1、第六章几类主要食品中的微生物及其检测 肉与肉制品中的微生物及其检测乳与乳制品中的微生物及其检测罐头食品的微生物及其检测其他食品的微生物及其检测第一节 肉与肉制品中的微生物及其检测n1、肉的腐败变质及对人体的影响n肉中含有丰富的营养物质，但是不宜久存，在常温下放置时间过长，就会发生质量变化，最后引起腐败。n肉腐败的原因主要是由微生物作用引起变化的结果。n肉的腐败过程使蛋白质分解成蛋白胨、多肽、氨基酸，进一步再分解成氨、硫化氢、酚、吲哚、粪臭素、胺及二氧化碳等，这些腐败产物具有浓厚的臭味，对人体健康有很大的危害。n2、畜禽肉感官鉴别要点有哪些?n对畜禽肉进行感官鉴别时，一般是按照如下顺序进行：首先
2、是眼看其外观、色泽，特别应注意肉的表面和切口处的颜色与光泽，有无色泽灰暗，是否存在淤血、水肿、囊肿和污染等情况。其次是嗅肉品的气味，不仅要了解肉表面上的气味，还应感知其切开时和试煮后的气味，注意是否有腥臭味。最后用手指按压，触摸以感知其弹性和粘度，结合脂肪以及试煮后肉汤的情况，才能对肉进行综合性的感官评价和鉴别。n3、鉴别健康畜肉和病死畜肉n(1)色泽鉴别n健康畜肉肌肉色泽鲜红，脂肪洁白(牛肉为黄色)，具有光泽。n病死畜肉肌肉色泽暗红或带有血迹，脂肪呈桃红色。n(2)组织状态鉴别n健康畜肉肌肉坚实，不易撕开，用手指按压后可立即复原。n病死畜肉一肌肉松软，肌纤维易撕开，肌肉弹性差。n(3)血管状
3、况鉴别n健康畜肉全身血管中无凝结的血液，胸腹腔内无淤血，浆膜光亮。n病死畜肉全身血管充满了凝结的血液，尤其是毛细血管中更为明显，胸腹腔呈暗红色、无光泽。n 一一 鲜肉中的微生物及其检验鲜肉中的微生物及其检验n（一）、鲜肉中微生物的来源 n1、宰前微生物的污染 n2、屠宰过程中微生物的污染 n（二）、鲜肉中常见的微生物类群n鲜肉中的微生物来源广泛，种类甚多，包括真菌、细菌、病毒等，可分为致病性微生物、致腐性微生物及食物中毒性微生物三大类群。1、致腐性微生物n(1)、细菌：n是造成鲜肉腐败的主要微生物，常见的致腐性细菌主要包括：n革兰氏阳性、产芽胞需氧菌：如蜡样芽胞杆、小芽胞杆菌、枯草杆菌等；n革
4、兰氏阴性、无芽胞细菌：如阴沟产气杆菌、大肠杆菌、奇异变性形杆菌、普通变形杆菌、绿脓假单胞杆菌、荧光假单胞菌、腐败假单胞菌等；n球菌，均为革兰氏阳性菌：如凝聚性细球菌、嗜冷细球菌、淡黄绥茸菌、金黄八联球菌、金黄色葡萄球菌、粪链球菌等；n厌氧性细菌：如腐败梭状芽胞杆菌、双酶梭状芽胞杆菌、溶组织梭状芽胞杆菌、产芽胞梭状芽胞杆菌等。n(2)、真菌：n真菌在鲜肉肉中不仅没有细菌数量多，而且分解蛋白质的能力也较细菌弱，生长较慢，在鲜肉变质中起一定作用。经常可从肉上分离到的真菌有：交链霉、麴霉、青霉、枝孢霉、毛霉，芽孢发霉，而以毛霉及青霉为最多。2、致病性微生物n主要见于细菌和病毒等。n(1)、人畜共患病的
5、病原微生物n常见的细菌有炭疽杆菌、布氏杆菌、李氏杆菌、鼻疽杆菌、土拉杆菌、结核分枝杆菌、猪丹毒杆菌等。n常见的病毒有口蹄疫病毒、狂犬病病毒、水泡性口炎病毒等。n(2)只感染畜禽的病原微生物n污染肉品的这些病原微生物种类甚多，在畜禽传染病的传播及流行方面有一定意义：n常见的有多杀性巴氏杆菌、坏死杆菌、猪瘟病毒、兔病毒性出血症病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡马立克氏病毒、鸭瘟病毒等。3、中毒性微生物 n1）、常见的致病性细菌n有沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌等；n 2）常见的条件致病菌n变形杆菌、腊样芽孢杆菌等。n3）有的细菌可在肉品中产生强烈的外毒素或产生耐热
6、的肠毒素，也有的细菌在随食品大量进入消化道过程中，能迅速形成芽胞，同时释放肠毒素，如蜡样芽胞杆菌、肉毒梭菌，魏氏梭菌等。n4）常见的致食物中毒性微生物n链球菌，空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌等。n5）一些真菌n在肉中繁殖后产生毒素，可引起各种毒素中毒，常见的真菌有麦角菌、赤霉、黄曲霉、黄绿青霉、毛青霉，冰岛青霉等。（四）、鲜肉中微生物的检验n A 样品的采集及处理 n 1、一般检验法：n 1）屠宰后的畜肉，可于开膛后，用无菌刀采取两腿内侧肌肉100g（或采取背最长肌）；n 2）冷藏或售卖的生肉，可用无菌刀采取腿肉或其它肌肉100g，也可采取可疑的淋巴结或病变组织。n检样采取后放入无菌容器，立
7、即送检。最好不超过4小时。送样时应注意冷藏。n先将，样品放入沸水中，烫35分钟，进行表面灭菌，以无菌手续从各样品中间部取25g，再用无菌剪刀剪碎后，加入灭菌砂少许，进行研磨，加入灭菌生理盐水，混匀后制成1：10稀释液。n n2、表面检查法n取50cm2消毒滤纸以无菌刀将滤纸贴于被检肉的表面，持续1分钟，取下后投入装有100ml无菌生理盐水和带有玻璃珠的250ml三角瓶内，或将取下的滤纸投入放有一定量生理盐水的试管内，送至实验室后，再按1cm2滤纸加盐水5ml的比例补足，强力振荡，直至滤纸成细纤维状备用。n nB、微生物检验 n细菌总数测定、大肠菌群MPN测定及病原微生物检查，均按国家规定方法进
8、行。C、鲜肉压印片镜检n 1、采样方法：n1）如为半爿或l4胴体，可从胴体前后肢覆盖有筋膜的肌肉，割取不小于8 X 6X 6cm的瘦肉。n2）肩胛前或股前淋巴结及其周围组织。n3）病变淋巴结、浮肿(浆液浸润)组织、可疑脏器(肝、脾、肾)的一部分。n4）大块肉则从瘦肉深部采样lOOg，盛于灭菌陪氏皿中。n n2、检验方法n从样品中切取3cm3左右的肉块，用点燃的酒精棉球在肉块表面消毒23次，再以火焰消毒手术刀、剪镊子，待冷却后，将肉样切成05cm3(约蚕豆大)的小块。用镊子夹取小肉块，在载玻片上做成45个压印，用火焰固定或用甲醇固定1分钟，用瑞士染液(或革兰氏)染色后，水洗、干燥、镜检。n3、评
9、定n1）新鲜肉看不到细菌，或一个视野中只有几个细菌；n2）次新鲜肉一个视野中的细菌数为2030个；n3）变质肉视野中的细菌数在30个以上，且以杆菌占多数。n 我国现行的食品卫生标准中没有制定鲜肉细菌指标：n细菌总数：新鲜肉为l万个g以下；次新鲜肉为1100万个g；变质肉为100万g以上。n 在胴体淋巴结中，如果发现鼠伤寒或肠炎沙门氏菌，那么全部胴体和内脏应作工业用或销毁；仅在内脏爱现此类细菌时，废弃全部内脏，胴体切块后，进行高温处理。二 冷藏肉中的微生物及其检验n（一）、冷藏肉分类n冷藏肉包括冷却肉、冷冻肉、解冻肉三类。（二）、冷藏肉中微生物的来源及类群n冷藏肉的微生物来源，以外原性污染为主，
10、如屠宰、加工、贮藏及销售过程中的污染。n肉类在低温下贮存能抑制或减弱大部分微生物的生长繁殖。n嗜冷性细菌，尤其是霉菌常可引起冷藏肉的污染与变质。能耐低温的微生物还是相当多的，如沙门氏菌在-163 可存活144天，猪瘟病毒于冻肉中存活366天，炭疽杆菌在低温下也可存活，霉菌孢子在-8也能发芽。n 冷藏肉类中常见的嗜冷细菌有假单胞杆菌、莫拉氏菌，不动杆菌、乳杆菌及肠杆菌科的某些菌属，尤其以假单胞菌最为常见。常见的真菌有球拟霉母，隐球酵母、红酵母、假丝酵母，毛霉、根霉、枝霉、枝孢霉、青霉等。（三）、冷藏肉中的微生物变化引起的现象 n1、肉表面产生灰褐色改变，或形成粘液样物质n2、有些细菌产生色素，改
11、变肉的颜色n3、在有氧条件下，酵母也能于肉表面生长繁殖，引起肉类发粘、脂肪水解、产生异味和使肉类变色(白色、褐色等)。（四）、冷藏肉中微生物的检验n1、样品的采集 n禽肉采样应按五点拭子法从光禽体表采集，家畜冻藏胴体肉在取样时应尽量使样品具有气表性，一般以无菌方法分别从颈、肩胛、腹及臀股部的不同深度上多点采样，每一点取一方形肉块约50100g(若同时作理化检验时应取200g)，各置于灭菌容器内立即送检若不能在3小时内进行检验时，必须将样品低温保存并尽快检验。n 2、样品的处理n冻肉，应在无菌条件下将样品迅速解冻。由各检验肉块的表面和深层分别制得触片，进行细菌镜检；然后再对各样品进行表面消毒处理
12、，以无菌手续从各样品中间部取出25g，剪碎、匀浆，井制备稀释液。n n3、微生物检验 n(1)细菌镜检n为判断冷藏肉的新鲜程度，单靠感观指标往往不能对腐败初期的肉品作出准确判定。必须通过实验室检查，其中细菌镜检简便、快速，通过对样品中的细菌数目，染色特性以及触片色度三个指标的镜检，即可判定肉的品质，同时也能为细菌、霉菌及致病菌等的检验提供必要的参考依据。n n触片制备 n 从样品中切取3cm3左右的肉块，浸入酒精中并立即取出点燃烧灼，如此处理23次，从表层下0.1cm处及深层各剪取05cm3大小的肉块，分别进行触片或抹片。n 染色镜检 n将已干燥好的触片用甲醇固定1分钟，进行革兰氏染色后，油镜
13、观察5个视野。同时分别记算每个视野的球菌和杆菌数，然后求出一个视野中细菌的平均数。鲜度判定 n新鲜肉触片印迹着色不良，表层触片中可见到少数的球菌和杆菌；深层触片无菌或偶见个别细菌；触片上看不到分解的肉组织。n次新鲜肉触片印迹着色较好，表层触片上平均每个视野可见到20一30个球菌和少数杆菌；深层触片也可见到20个左右的细菌；触片上明显可见到分解的肉组织n变质肉触片印迹着色极浓，表层及深层触片上每个视野均可见到30个以上的细菌，且大都为杆菌；严重腐败的肉几乎找不到球菌，而杆菌可多至每个视野数百个或不可计数；触片上有大量分解的肉组织。n n(2)其它微生物检验n可根据实验目的而分别进行细菌总数测定、
14、霉菌总数测定、大肠菌群MPN检验及有关致病菌的检验等。三 肉制品中的微生物及其检验n 肉制品的种类很多，一般包括腌腊制品（如腌肉、火腿、腊肉、熏肉、香肠、香肚等）和熟制品(如烧烤、酱卤的熟制品及肉松、肉干等脱水制品)。n（一）、肉制品中的微生物来源与种类n（二）、肉制品的微生物检验第二节第二节 乳与乳制品中微生物及其检测乳与乳制品中微生物及其检测n1、乳及乳制品的感官鉴别要点?n感官鉴别乳及乳制品，主要指的是眼观其色泽和组织状态、嗅其气味和尝其滋味，应做到三者并重，缺一不可。n鉴别鲜乳的质量n(1)色泽鉴别n良质鲜乳为乳白色或稍带微黄色。n次质鲜乳色泽较良质鲜乳为差，白色中稍带青色。n劣质鲜乳
15、呈浅粉色或显著的黄绿色，或是色泽灰暗。n(2)组织状态鉴别n良质鲜乳呈均匀的流体，无沉淀、凝块和机械杂质，无粘稠和浓厚现象。n次质鲜乳呈均匀的流体，无凝块，但可见少量微小的颗粒，脂肪聚粘表层呈液化状态。n劣质鲜乳呈稠而不匀的溶液状，有乳凝结成的致密凝块或絮状物。n(3)气味鉴别n良质鲜乳具有乳特有的乳香味，无其他任何异味。n次质鲜乳乳中固有的香味稍使或有异味。n劣质鲜乳有明显的异味，如酸臭味、牛粪味、金属味、鱼腥味、汽油味等。n(4)滋味鉴别n良质鲜乳具有鲜乳独具的纯香味，滋味可口而稍甜，无其他任何异常滋味。n次质鲜乳有微酸味(表明乳已开始酸败)，或有其他轻微的异味。n劣质鲜乳有酸味、咸味、苦
16、味等。2、原料乳卫生状况对乳及乳制品质量的影响n原料乳卫生质量的优劣直接关系到乳及乳制品的质量。原料的卫生质量问题主要是病牛乳(结核病、乳房炎牛的乳)、高酸乳、胎乳、初乳，应用抗生素五天内的乳、掺伪乳以及变质乳等。4、保存条件对乳及乳制品质量有何影响n(1)温度：消毒牛乳和硬质干酪贮藏温度为210，酸牛乳贮藏温度为28，乳粉和炼乳的贮藏温度在20以下，奶油贮藏温度在15以下。n(2)时间：消毒牛乳保存期为24小时，酸牛乳的保存期为72小时，全脂无糖炼乳保质期为1年，罐装的为全脂加糖炼乳保质期为9个月，瓶装者3个月，奶油在15以下冷藏保质期6个月，46存放时间不得超过7天，乳粉有罐装密封充氮包装
17、时保存期为2年，罐装非充氟包装的保存期为1年，玻璃瓶装者保存期为9个月，塑料袋装保存期为4个月。n(3)湿度：对于固体、半固体的乳制品，贮藏环境湿度不能过大，因为这些乳制品受潮后易使微生物繁殖生长或结块等。如炼乳，乳粉的贮藏环境应通风良好，保持干燥。硬质干酪要求贮藏在相对湿度 8085的环境里。n (4)光线：光线照射可加速乳及乳制品中一些成分的变质，如脂肪、维生素等的氧化。4 微生物污染对乳及乳制品质量的影响n微生物的污染是引起乳及乳制品变质的重要原因。在乳及乳制品加工过程中的各个环节如灭菌、过滤、浓缩、发酵、干燥、包装等，都可能因为不按操作规程生产加工而造成微生物污染。（一）、鲜乳中微生物
18、的来源n1、乳房 n 2、乳畜体表 n n3、容器和用具 n n4、空气 n n5、水源 n n 6、蝇、蚊等昆虫 n n 7、饲料及褥草 n n 8、工作人员 n n（二）、鲜乳中的微生物类群n 鲜乳中污染的微生物有细菌、酵母和霉菌等多种类群。但最常见的而且活动占优势的微生物；主要是一些细菌。n 1、能使鲜乳发酵产生乳酸的细菌 n这类细菌包括乳酸杆菌和链球菌两大类，约占鲜乳内微生物总数的80。它们可进行同型乳酸发酵，产生大量乳酸，使鲜乳均匀凝固。这些菌不产生芽胞，没有鞭毛、革兰氏染色阳性，兼性厌氧。n n(1)链球菌类：n较为常见和重要的有：乳酸链球菌、乳酪链球菌、粪链球菌、嗜热链球菌、液化
19、链球菌。n乳酸链球菌能分解葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖而产生乳酸和其它少量有机酸，如醋酸和丙酸等，在乳液中的产酸量可达1，它普遍存在于乳液中，几乎所有的生鲜乳中，均能检出这种细菌，最适生长温度为30C一35。n乳酪链球菌不仅能分解乳糖而产酸，而且具有较强的蛋白分解能力。n粪链球菌在人类和温血动物的肠道内均有存在，能分解葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、半乳糖和麦芽糖等，在乳液中繁殖而产酸，产酸力不强，生长最低温度为10，最高为45C。n嗜热链球菌能分解蔗糖、乳糖、果糖而产酸，最适生长温度为40C一45。n n(2)乳酸杆菌类n较常见的和重要的有嗜酸乳杆菌、保加亚利乳杆菌、干酪乳杆菌、短乳杆菌、发
20、酵乳杆菌。乳酸乳杆菌等。n嗜酸乳杆菌，为一种细而长的杆菌，单在、成对或成短链排列，革兰氏阳性。不产生芽胞，不能运动，生长最适温度为35C42C，高于53C或低于20C时则不能生长，它是最早被利用的乳酸菌，常作为乳酸饮料的生产菌种。n干酪乳杆菌，为短杆状或长杆状细菌，呈短链或长链排列，能发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖产生乳酸，10-40均可生长，最适生长温度为30，能利用酪蛋白，在干酪制作中育重要作用。n n2、能使鲜乳发酵产气的细菌n 这类微生物能分解碳水化合物，生成乳酸及其它有机酸，并产生气体(二氧化碳和氢气)，能使牛乳凝固，产生多孔气泡，并产生异味和臭味。n大肠菌群，主要有大肠杆菌和产气杆
21、菌，这类细菌除产酸产气外，还能分解蛋白质，产生异味，影响乳的质量，这类垣葛弓苎说明卫生方面不合格。n丁酸菌类，主要有丁酸梭菌、魏氏梭菌等，使鲜乳产酸产气，其中的丁酸，气味恶臭，所产气体量很大，可使凝固的鲜乳裂成碎块，形成暴烈发酵现象。n丙酸细菌也能使鲜乳产酸产气，丙酸菌的发酵可使干酪形成网眼，并产生特殊的芳香风味，对干酪的品质有良好的影响。n n3、分解鲜乳蛋而发生胨化的细菌 n 这类腐败菌能分泌凝乳酶，使乳液中的酪蛋白发生凝固，然后又发生分解，使蛋白质水解胨化，变为可溶性状态。假单胞菌属，分解蛋白质能力极强，可将蛋白质形成胺和氨，并产生不良气味。n液化粪链球菌、蜡样芽胞杆菌、变形杆菌等使乳产
22、酸与蛋白质分解同时进行。产碱杆菌属、黄杆菌属、微球菌属等低温菌，能在低温条件下使蛋白质分解，从而使冷藏乳腐败变质并产生苦味。n n4、使鲜乳呈碱性的细菌 n主要有粪产碱菌和粘乳产碱菌，粪产碱菌不产生芽胞，菌体杆状，革兰氏阴性，好氧，有运动性，常存在于肠道内，由粪便混入鲜乳中；粘乳产碱菌不运动。其它特征粪产碱菌相似，常存在于水中，故通常由水混入到鲜乳中，使鲜乳变为粘稠。这两种纽重子笔分解柠檬酸盐为碳酸盐，而使鲜乳呈碱性反应。n n5、引起鲜乳变色的细菌 n正常鲜乳呈白色或略带黄色，由于某些细菌的发育可使乳呈现不同颜色。n深蓝色假单胞菌产生的色素，在中性或碱性乳中呈灰色，在酸性乳中呈蓝色。n黄假单
23、胞菌在乳中繁殖时，分解乳中的脂肪、蛋白质并产生淡黄色色素，从而使乳呈黄色，此外黄杆菌属的细菌增后也可使乳呈黄色。n粘质沙雷氏菌在乳中纯培养可引起红乳，但通常情况，由于其它细菌阢下量繁殖抑制了该菌生长，故红乳很少见。n n6、鲜乳中的嗜冷菌和嗜热菌n嗜冷菌主要是一些荧光细菌、霉菌等。n嗜热细菌主要是芽胞杆菌属内的某些菌种和一些嗜热性球菌等。n 7、鲜乳中的霉菌和酵母军 n 霉菌以酸腐节卵孢霉为最常见，其它还有乳酪节卵孢霉、多主枝孢霉，灰绿青霉、黑含天霉，异念球霉、灰绿曲霉和黑曲霉等。鲜乳中常见酵母为脆壁酵母、洪氏球拟酵母、高加索乳酒球拟酵母，球拟酵母等。n n8、鲜乳中可能存在的病原菌 n(1)
24、来自乳畜的病原菌n乳畜本身患传染病或乳房炎时，在乳汁中常有病原菌存在。常见的有结核分支杆菌、副结核分枝杆菌，布氏杆菌、溶血性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无孚L链球菌等。n(2)来自人为因素的病原菌n主要是工作人员患病或是带茵者，或者是生产过程中各方的污染，使鲜乳中带有某些病原菌：如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、志贺氏杆菌、霍乱弧菌、白喉杆菌、猩红热链球菌、人型结核分枝杆菌等。n(3)来自饲料被霉菌污染所产生的有毒代谢产物n如乳畜长期食用含有黄曲霉毒素(B1)的饲料，这种毒素可转变为存在于乳中的黄曲霉毒素(M1)。研究证明，饲料中黄曲霉毒素含量超过60ugkg时，就能造成乳的污染。（三）、鲜乳贮藏
25、过程中的微生物学变化n1、牛乳在室温下贮存时微生物的变化 n新鲜牛乳在杀菌前都有一定数量的、不同种类的微生物存在，如果放置在室温（10 一21 ）下，会因微生物在乳液中活动而逐渐使乳液变质。n室温下微生物的生长过程可分为以下几个阶段n(1)、抑制期n特征：牛乳中均含有多种抗菌性物质，它在最初阶段抑制牛乳中的微生物，使其中的微生物反而减少。n(2）、乳链球菌期n(3）乳酸杆菌期n(4）真菌期n(5）胨化菌期n2、牛乳在冷藏中微生物的变化n生鲜牛乳在未消毒即冷藏保存的条件下，一般的嗜温微生物在低温环境中被抑制；而属于低温微生物却能够增殖，但生长速度非常缓慢。低温中，牛乳中较为多见的细菌有：假单胞菌
26、、醋酸杆菌、产碱杆菌、无色杆菌、黄杆菌属等，还有一部分乳酸菌、微球菌、酵母菌和霉菌等。n冷藏乳的变质：主要指乳脂肪的分解。多数假单胞菌属中的细菌，均具有产生脂肪酶的特性，它们在低温时活性非常强并具有耐热性，即使在加热消毒后的牛乳中，残留脂肪酶还有活性。n冷藏牛乳中可经常见到低温细菌促使牛乳中蛋白分解的现象，特别是产碱杆菌属和假单胞菌属中的许多细菌，它们可使牛乳胨化。（四）、鲜乳中微生物的检验n1、样品的采集 n1）采样时要遵守无菌操作规程n2）瓶装鲜乳采取整瓶作样品，桶装的乳，先用灭菌搅拌器搅和均匀，然后用灭菌勺子采取样品。n3）检验一般细菌时，采取样品100ml，检验致病菌时，采样20030
27、0mL，倒入灭菌广口瓶至塞下部，立即盖上瓶塞，并迅速使之冷却至6以下。n应在采样后4小时内送检。样品中不准添加防腐剂。n 2、样品的处理 n 以无菌手续去掉瓶塞，瓶口经火焰消毒，手无菌吸管吸取25ml检样，置于装有225ml灭菌生理盐水的三角烧瓶内，混匀备用。n3、微生物检验 n乳中的微生物检验通常进行细菌总数测定、大肠菌群MPN测定和致病菌菌检验，这些微生物指标的测定可以参照有关的章节进行。还可以采用以下方法检验乳中的微生物。n(1)美蓝还原试验n存在于乳中的微生物在生长繁殖过程中能分泌出还原酶，可使美蓝还原而退色，还原反应的速度与乳中的细菌数量有关。根据美蓝退色时间，可估计乳中含菌数的多少
28、，从而评价乳的品质。操作方法如下：n无菌操作吸取被检乳5mL，注入灭菌试管中，加入025美蓝溶液0.25m1，塞紧棉塞，混匀，置37水浴中，每隔1015分钟观察试管内容物退色情况。退色的时间越快说明污染越严重。n n(2)刃天青试验n刃天青是氧化还原反应的指示剂，加入到正常鲜乳中呈青蓝色或微带蓝紫色，如果乳中含有细菌并生长繁殖时，能使刃天青还原，并产生颜色改变。根据颜色从青蓝红紫粉红白色的变化情况，可以判定鲜乳的品质优劣。n刃天青试验的反应速度比美蓝试验快，且为不可逆变色反应，适用于含菌数较高的乳类。n具体方法如下：n 用l0ml无菌吸管取被检乳样l0ml于灭菌试管中，如为多个被检样品，每个检
29、样需用1支l0ml吸管，并将乳样编号。n 用lml无菌吸管取0005刃天青水溶液lml加于被检试管中，立即塞仅无菌胶塞，将试管上下倒转23次，使之混匀。n 迅速将试管置于37度水浴箱内加热，(松动胶塞，勿使过紧)。n 水浴20分钟时进行首次观察，同时记录各试管内的颜色变化，去除变为白色的试管，其余试管继续水浴至60分钟为止。记录各试管颜色变化结果。根据各试管检样的变色程度及变色时间判定乳品质量，也可放在光电比色计中检视。详见下表。n刃天青试验颜色特征与乳品质量刃天青试验颜色特征与乳品质量n 颜色特征 n编号 乳品质量 处 理n 20分钟 60分钟 n6 青蓝色 青蓝色 优 可作鲜乳(消毒乳)或
30、制作炼乳用n5 青蓝色 微带青蓝色 良好 n 4 蓝紫色 红紫色 好n 3 红紫色 淡红紫色 合格 光电比色读数在3.5及1者，可 考虑做适当加工n 2 淡红紫色 粉红色 差 n 1 粉红色 淡粉红色或白色 劣 读数在0.5及0者，不得供食用n 0 白色 很劣n(3)乳房炎乳的检验n采用氯糖数的测定。所谓氯糖数即乳中氯的百分含量与乳糖的百分含量之比。正常乳中氯与乳糖的含量有一定的比例关系。健康牛乳中的氯糖数不超过4，乳房炎乳的氯糖数则增至710。（五）、鲜乳中抗生素残留的检验 n1乳中抗生素残留的检测方法n2乳中抗生素残留量的规定及去除 n乳中抗生素残留对人类健康危害极大，随着医学、生物学的发
31、展这种不良作用已得到深入了解，其中危害最大的是青霉素，链霉素的过敏性休克及抗药性的产生，只要存在微量的抗生素即可能引起，所以原则上乳中是不允许抗生素残留的。但限于检测水平未能达到如此敏感度，故只能以检测阳性者为不合格，阴性者为合格，所以“允许量”实际上等于检测方法本身的敏感度。n n1）目前国际上对乳中抗生素残留规定如下：n 在乳卫生管理上，许多国家规定乳牛(羊)在最后一次使用抗生素后的7296小时内的乳不可使用，我国规定的最后一次使用5天内的乳不可使用。n 2）乳中抗生素残留的去除n乳食用前加热消毒，可除掉不耐热的抗生素，对于性质稳定，耐热的抗生素就难以去除。青霉素在动物体内可与蛋白质结合，
32、形成稳定的结合物，并且不被热破坏，故对去除乳中青霉素残留有一定难度。到目前为止，去除乳中青霉素G的最好方法是用微生物产生的内酰胺酶来破坏乳中青霉素，含量较低的情况下，在18小时内就可使青霉素G的含量降到检不出的程度。二二 消毒乳中的微生物及其检验消毒乳中的微生物及其检验n消毒乳中残留的细菌类型n 1嗜冷菌和营冷菌 n在乳品工业上，把最适生长温度为10一20，在0或0以下均可生长的菌类称为嗜冷菌。n最适宜兰长温度为20一32，而在2一7冷藏条件下能够生长的细菌称为营冷菌。n在消毒乳贮存的环境中(2C一4)，营冷菌的繁殖胜过嗜冷菌。n 在乳品中存在的营冷菌，多数为革兰氏阴性无芽孢、氧化酶阳性的小杆
33、菌，主要为假单胞菌、黄杆菌和产碱杆菌的细菌。n 消毒乳中的营冷菌主要来自原料乳和杀菌后污染。n n2嗜热菌和耐热菌 n最适生长温度为50C一55度，最高生长温度为70C左右的菌类为专性嗜热菌。测定乳中专性嗜热菌含量，用菌落计数法，应用50C一55C培养。n还有一部分嗜热菌在37时也能生长，称之为兼性嗜热菌。n乳中的嗜热菌主要是需氧型和兼性厌氧型的芽胞杆菌。主要来自土壤、水和牛舍垫草。在原料乳中一般数量不多，乳在用低温长时间消毒时，由于使用的温度(63)适合此类菌生长，所以这些菌类常在消毒乳中出现。另外，它们还在加工设备上的残留乳中生长，造成消毒乳含菌量增高。乳反复进行消毒也会使嗜热菌数量增高。
34、n能耐过巴氏消毒，但在巴氏消毒温度(63)不能繁殖的菌类为耐热菌。主要是嗜中温菌，少数是营冷菌。在消毒乳中常见的耐热菌有节杆菌、芽胞杆菌、微杆菌、微球菌和部分葡萄球菌、链球菌等。n消毒乳中的耐热菌主要来自乳品加工设备，这些设备清洗和杀菌不彻底，有些耐热菌在设备上生长繁殖。原料乳中含菌量高也是原因之一。多数耐热菌在72以下不能生长，它们不会引起冷藏乳变质，高于这个温度即可生长繁殖，引起乳变质。n3大肠菌类 n这类菌不耐热，巴氏消毒即可杀死。消毒乳中有大肠菌类存在，说明是消毒盾污染的。它可作为食品卫生指标：消毒乳中大肠菌类超过卫生指标时，不但要检查成品的大肠菌类的含量，也应检查各个加工过程的乳，以
35、便查出污染原因。n n三三 乳制品中的微生物及其检验乳制品中的微生物及其检验n 乳除供鲜食外，还可制成多种制品，乳制品不但具有较长的保存期和便于运输等优点，而且也丰富了人们的生活。觉见的乳制品有奶粉，炼乳、酸乳及奶油等。n（一）、奶粉中的微生物及其检验n 奶粉是以鲜乳为原料，经茫毒，浓缩，喷雾干燥而制成的粉状产品。n可分为全脂奶粉、脱脂奶粉、加糖奶粉、调制萨砷等：在奶粉制作过程中，绝大部分微生物被清除或杀死，再者，奶粉含水量低(一般在于，以下，喷雾干燥奶粉水分在23左右)，不利于微生物存活，故经密封包装后，细菌不会繁殖。因此，奶粉中含菌量不高，也不会有病原菌存在。n如果原料乳污染严重，加工不规
36、范，奶粉中含菌量会很高，甚至有病原菌出现。n n1奶粉中的微生物夹原又类型 n奶粉中的细菌主要来源于以下几方面；n1）奶粉在浓缩干燥过程中，外界温度高达150200C，但奶粉颗粒内部温度只有60左右，其中会残留一部分耐热菌；n2）喷粉踏用后清扫不彻底，塔内残留的奶粉吸潮后会有细菌生长繁殖，成为污染源；n3）奶粉在包装过程中接触的容器、包装材料等可造成第二次污染；n4）原料乳污染严重是奶粉中含菌量高的主要原因。n 奶粉中污染的细菌主要有耐热的芽胞杆菌、微球菌、链球菌、棒状杆菌等。n 奶粉中可能有病原菌存在，最常见的是沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。n n2奶粉中的微生物检验n（1）样品的采取n产品按批
37、号取样检验，取样量为11000(不足千件者抽1件)，尾数超过500件者增抽一件，每个样品为200g。，n (2)奶粉按需要进行细菌总数、大肠菌群MPN测定及致病菌的检验：n n n（二）、酸乳制品中的微生物及其检验n 酸乳制品是鲜乳制品经过乳酸菌类发酵而制成的产品，如普通酸乳、嗜酸菌乳、保加利亚酸乳，强化酸乳、加热酸乳、果味酸牛奶、酸乳酒、马乳酒等都是营养丰富的饮料，其中含有大量的乳酸菌、活性乳酸及其它营养成分。n酸乳饮料能刺激胃肠分泌活动，增强胃肠蠕动，调整胃肠道酸碱平衡，抑制肠道内腐败菌群的生长繁殖，维持胃肠道正常微生物区系的稳定，预防和治疗胃肠疾病，减少和防止组织中毒，是上好的保健饮料。
38、n n1普通酸乳制品的微生物及其作用 n 1）普通酸乳一般用保加利亚乳酸杆菌和嗜热脂肪链球菌作为发酵剂。这两种乳酸菌在乳中生长时保持共生关系。n保加利亚乳酸杆菌在发酵过程中对蛋白质有一定的降解作用，产生的缬氨酸、甘氨酸和组氨酸等刺激嗜热脂肪链球菌的生长；而嗜热脂肪链球菌在生长过程中产生的甲酸，可被保加利亚乳酸杆菌所利用；这两株菌同时存在时，生长速度明显加快，乳的凝固时间也比使用单一菌株大大缩短，在4045两株菌混合使用时，乳凝固时间为23小时，而使用单一菌株时则需数小时或更长时间。n 2）普通酸乳中含有大约1的乳酸，不适于病原菌的生存。n如沙门氏菌和大肠菌类均被抑制。n3）乳酸菌还能产生抗菌物
39、质，起到净化酸乳的作用。n但如果鲜乳在加热前受到葡萄球菌污染，且乳在20常温下贮存，葡萄球菌可在乳中生长繁殖并产生毒素，在制作酸奶加热消毒过程中，葡萄球菌被杀死而毒素则留在乳中，并于乳发酸成熟过程中稳定存在，从而引起食物中毒。n n2嗜酸菌乳 n是利用嗜酸乳杆菌发酵乳而制成的乳制品。n嗜酸乳杆菌可在人和动物的胃肠道内定居，并能产生嗜酸菌素等多种抗菌物质，抑制有害菌类。维持肠道内微生物区系的平衡。人们常用嗜酸菌乳来治疗消化道疾患。但这种酸乳有酸涩味，为了改变适口性，近年来有人研制了甜嗜酸菌乳，其效果和适口性都很好。n 3酸乳酒 n其制作成热过程包括酒精发酵和乳酸发酵两个阶段。n发酵剂主要为开菲酵
40、母、高加索乳酸菌、明串球菌及乳链球菌等。发酵剂中酵母将乳中的乳糖分解转化成酒精，乳酸菌进行发酵产生乳酸和芳香物质。酸乳酒的乳酸含量为09一11，酒精含量为05一1。n n4果味酸牛奶 n是在普通酸牛奶的原料中，加入2脱脂奶粉，10食糖，规定量的食用色素等。灭菌后，除加入35基础果汁外，还添加5天然果汁，再加香料，硬化剂、色素及25左右发酵剂，使其发酵。发酵剂主要是保加利亚乳酸杆菌，但有的细菌能使色素还原，故添加色素稍多些。n 5马乳酒 n是用马乳制作的酸乳酒。发酵剂中的微生物区系是保加利亚乳杆菌和霍尔姆球拟酵母。制好的马乳具有酸味、酒味、并有大量泡沫，马乳酒凝固不够坚实，呈灰白色。n 酸乳检验
41、时，样品的采取应按生产班次分批，连续生产不能分班次者，则按生产日期分批。按批取样，每批样品按千分之一采样，每个样品为1瓶，尾数超过500者，增加一个样品。样品以无菌操作稀释后，按需要进行大肠菌群MPN测定、致病菌的检验等。n（三）干酪中的微生物及其检验n 干酪是用皱胃酶或胃蛋白酶将原料乳凝集，再将凝块进行加工、成型和发酵成熟而制成的一种营养价值高、易消化蛇乳制品。n 在生产干酪时，由于原料乳品质不良，稍化不彻底，或加工方法不当，往往会使干酪污染各种微生物而引起变质。干酪常见的变质现象有：n 1膨胀 n 这是由于大肠菌类等有害微生物利用乳糖发酵产酸产气而使干酪膨胀，并常伴有不良味道和气味。干酪成
42、熟初期发生膨胀现象，常常是由大肠杆菌之类的微生物引起。n如在成熟后期发生膨胀，多半是由于某些酵母菌和丁酸菌引起。并有显著的丁酸味和油腻味。n 2腐败 n当干酪了甄变瓮盐分不足时，腐败菌即可生长，使干酪表面湿润发粘，甚至整块干酪变成粘液状，并有腐败气味。n n3苦味 n由苦味酵母、液化链球菌、乳房链球菌等微生物强力分解蛋白质后，使干酪产生不快的苦味。n 4色斑 n 干酪表面出现铁锈样的红色斑点，可能由植物乳杆菌红色变种或短乳杆菌红色变种所引起。黑斑干酪、蓝斑干酪也是由某些细菌和霉菌所引起。n 5发霉 n干酪容易污染霉菌而引起发霉，引起干酪表面颜色变化，产生霉味，还有的可能产生霉菌毒素。n 6致病菌 n乳干酪在制作过程中，受葡萄球菌污染严重时，就能产生肠毒素，这种毒素在干酪中长期存在，食后会引起食物中毒。n进行干酪的微生物检验前，检样先用无菌刀削去部分表面封腊，以点燃的酒精面求消毒，无菌操作取25g检样，置于灭菌的研钵内切碎。从225ml的无菌生理盐水中去除少许加入研钵中，将奶酪研成糊状，放入灭菌三角瓶内，制成1：10的均匀稀释液，进行有关细菌学检验。
