涂料对软木及其制品的耐候性的影响。7 研究的创新点首次采用紫外灯耐候试验箱对软木原材料及其制品的耐候性进行探讨根据试验结果可以得出软木原材料及其制品主要性能的变化，为以后软木的研究、应用提供基础对耐候性试验后的试件的化学成分进行分析8 研究工作中面临的技术难点和拟采取的解决办法由于软木的耐候性以前没有研究过，本次试验是根据PVC及橡胶的耐候性标准，试验过程中可能会出现紫外光灯辐照度、时间、温度、湿度等不合适。拟采取的办法就是根据预试验的结果选择合适的辐照度、时间、温度、湿度等LOGO
