何宣鹏答辩(定稿)201101020132课件.ppt

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1、姓名:何宣鹏专业:化学学号:201101020132指导教师:吴娜(讲师)草果GC-MS指纹图谱研究目 录 实验研究的主要内容实验研究的主要内容结论结论Click to add title in here 2344Click to add title in here 论文研究背景及意义论文研究背景及意义1参考文献参考文献5研究内容及技术路线研究内容及技术路线13 结果与讨论结果与讨论1论文研究背景及意义论文研究背景及意义 草果为姜科豆蔻属多年生草本植物,全株有辛香味。目前,研究者对草果的研究主要集中在基源植物、栽培技术研究、生药材鉴定、中药化学成分、炮制的研究、药理作用、临床用药、生理功能研究

2、等方面,对草果GC-MS指纹图谱研究的文章很很少报道。论文通过对HS-GC-MS条件优化,对草果不同部位(果、壳、仁、茎、叶、芽)挥发性成分进行测定,同时建立草果不同部位、不同产地(红河、楚雄、丽江、大理、玉溪、文山)、不同炮制方法(炒制、盐制、姜制、净制、醋制)的挥发性GC-MS指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对指纹图谱进行相似度计算,采用SPSS 19.0软件对指纹图谱进行聚类分析、主成分分析,为草果的快速鉴别、品质的评价、质量的控制、生产工艺提供参考。2实验研究的主要内容实验研究的主要内容 净制:除去外壳,搓散,筛去膜质的假种皮。炒制:取原药材放入锅内,用

3、文火炒至外表黑褐,发泡,有香气时取出,放冷,筛去灰屑,用时捣碎。盐制:每草果100Kg,用食盐2Kg。姜制:每草果仁100Kg,用生姜10Kg或干姜3Kg。醋制:醋煮。草果的炮制国样品预处理 将草果不同部位(壳、仁、果、茎、叶、芽)、不同产地(红河、楚雄、丽江、大理、文山、玉溪)、不同炮制方法(净制、炒制、盐制、姜制、醋制)的草果于万能中药粉碎机中粉碎,过100目中药筛,并储存在密封袋中,贴上标签。草果的茎、叶、芽放入放入电热鼓风干燥箱中,于50下烘60h,再粉碎。2实验研究的主要内容实验研究的主要内容 准确称取三份1.00g的草果干粉样品,其中两份置于50mL的具塞三角烧瓶中,加入15.00

4、mL正己烷溶剂,超声处理30min,超声功率:200W,过滤,加5.00mL的正己烷洗涤残渣,过滤,合并滤液,取适量体积的溶液分别加入直接进样瓶和顶空进样瓶;另一份草果干粉样品直接加入顶空进样瓶,待测。样品的制备国仪器条件 GC条件:柱箱温度80;进样口温度220;分流比20:1;柱流量1.0ml/min;载气:He(纯度99.999%气相毛细管色谱柱HP-FFAP(30m0.250mm0.25um);程序升温:初始温度80,保持3min,以6/min升至180,保持2min;总运行时21.67min。MS条件:离子源温度200;接口温度220;检测器电压0.88KV;溶剂延迟时间2min实验

5、流程图实验流程图3结果与讨论结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱 注:从下往上分流比分别为不分流、10:1、20:1、50:1不同分流比对草果超声提取直接进样挥发 性成分影响的时间、信号三维图谱分流比选择3结果与讨论结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不不同柱流量对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱 注:从下往上柱流量分别为0.5、1.0、1.5不同分流比对草果超声提取直接进样挥发 性成分影响的时间、信号三维图谱 柱流量比较3结果与讨论结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同色谱柱对草果超声提取直接进样挥发性成

6、分影响的GC-MS图谱注:从下往上色谱柱分别为Rtx-5MS、DB-1701、HP-FFAP不同色谱柱对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱色谱柱的优化3结果与讨论结果与讨论3.2 HS条件选择不同振荡温度对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注:从下往上振荡温度分别为120、130、140、150不同振荡温度对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱超声提取顶空进样振荡温度选择3结果与讨论结果与讨论3.2 HS条件选择不同振荡时间对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注:从下往上振荡时间分别为10min、15min、20min、25

7、min不同振荡时间对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱超声提取顶空进样振荡时间选择3结果与讨论结果与讨论3.2 HS条件选择不同振荡温度对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注:从下往上振荡温度分别为80、100、120、150不同振荡温度对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱干粉顶空进样振荡温度选择3结果与讨论结果与讨论3.2 HS条件选择不同振荡时间对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱 注:从下往上振荡时间分别为10min、15min、20min不同振荡时间对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱干粉顶空进样振荡时间选择3

8、结果与讨论结果与讨论3.3 提取和进样方式的优化不同提取进样方式对草果挥发性成分影响的GC-MS图谱注:从下往上提取进样方式分别为超声提取直接进样、超声提取顶空进样、干粉顶空进样不同提取进样方式对草果挥发性成分影响的时间、信号三维图谱提取进样方式的优化优化结果优化结果 基线平稳、出峰较多、峰形对称、重叠峰少、杂峰少、峰形高大。优化方式国优化结果 GC-MS的优化条件为:分流比为20:1、柱流量为1.0ml/min、色谱柱为HP-FFAP;草果超声提取顶空进样的振荡温度为140,振荡时间为20min;草果干粉顶空进样振荡温度为150,振荡时间为10min;草果的最佳提取进样方式为:干粉顶空进样。

9、结果与讨论结果与讨论国挥发性成分 草果不同部位共鉴定出86个化合物,草果的果中鉴定出43个化合物,无特征化合物;草果果壳中鉴定出55个化合物,有7个是特征化合物;草果果仁中鉴定出44个化合物,有5个是特征化合物;草果的茎中鉴定出35个化合物,有4个是特征化合物;草果的叶中鉴定出50个化合物,有13个为特征化合物;草果芽中鉴定出31个化合物,无特征化合物;草果的果、壳、仁、茎、叶、芽中都含有的化合物有13个,这13个化合物中,又以1,8-桉叶素(1,8-cineole)含量最大,含量都在4.00%以上。结果与讨论结果与讨论挥发性成分测定结果(局部)指纹图谱建立指纹图谱建立相似度计算结果相似度计算

10、结果不同部不同部位位果果壳壳仁仁茎茎叶叶芽芽R R果果1.0001.0000.8910.8910.5510.5510.6170.6170.5500.5500.3180.3180.8840.884壳壳0.8910.8911.0001.0000.5020.5020.7900.7900.6970.6970.4260.4260.8720.872仁仁0.5510.5510.5020.5021.0001.0000.4120.4120.4780.4780.2560.2560.8430.843茎茎0.6170.6170.7900.7900.4120.4121.0001.0000.6320.6320.3730.

11、3730.6850.685叶叶0.5500.5500.6970.6970.4780.4780.6320.6321.0001.0000.4470.4470.7070.707芽芽0.3180.3180.4260.4260.2560.2560.3730.3730.4470.4471.0001.0000.4080.408R R0.8840.8840.8720.8720.8430.8430.6850.6850.7070.7070.4080.4081.0001.000产地产地红河红河楚雄楚雄丽江丽江大理大理玉溪玉溪文山文山R R红河红河1.0001.0000.8640.8640.7220.7220.550

12、0.5500.8050.8050.7780.7780.9240.924楚雄楚雄0.8640.8641.0001.0000.7200.7200.6260.6260.9180.9180.9320.9320.9580.958丽江丽江0.7220.7220.7200.7201.0001.0000.4330.4330.7000.7000.6000.6000.8250.825大理大理0.5500.5500.6260.6260.4330.4331.0001.0000.6180.6180.6650.6650.6980.698玉溪玉溪0.8050.8050.9180.9180.7000.7000.6180.61

13、81.0001.0000.9070.9070.9310.931文山文山0.7780.7780.9320.9320.6000.6000.6650.6650.9070.9071.0001.0000.9050.905R R0.9240.9240.9580.9580.8250.8250.6980.6980.9310.9310.9050.9051.0001.000炮制炮制方法方法净制净制炒制炒制盐制盐制姜制姜制醋制醋制R R净制净制1.0001.0000.8450.8450.9570.9570.8770.8770.8720.8720.9600.960炒制炒制0.8450.8451.0001.0000.8

14、500.8500.9920.9920.7280.7280.9440.944盐制盐制0.9570.9570.8500.8501.0001.0000.8940.8940.8570.8570.9640.964姜制姜制0.8770.8770.9920.9920.8940.8941.0001.0000.7590.7590.9660.966醋制醋制0.8720.8720.7280.7280.8570.8570.7590.7591.0001.0000.8830.883R R0.9600.9600.9440.9440.9640.9640.9660.9660.8830.8831.0001.000相似度分布曲面图

15、相似度分布曲面图聚类分析树状图聚类分析树状图主成分碎石图主成分碎石图主成分三维投影图主成分三维投影图4结论结论 草果不同部位样品差异大,分布不稳定;不同产地的草果挥发性成分和含量虽然有差异,但是分布比较稳定;不同炮制方法的草果挥发性成分很相近,而且样品分布很稳定,说明草果通过炮制后药性很稳定。相似度评价结果国聚类、主成分分析结果 聚类分析结果:草果果不同部位样品可以分为2类;草果不同产地样品可以分为2类;草果不同炮制方法样品可以分为3类。主成分分析结果:草果不同部位样品共提取了3个主成分;草果不同部位共有化学成分共提取了4个主成分;草果不同产地样品共提取了3个主成分;草果不同炮制方法样品共提取

16、了3个主成分。参考文献1 1孟大威,李伟,王鹏君等.草果香气成分研究J.中国实验方剂学杂志.2012,28(6):703-707.2 Sta rkenmann C,Mayenzet F,Brauchli R.Structure elucidation of a pungent compound in black cardamom:A momumtsao-ko Crevost et Lemarie(Zing iberaceae)J.J Ag ric Food Chem,2007,55(26):10902-109071.3吴惠勤,黄晓兰,黄芳等.草果挥发油的气相色谱-质谱指纹图谱 J.草果挥发油的

17、气相色谱-质谱指纹图谱.2004,25(2):92-95.4 何俏明,覃洁萍,黄艳等.草果果仁及果壳挥发油化学成分的GC-MS分析J.中国实验方剂学杂志.2013,19(14):112-117.5马洁,彭建明,吴志红等.国产草果化学成分研究进展J.中国中医药信息杂志.2005,12(9):97-98.参考文献26彭川丛,梁英娇.中药指纹图谱研究进展J.中实用中医药杂志.2010,26(11):810-812.7彭黄最,谷莉,黄河舟等.中药色谱指纹图谱研究进展 J.药学实践杂志.2003,21(6):326-329.8柴欣生,付时雨,莫淑欢等.静态顶空气相色谱技术J.化学进展.2008,20(5

18、):762-766.9郭勇,宋芸娟,缪剑华.静态顶空-气相色谱-质谱法测定八角挥发性成分J.药物分析杂志.2009,29(1):91-95.10http:/ 郭李爽,吴国学.草果炮制历史沿革及现代研究J.中国卫生产业.2011,8(3):107-108.12 四川省卫生厅.四川省中药饮片炮制规范S.四川:四川人民出版社,1977:1984.参考文献313 云南省卫生局.云南省中药咀片炮制规范S.1974.14 贵州省革委会卫生局.贵州中药饮片炮制规范S.1975.15 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典S.北京:化学工业出版社,2005.16 清.景冬阳.嵩崖尊生全书M.扫叶山房石印

19、本.17 聂磊,曹进,罗国安等.中药指纹图谱相似度评价方法的比较J.中成药.2005,27(3):249-252.18王骏,王士同,邓赵红.聚类分析研究中的若干问题J.控制与决策.2012,27(3):321-326.参考文献419陈伟.主成份分析法用于评价需注意的若干问题J.类工效学.2002,8(1):30-33.20 丁艳霞,崔秀明,戴云等.草果的研究进展J.中国科技核心期刊.2005,4:60-63.21 丁艳霞,崔秀明,李雪玲等.草果挥发油的GC-MS指纹图谱J.光谱实室.2006,23(1):81-84.22 李海丽.中药指纹图谱研究进展概况J.医药卫生.2006,35(6):237-238.23 斯林林,汪阳东,陈益存等.山鸡椒挥发油GC-MS指纹图谱及模式识别研J.激光生物学报.2012,21(5):453-457.

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