1、2023-1-301Genomic DNA Extraction from Mammal Tissue哺乳动物组织基因组哺乳动物组织基因组DNA提取提取2023-1-302一、一、实验目的实验目的(Experimental Purpose)After the experiment done,students should be able to know how to extract genomic DNA from mammal tissue.掌握动物基因组掌握动物基因组DNADNA提取的操作方法。提取的操作方法。2023-1-303无真正的细胞核无真正的细胞核有真正的细胞核，还有很有真正的细
2、胞核，还有很复杂的细胞器复杂的细胞器2023-1-304动物细胞特有动物细胞特有中心体中心体，高等植物细胞特有，高等植物细胞特有细胞壁，叶绿体和液泡细胞壁，叶绿体和液泡动物细胞动物细胞 (animal cell)植物细胞植物细胞 (plant cell)2023-1-305二、二、实验原理实验原理(Experimental Principle)lIn the procedure described here,the SDS(sodium dodecyl sulfate)are added to denature proteins and solubilize lipids in membran
3、es leading to cell lysis.The cell lysate is often treated with enzymes that hydrolyze RNA and proteins.本实验利用去垢剂本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠十二烷基磺酸钠)是为了是为了使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，而细胞裂解物又常用蛋白酶而细胞裂解物又常用蛋白酶K和和RNA酶进行水解处理。酶进行水解处理。2023-1-306真核生物染真核生物染色体色体DNADNA组组装不同层次装不同层次的结构的结构2023-1-307lThi
4、s is generally followed by phenol of phenol:chloroform extraction to remove the remaining proteins,which will either enter the organic phase or,if denatured,appear at the interphase.Chloroform treatment is used to remove the phenol,and alcohol precipitation concentrates the DNA while removing impuri
5、ty.随后用酚随后用酚氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。氯仿处理是为了去除苯酚，而乙醇沉淀处理相与水相之间。氯仿处理是为了去除苯酚，而乙醇沉淀处理则可以浓缩则可以浓缩DNA，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。的寡核苷酸和肽。2023-1-308lAs a further precaution,ethylene diamine tetraace-tic acid(EDTA)is includ
6、e-ed in the buffers to chelate Mg2+.This will reduce deoxyribonuclease(DNase)activity because of the Mg2+requirement of these enzymes.为了进一步保护为了进一步保护DNA样样品的完整性，通常需要在缓品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸冲液中添加乙二胺四乙酸(EDTA)以整合以整合Mg2+，这样，这样将会减少脱氧核糖核酸酶将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶的活性，因为该酶必须在有必须在有Mg2+存在时才会起存在时才会起作用。作用。2023
7、-1-309lThe method described here result in DNA that is easily cut with restriction enzymes and,therefore,is useful for Southern Hybridization studies.If the DNA is to be used to construct a clone bank,higher molecular weight DNA is desirable,so the vortex step should be eliminated.本实验方法分离得本实验方法分离得到的
8、染色体到的染色体DNA样品易样品易被限制酶切割，因此，被限制酶切割，因此，较适用于较适用于Southern杂交杂交的研究。如果所制备的的研究。如果所制备的基因组基因组DNA是用于构建是用于构建克隆文库，要求得到较克隆文库，要求得到较大分子量的大分子量的DNA，则必，则必须省略其中的振荡步骤。须省略其中的振荡步骤。2023-1-3010核酸的分离纯化、测定及核酸的分离纯化、测定及研究方法研究方法一、一、分离核酸的一般原则分离核酸的一般原则 因为遗传信息全部贮存在核因为遗传信息全部贮存在核酸的一级结构中，故完整的一级酸的一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究结构是保证核酸结构与功能研
9、究的基础。的基础。2023-1-3011（一）核酸的分离和纯化时应遵循两个原则（一）核酸的分离和纯化时应遵循两个原则 保证核酸一级结构的完整性；保证核酸一级结构的完整性；排除其它分子的污染。排除其它分子的污染。（二）核酸的纯度要求（二）核酸的纯度要求 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；的金属离子；其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；最低程度；排除其它核酸分子的污染，如提取排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除分子时，应去除R
10、NA，反之亦然反之亦然。2023-1-3012（三）核酸分离纯化的注意事项（三）核酸分离纯化的注意事项l为保证分离核酸的完整性和纯度，在实验中应注意：为保证分离核酸的完整性和纯度，在实验中应注意：l 尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；破坏；l 减少化学物质对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二减少化学物质对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在酯键的破坏，操作多在pH4pH41010条件下进行；条件下进行；l 防止核酸的生物降解。细胞内或外来的各种核酸酶水解核酸链中的防止核
11、酸的生物降解。细胞内或外来的各种核酸酶水解核酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构。其中磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构。其中DNADNA酶需要金属二价阳离酶需要金属二价阳离子子MgMg2+2+，CaCa2+2+的激活，因此使用金属离子螯合剂，如的激活，因此使用金属离子螯合剂，如EDTAEDTA或柠檬酸盐等或柠檬酸盐等基本上可以抑制基本上可以抑制DNADNA酶的活性。而酶的活性。而RNARNA酶不但分布广泛、极易污染样品，酶不但分布广泛、极易污染样品，而且耐高温、耐酸碱、不易失活，所以生物降解是而且耐高温、耐酸碱、不易失活，所以生物降解是RNARNA提取过程中的主提取过程中的主要危害因素
12、；要危害因素；l 减少物理因素对核酸的降解，物理降解因素主要是减少物理因素对核酸的降解，物理降解因素主要是机械剪切力，其机械剪切力，其次是高温。次是高温。2023-1-3013高温：高温：如长时间煮沸，除水沸腾带来的剪切力如长时间煮沸，除水沸腾带来的剪切力外，高温本身对核酸分子中的某些化合键也有破外，高温本身对核酸分子中的某些化合键也有破坏作用。核酸提取过程中常规操作温度为坏作用。核酸提取过程中常规操作温度为0 044以降低核酸酶的活性从而减少对核酸的生物降解。以降低核酸酶的活性从而减少对核酸的生物降解。机械剪切力：机械剪切力：包括强力高速的溶液振荡、搅包括强力高速的溶液振荡、搅拌，细胞突然置
13、于低渗液中；细胞爆炸式地破裂拌，细胞突然置于低渗液中；细胞爆炸式地破裂及及DNADNA样品的反复冻融等。这些操作细节在实验操样品的反复冻融等。这些操作细节在实验操作中应加倍注意。机械剪切作用的主要危害对象作中应加倍注意。机械剪切作用的主要危害对象是大分子量的线性是大分子量的线性DNADNA分子，如真核细胞的染色体分子，如真核细胞的染色体DNADNA等等。2023-1-3014二、核酸分离纯化的一般步骤二、核酸分离纯化的一般步骤l破碎细胞破碎细胞去除蛋白质、多糖、脂类等生物大分去除蛋白质、多糖、脂类等生物大分子子沉淀核酸沉淀核酸去除盐类、有机溶剂等杂质去除盐类、有机溶剂等杂质纯纯化干燥化干燥溶解
14、。溶解。l核酸提取方案，应根据具体生物材料和待提取核核酸提取方案，应根据具体生物材料和待提取核酸分子的特点而定。对于某特定细胞器中富集的酸分子的特点而定。对于某特定细胞器中富集的核酸分子，采用先提取细胞器后再提取目的核酸核酸分子，采用先提取细胞器后再提取目的核酸分子的方案，可获得完整性和纯度两方面质量均分子的方案，可获得完整性和纯度两方面质量均高的核酸分子。高的核酸分子。2023-1-3015三、试剂与器材三、试剂与器材（Reagents and apparatus）.Instruments High speed refrigerated centrifuge（高速冷冻离心机）、（高速冷冻离心
15、机）、Glass homogenizer（玻璃匀浆器）（玻璃匀浆器）、Electrophoresis System（电泳系统）（电泳系统）、Ultraviolet transilluminator（紫外（紫外透射仪）透射仪）、Ultra cold storage freezer（超低温冰箱）（超低温冰箱）、Autoclave（高压灭菌锅）（高压灭菌锅）、Pipettes（微量加样器）（微量加样器）、Electronic balance（电子天平）（电子天平）、Acidometer（酸度计）（酸度计）2023-1-3016.Materials Liver of mice 2023-1-3017.
16、ReagentsTris：Tris(Hydroxymethyl)aminomethane（三羟甲基氨基甲烷）、（三羟甲基氨基甲烷）、SDS sodium dodecyl sulfate,sodium salt(十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠)、EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid(乙二胺四乙酸乙二胺四乙酸)、HCl hydrochloric acid（盐酸）、（盐酸）、NaOH Sodium hydroxide（氢氧化（氢氧化钠）、钠）、Sodium acetate(醋酸钠醋酸钠)、Acetic acid（冰乙酸）、（冰乙酸）、Phenol（平衡酚）平衡酚
17、）、Chloroform（氯仿）氯仿）、Isoamylol（异戊醇）异戊醇）、Ethanol（乙醇）乙醇）、TE buffer Protease K（蛋白酶（蛋白酶 K）、）、RNase A（RNA酶）酶）、Agarose（琼脂糖）琼脂糖）、DNA molecular weight markers（DNA相对分子相对分子质量标准物质量标准物Mark DNA）、Boric acid硼酸硼酸、Sugar蔗糖蔗糖、Bromophenol blue溴酚蓝溴酚蓝、Fluorescent dye(荧光染料荧光染料)Gelview2023-1-3018溶液溶液的配制的配制摩尔质量的计算摩尔质量的计算:质量质
18、量(g)分子量分子量 例：例：5 mol/L NaCl 5 mol/L NaCl 分子量分子量58.44 50ml58.44 50ml x58.44密度的计算：密度的计算：0.05(L)5（mol/L）x 14.61（g）体积体积(L)摩尔体积（摩尔体积（mol/L）质量质量(g)体积（体积（V）密度（密度（g/ml）2023-1-3019(1)5mol/L氯化钠（氯化钠（NaCl）：）：溶解溶解292g氯化钠于足量的水中，定容至氯化钠于足量的水中，定容至1000ml。(2)0.5mol/L乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）:配制等摩尔的配制等摩尔的Na2EDTA和和NaOH溶液（溶液（0
19、.5mol/L），混合），混合后形成后形成EDTA的三钠盐。或称取的三钠盐。或称取186.2g的的Na2EDTA2H2O和和20g的的NaOH，pH调至调至 8.0，并溶于约，并溶于约900ml水中，定容至水中，定容至1000ml。（3)3mol/L乙酸钠（乙酸钠（NaAc）：）：溶解溶解204g的三水乙酸钠于约的三水乙酸钠于约450ml水中，用水中，用冰乙酸冰乙酸调溶液调溶液的的 pH至至 5.2，再加水定容到，再加水定容到500ml。2023-1-3020(4)10十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（SDS）：）：称取称取 10 g SDS 慢慢转移到约含慢慢转移到约含 90 ml的水的烧杯的
20、水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解定容至中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解定容至100 ml。(5)5 mol/L氢氧化钠（氢氧化钠（NaOH）：）：溶解溶解20g氢氧化钠颗粒于约氢氧化钠颗粒于约 90 ml 水的烧杯中（磁水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），完全溶解后用水定容至力搅拌器搅拌），完全溶解后用水定容至100 ml。(6)1 mol/L盐酸（盐酸（HCl）：）：加加 8.6 ml 的浓盐酸至的浓盐酸至 91.4 ml 的水中。的水中。2023-1-3021(7)20mg/ml(7)20mg/ml蛋白酶蛋白酶K K（proteinase Kproteinase K）：）：将将200mg
21、200mg的蛋白酶的蛋白酶k k加入到加入到9.5ml9.5ml水中，轻轻摇动，水中，轻轻摇动，直至蛋白酶直至蛋白酶K K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml10ml，然后分装成小份，然后分装成小份(1ml)(1ml)贮存于贮存于-20-20。(8)10mg/mlRnase(8)10mg/mlRnase（无（无DNaseDNase）（）（DNase-free DNase-free RNaseRNase）：）：溶解溶解10mg10mg的胰蛋白的胰蛋白RNARNA酶于酶于1ml1ml的的10mmol/L10mmol/L的乙酸的乙酸钠水溶液中（钠水溶液中（pH
22、 5.0pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸）。溶解后于水浴中煮沸15min15min，使使DNADNA酶失活。用酶失活。用1mol/L1mol/L的的Tris-HClTris-HCl调调pHpH至至7.57.5，于，于-2020贮存。（配制过程中要戴手套）贮存。（配制过程中要戴手套）2023-1-3022(9)(9)1 mol1 molL L TrisTris缓冲液（缓冲液（TrisTrisHCl bufferHCl buffer）将将121g121g的的TrisTris碱溶解于约碱溶解于约0.9L0.9L水中，再根据所要求的水中，再根据所要求的pHpH（2525下）加一定量的浓盐酸（下）加一
23、定量的浓盐酸（11.6N11.6N），用水调整终），用水调整终体积至体积至1L1L。浓盐酸的体积（ml）pH14148.68.6212128.528.5383846465656666671.371.376 76 9.09.08.88.88.68.68.48.48.28.28.08.07.87.87.67.67.47.47.2 7.2 2023-1-3023四、实验步骤四、实验步骤(Experimental Procedures)冰浴处理生理盐水冰浴处理生理盐水 玻璃匀浆器玻璃匀浆器 冰冷的生理盐水清洗冰冷的生理盐水清洗配制工作液配制工作液 处死小鼠处死小鼠 取出肝脏取出肝脏 组织匀浆液组织匀浆
24、液 酶解液酶解液2ml2ml匀浆液匀浆液 组织细胞液组织细胞液 玻璃匀浆器匀浆玻璃匀浆器匀浆 移至移至1.5ml离心管离心管5000r5000rmin30min3060s 60s 加加400ul 400ul 吹散吹散 加加400ul400ul 离心离心 无菌水无菌水 酶解液酶解液 水浴处理（水浴处理（55、1218h）2023-1-3024工作液配置：工作液配置：l贮备液摩尔浓度贮备液摩尔浓度贮备液（体积）贮备液（体积）工作液工作液摩尔浓度摩尔浓度工作液（体积）工作液（体积）例：例：组织匀浆液（组织匀浆液（10ml）贮备液摩尔浓度：贮备液摩尔浓度：5 molL NaCl 工作液摩尔浓度：工作液
25、摩尔浓度：100mmolL l5 molL x 0.1molL 10ml lx 0.2ml 2023-1-3025组织匀浆液组织匀浆液 （装入（装入10ml10ml离心管中）离心管中）10ml 10ml l100 mmol/L NaCl：0.2ml（5 mol/L NaCl）l25 mmol/L EDTA：0.5ml（0.5 mol/L EDTA pH8.0)l10 mmol/L TrisHCl：0.1ml（1 mol/L TrisHCl pH 8.0)l加三蒸水加三蒸水:9.2ml2023-1-3026酶解液（装入酶解液（装入1.5ml1.5ml离心管中）离心管中）1ml1mll200 mm
26、ol/L NaCl：0.04 ml（5 mol/L NaCl）l50 mmol/L EDTA：0.1 ml（0.5 mol/L EDTA pH80)l20 mmol/L TrisHCl：0.02 ml（1 mol/L TrisHCl pH 80)l1%SDS：0.5 ml（2%SDS）l200g/mL蛋白酶蛋白酶K：0.02 ml（10 mg/ml）l加三蒸水加三蒸水:0.32ml2023-1-3027无无DNADNA酶的酶的RNARNA酶（酶（-20-20保存）保存）10mmol/L TrisHCl将胰将胰RNARNA酶溶于酶溶于 浓度浓度10mg10mgmLmL 15mmol/L NaCl
27、 于于100100水浴处理水浴处理15min15min以降解以降解DNADNA酶酶 缓慢冷却到室温。缓慢冷却到室温。2023-1-3028四、实验步骤四、实验步骤(Experimental Procedures)等量分装在两支离心管内等量分装在两支离心管内 加入加入20ul的的RNase RNase 加入等体积加入等体积提取液提取液 4 10min4 10min酶解样品酶解样品 待抽提的样品待抽提的样品 抽提抽提 静置静置 离心离心 配制配制 TETE缓冲液缓冲液 加等体积加等体积提取液提取液500ul500ul10000r10000rminmin离心离心10min 10min 4 10min
28、4 10min 移出水相移出水相 至离心管至离心管 抽提抽提 静置静置 10000r10000rminmin离心离心10min 10min 加加1/10 1/10 加加2 2倍倍 放入放入离心离心 移出水相移出水相 NaAcNaAc 无水乙醇无水乙醇 -20 1-2h 12000r-20 1-2h 12000rminmin离心离心15min 15min 加入加入超低温冰箱超低温冰箱 融化、离心融化、离心 弃上清液弃上清液 洗涤洗涤 12000r12000rminmin离心离心15min 15min 干燥干燥 44 75%75%冷乙醇冷乙醇 离心离心 弃上清液弃上清液 加加TETE 50 50l
29、存放存放 2023-1-3029平衡酚平衡酚(pH8.0)：氯仿：异戊醇：氯仿：异戊醇：25：24：1 (体积比体积比)即配即用即配即用 每管加每管加500ul 平衡酚平衡酚(pH8.0)：250ul 氯仿：氯仿：240ul 异戊醇：异戊醇：10ul2023-1-3030氯仿：异戊醇：氯仿：异戊醇：2424：1(1(体积比体积比)即配即用即配即用 每支试管加每支试管加 500 l 氯仿：氯仿：480 l 异戊醇：异戊醇：20 l2023-1-3031TETE缓冲液缓冲液 1ml1mll10mmol/L TrisHCl：10l（1 mol/L TrisHCl pH 8.0)l1mmol/L ED
30、TA：2l（0.5 mol/L EDTA pH8.0)加三蒸水加三蒸水 0.988ml 至至 1 ml2023-1-3032核酸的酚抽提核酸的酚抽提l原理：交替使用酚、氯仿两种蛋白质变性剂，原理：交替使用酚、氯仿两种蛋白质变性剂，更有效去除蛋白质。更有效去除蛋白质。l氯仿还可加速有机相与水相的分层。氯仿还可加速有机相与水相的分层。l异戊醇：抑制界面泡沫的形成。异戊醇：抑制界面泡沫的形成。l标准程序：酚标准程序：酚酚酚-氯仿氯仿氯仿。氯仿。2023-1-3033酚抽提除去蛋白质的示意图酚抽提除去蛋白质的示意图2023-1-3034四、实验步骤四、实验步骤(Experimental Procedu
31、res)等量分装在两支离心管内等量分装在两支离心管内 加入加入20ul的的RNase RNase 加入等体积提取液加入等体积提取液 4 10min4 10min酶解样品酶解样品 待抽提的样品待抽提的样品 抽提抽提 静置静置 离心离心 配制配制 TETE缓冲液缓冲液 加等体积加等体积提取液提取液500ul500ul10000r10000rminmin离心离心10min 10min 4 10min4 10min 移出水相移出水相 至离心管至离心管 抽提抽提 静置静置 10000r10000rminmin离心离心10min 10min 加加1/10 1/10 加加2 2倍倍 放入放入离心离心 移出水
32、相移出水相 NaAcNaAc 无水乙醇无水乙醇 -20 1-2h 12000r-20 1-2h 12000rminmin离心离心15min 15min 加入加入超低温冰箱超低温冰箱 融化、离心融化、离心 弃上清液弃上清液 洗涤洗涤 12000r12000rminmin离心离心15min 15min 干燥干燥 44 75%75%冷乙醇冷乙醇 离心离心 弃上清液弃上清液 加加TE 50TE 50l存放存放 2023-1-3035核酸的沉淀核酸的沉淀l原理：核酸与钠、钾、镁形成的盐在许多有机原理：核酸与钠、钾、镁形成的盐在许多有机溶剂中不溶，也不会变性。溶剂中不溶，也不会变性。l醋酸钠为沉淀醋酸钠为
33、沉淀DNA、RNA的最常用盐类。的最常用盐类。l有机溶剂：乙醇、异丙醇、聚乙二醇。有机溶剂：乙醇、异丙醇、聚乙二醇。l温度：冰水温度：冰水2023-1-3036四、实验步骤四、实验步骤(Experimental Procedures)等量分装在两支离心管内等量分装在两支离心管内 加入加入20ul的的RNase RNase 加入等体积提取液加入等体积提取液 4 10min4 10min酶解样品酶解样品 待抽提的样品待抽提的样品 抽提抽提 静置静置 离心离心 配制配制 TETE缓冲液缓冲液 加等体积加等体积提取液提取液500ul500ul10000r10000rminmin离心离心10min 10
34、min 4 10min4 10min 移出水相移出水相 至离心管至离心管 抽提抽提 静置静置 10000r10000rminmin离心离心10min 10min 加加1/10 1/10 加加2 2倍倍 放入放入离心离心 移出水相移出水相 NaAcNaAc 无水乙醇无水乙醇 -20 1-2h 12000r-20 1-2h 12000rminmin离心离心15min 15min 加入加入超低温冰箱超低温冰箱 融化、离心融化、离心 弃上清液弃上清液 洗涤洗涤 12000r12000rminmin离心离心15min 15min 干燥干燥 44 75%75%冷乙醇冷乙醇 离心离心 弃上清液弃上清液 加加
35、TE 50TE 50l存放存放 2023-1-3037四、实验步骤四、实验步骤(Experimental Procedures)Agarose Gel Electrophoresis：Preparation of the gel 制备制备0.3琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶 Loading DNA samples DNA samples 16l+Loading buffer4l Gel 电压电压120V Gel photography2023-1-30381.制备制备 0.3 琼脂糖凝胶。称取琼脂糖凝胶。称取 0.09 g 琼脂糖，放人锥形瓶中，琼脂糖，放人锥形瓶中，加入加入 30 mL的的 0.5TB
36、E 缓冲液缓冲液，放入微波炉加热至完全溶化，放入微波炉加热至完全溶化，则为则为 1 琼脂糖凝胶液。（琼脂糖凝胶液。（由于蒸发作用，溶解前在容量瓶上由于蒸发作用，溶解前在容量瓶上作一个记号，溶解后用三蒸水补足作一个记号，溶解后用三蒸水补足）2.制胶器的安装。制胶器的安装。3.GelviewGelview4.将冷到将冷到60左右，缓缓倒入制胶器左右，缓缓倒入制胶器(注意不要形成气泡注意不要形成气泡)。5.待胶凝固后（待胶凝固后（80min），轻轻拔掉梳子，将凝胶盘从制胶槽），轻轻拔掉梳子，将凝胶盘从制胶槽中取出，放入电泳槽内。中取出，放入电泳槽内。6.加入电泳缓冲液加入电泳缓冲液(0.5)至电泳槽
37、中。至电泳槽中。2023-1-30395 5TBETBE（电泳缓冲液）（电泳缓冲液）100mL100mLl5.4gTris，l2.75g硼酸，硼酸，l2mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)l加蒸馏水到加蒸馏水到100mllpH8.00.5TBE2023-1-30406 6上样缓冲液上样缓冲液l0 02525溴酚蓝：取溴酚蓝：取60ml60ml三蒸水，将三蒸水，将250mg250mg溴酚蓝溶解于其中溴酚蓝溶解于其中l4040(W(WV)V)蔗糖水溶液：在上述溶液中加蔗糖水溶液：在上述溶液中加入入40g40g蔗糖蔗糖2023-1-3041 Illuminate the gel with
38、UV light and then take pictures.By comparing product bands with bands from the known molecular-weight markers,you should be able to identify any product fragments which are of the appropriate molecular weight.通过紫外透射仪检测凝胶，然后获取图通过紫外透射仪检测凝胶，然后获取图片。并将产物条带与已知分子量的标淮条带片。并将产物条带与已知分子量的标淮条带进行比较，便可以对合适分子量大小的产物
39、进行比较，便可以对合适分子量大小的产物进行鉴定。进行鉴定。2023-1-3042五、实验结果五、实验结果(experimental results)图图1 小鼠肝脏基因组小鼠肝脏基因组DNA电泳图电泳图2023-1-3043l 加入二苯胺试剂2ml 乳白色乳白色 无色l沸水水浴10分钟。无色 浅蓝色浅蓝色 二苯胺显色2023-1-3044二苯胺试剂的配制二苯胺试剂的配制A A液液:1.5 g 1.5 g二苯胺溶于二苯胺溶于100 ml 100 ml 冰醋酸中再加冰醋酸中再加15 mL15 mL浓硫酸浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态晶状态,则需加温后待其熔化则需加温后待其熔化,再使用。再使用。B B液液:乙醛的体积分数为乙醛的体积分数为0.2%0.2%的溶液。的溶液。配制配制:将将0.1 ml B0.1 ml B液加入到液加入到 10 ml A10 ml A液中，液中，现配现用。现配现用。
