1、药学院药学院College of Pharmacy不积跬步，无以致千里；不积小流，无以成江海。不积跬步，无以致千里；不积小流，无以成江海。仪器分析实验 王王 芳芳2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新2实验七实验七高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）分离巴比妥与苯巴比妥）分离巴比妥与苯巴比妥 实验目的实验目的基本原理基本原理数据处理数据处理 实验步骤实验步骤2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新3药物分析药物分析血药浓血药浓度分析度分析鉴定鉴定手性手性分离分离杂质杂质检查检查 含量含量测定测定HPLC新药开发、药品检验、新药开发、药品检验、
2、生物样品分析等生物样品分析等 生物医药、化生物医药、化妆品、食品等妆品、食品等2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新41.1.实验目的实验目的学习学习高效液相色谱仪高效液相色谱仪的结构以及操作流程。的结构以及操作流程。了解了解反相液相色谱法反相液相色谱法药物分离的药物分离的基本原理基本原理。掌握用反相色谱法药物分离的掌握用反相色谱法药物分离的方法方法。2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新52.2.基本原理基本原理分离原理：分离原理：分配系数分配系数定量依据：外标法定量依据：外标法 峰面积峰面积反相液相色谱：反相液相色谱：固定相固定相 流动相，流动相，疏
3、水性强的保留时间长！疏水性强的保留时间长！2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新6HPLCHPLC结构结构:输液系统;进样系统;分离系统;检测系统;梯度洗脱装置;数据处理系统药学院药学院College of Pharmacy不积跬步，无以致千里；不积小流，无以成江海。不积跬步，无以致千里；不积小流，无以成江海。六通阀六通阀检测器检测器色谱柱色谱柱2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新8准备（准备（loadload）工作（工作（injectinject）2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新9ODS十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅
4、胶 C18 色谱柱是色谱分离的核心。色谱柱管色谱柱是色谱分离的核心。色谱柱管多由不锈钢制成，内装一定的固定相。多由不锈钢制成，内装一定的固定相。色谱往长一般色谱往长一般1030cm，内径，内径25mm。2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新10 Variable Wavelength UV Detector 可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新11 Operational Principle of Diode Array Detector 二极管阵列检测器二极管阵列检测器2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求
5、是 拓新拓新123.3.实验步骤实验步骤开启仪器及电脑，设置参数。开启仪器及电脑，设置参数。待仪器稳定后，分别用注射器进混待仪器稳定后，分别用注射器进混样各样各2020微升，记录保留时间，峰面微升，记录保留时间，峰面积，半峰宽。积，半峰宽。进未知样进未知样2020微升，记录保留时间。微升，记录保留时间。冲洗色谱柱，关闭仪器。冲洗色谱柱，关闭仪器。准备准备2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新134.4.数据处理数据处理以标准物的保留时间为基准，给未知样品各组分定性。根据标准物的峰面积，估算未知样品中相应组分的含量。计算分离度Rs2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新141.解释未知试样中各组分的洗脱顺序。2.试述正相色谱基本原理及应用。思考题思考题2023-1-31 自强自强 弘毅弘毅 求是求是 拓新拓新15Thank you!
