1、家蚕新过敏原的鉴定及其过敏机制的研究 目的及意义12 研究结果3 研究结论蚕蛹是一种高蛋白的营养品，同时也是一味药用价值高的中药。目前我国有数千万养蚕农户，生产总值接近100亿美元；我国桑蚕文化历史悠久，家蚕是我国特色的经济昆虫；研究研究目的及意义目的及意义研究目的及意义研究目的及意义钟南山院士的研究结果指出家蚕是我国引发职业性哮喘的重要过敏原（Allergy.2009;64(7):1083-1092）；食用蚕蛹会引发消化道过敏性疾病，严重者可导致过敏性休克；目前关于家蚕过敏原的报导较少，且致敏机制尚不明确；本研究的目的是鉴定新的家蚕过敏原及探究其致敏机制，为临床上诊断和治疗家蚕过敏性疾病提供
2、理论基础。接触或吸入家蚕及其分泌物，可引起过敏性鼻炎和过敏性皮炎；分离并鉴定新的家蚕过敏原成功分离出成功分离出6 6个家蚕蚕蛹潜在过敏原个家蚕蚕蛹潜在过敏原AB对六个阳性斑点质谱分析后得到对六个阳性斑点质谱分析后得到6 6个基因序列个基因序列双向电泳分离家蚕粗提蛋白双向电泳分离家蚕粗提蛋白免疫印迹鉴定家蚕潜在过敏原免疫印迹鉴定家蚕潜在过敏原成功表达成功表达Thiol peroxiredoxinThiol peroxiredoxin（TPTP）并证明其具有强过敏原性）并证明其具有强过敏原性 体内实验探究家蚕的致敏机制TPTP可诱导小鼠发生过敏性哮喘可诱导小鼠发生过敏性哮喘TPTP通过调节通过调节
3、Th2Th2极化诱导小鼠发生过敏性哮喘极化诱导小鼠发生过敏性哮喘ABC脾细胞上清的脾细胞上清的IL-4IL-4升高而升高而IFN-IFN-没有变化没有变化血清中血清中IgEIgE明显升高明显升高 体外实验探究家蚕的致敏机制巨噬细胞巨噬细胞和和树突状细胞是哮喘发病树突状细胞是哮喘发病中中的关键细胞的关键细胞Macrophages和DCs是过敏原进入机体后首先接触的细胞（J Biol Chem.2001;276(40):37436-42）；在小鼠哮喘模型中，Macrophages释放多种细胞因子介导气道炎症及气道的重塑（ALLERGY.2015;70:80-89);Macrophages的凋亡，与
4、Asthma发病的严重程度呈正相关（JACI.2008;121:1328-1378）。DCs是体内最强的APC，表达各种PRRS,诱导机体初级免疫应答（JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE.2005;201:981-991）；DCs识别及递呈抗原，刺激天然CD4+T cells分化成Th1或者Th2(过敏性哮喘依赖)（Nat Med.2009;15:410-416）。巨噬细胞巨噬细胞和和树突状细胞是哮喘发病树突状细胞是哮喘发病中中的关键细胞的关键细胞TPTP可明显诱导巨噬细胞凋亡可明显诱导巨噬细胞凋亡A A：光学显微镜：光学显微镜下的结果，推测下的结果，推测TPTP
5、可可诱导巨噬细胞诱导巨噬细胞发生发生凋亡；凋亡；B B：荧光显微镜（：荧光显微镜（Hochest33258Hochest33258染色）染色）证实证实TPTP诱导巨噬细胞凋亡。诱导巨噬细胞凋亡。TPTP的浓度越高，细胞凋亡现象越明显的浓度越高，细胞凋亡现象越明显A A：TPTP可诱导巨噬细胞凋亡可诱导巨噬细胞凋亡；B B：TPTP的浓度越高，巨噬细胞的浓度越高，巨噬细胞 凋亡越明显。凋亡越明显。TPTP可明显调节可明显调节DCsDCs的功能的功能TPTP通过通过TLR4TLR4通路调节通路调节DCsDCs的功能的功能研究结论和展望本课题的研究结论本课题的研究结论体外实验证明TP可明显诱导mac
6、rophages凋亡，通过TLR4调节DCs的CD40、CD80、CD83和IFN-的表达；本研究成功分离出六组家蚕蚕蛹蛋白，并鉴定了其过敏原性；首次发现家蚕一个重要的新过敏原-Thiol peroxiredoxin（TP）（现已提交IUIS申请命名，并已得到受理）；体内实验证明TP可诱发过敏性哮喘,引起气道高反应性和Th2极化；为临床上诊断和治疗家蚕过敏性疾病提供了理论基础。作作者科研基础及下一步计划者科研基础及下一步计划本人曾在参与粉尘螨过敏原研究的课题中发表多篇SCI和中文核心期刊：lCharacterization and analysis of a cDNA coding for t
7、he group 29b(Der f 29b)allergen of Dermatophagoides farinaeJ.Am J Transl Res 2016;8(2):568-577.(并列第一作者,IF:3.402)；lIdentification of-tubulin,Der f 33,as a novel allergen from Dermatophagoides farinaeJ.Immunobiology.2016 Aug;221(8):911-7.（第二作者,IF:3.044）；l粉尘螨13.8kDa溶菌酶的克隆表达、纯化鉴定及生物信息学分析J.中国人兽共患病学报.DOI:
8、10.3969/j.issn.1002-2694.(第一作者)。下一步将研究肥大细胞和嗜碱性粒细胞在家蚕致敏过程中发挥的作用；本课题研究结果目前正在撰写和整理论文，待投稿:lBom m 10 from Bombyx mori is a novel protein related to asthma；lThiol peroxiredoxin,a novel allergen from Bombyx mori,induces airway allergy and modulates the function of monocytes；l家蚕小热休克蛋白20.4（HSP20.4）的克隆表达、纯化及生物信息学分析。
