1、z抗体的免疫反应是现今已知的最精妙复杂的身体抵御外部物质的系统。入侵物称作抗原，由于蛋白质和糖类等任何物质都可以成为抗原，抗原的形式是无限的。z抗体可与抗原选择性的反应，由于DNA中的遗传信息控制蛋白质合成，一个生物体有必要包含所有抗体的信息吗?是否是由几十亿条遗传信息合成几十亿种抗体来抵抗几十亿种抗原?人类仅有几万基因，容不下如此巨大的数量。与抗体有关的诺贝尔奖获得者与抗体有关的诺贝尔奖获得者1901von Bering血清治疗血清治疗1908Ehrlich&Metchnikoff抗体生成、吞噬抗体生成、吞噬1972Edelman&Poter抗体分子结构抗体分子结构1977Yalow放射免疫
2、测定放射免疫测定1984Koler,Milstein&Jerne单克隆抗体单克隆抗体1987TonegawaIg基因结构基因结构免疫学教研室1 1、抗体（、抗体（antibody,Abantibody,Ab)免疫学教研室2 2、免疫球蛋白、免疫球蛋白 (immunoglobulin(immunoglobulin，IgIg)是指存在于人和动物血液（血清）是指存在于人和动物血液（血清）组织液及其它分泌液中的一类具有组织液及其它分泌液中的一类具有相似结构的球蛋白相似结构的球蛋白。依据化学结构和抗原性的差异，依据化学结构和抗原性的差异，免免疫球蛋白可分为疫球蛋白可分为IgGIgG、IgMIgM、IgA
3、IgA、IgEIgE和和IgDIgD电泳分为四个部分电泳分为四个部分:白蛋白白蛋白(albumin)、-球蛋白、球蛋白、-球蛋白、球蛋白、-球蛋白。球蛋白。免疫学教研室 免疫球蛋白是化学结构上的概念免疫球蛋白是化学结构上的概念 抗体是生物学功能上的概念抗体是生物学功能上的概念 抗体都是免疫球蛋白抗体都是免疫球蛋白 并非所有的免疫球蛋白都是抗体并非所有的免疫球蛋白都是抗体 (比如比如membrane surface immunoglobulin,SmIgmembrane surface immunoglobulin,SmIg)3.Ab3.Ab与与IgIg的区的区别别免疫学教研室第二节第二节 免疫
4、球蛋白的结构免疫球蛋白的结构 免疫学教研室一、基本结构一、基本结构 所有种类免疫球蛋白的单体分子结所有种类免疫球蛋白的单体分子结构都是相似的，即是由两条相同的重构都是相似的，即是由两条相同的重链和两条相同的轻链四条肽链经二硫链和两条相同的轻链四条肽链经二硫键连接构成的键连接构成的字形分子。字形分子。免疫学教研室(一一)重链与轻链重链与轻链重链（重链（heavy chain)简简称称H链：链：分子量分子量555575ku75ku，由，由420-440420-440个氨基酸组成。个氨基酸组成。根据重链抗原性的不同，可将其分为根据重链抗原性的不同，可将其分为、五种，据此将免疫球蛋白分为五类，分别为：
5、五种，据此将免疫球蛋白分为五类，分别为：IgA、。免疫学教研室(一一)重链与轻链重链与轻链轻链（轻链（light chain）简简称称 L链：链：分子量分子量22.5ku，由由213-214个氨基酸组成。个氨基酸组成。可分为可分为链及链及链两种。链两种。天然天然Ig分子中，重链同类，轻链同型，分子中，重链同类，轻链同型，因此我们可以将因此我们可以将Ig分为五类十型分为五类十型。免疫学教研室(二二)可变区与恒定区可变区与恒定区免疫学教研室(三三)高变区与骨架区高变区与骨架区高变区（高变区（hypervariable region）简称简称HVR 或或HR，是，是V区中氨基酸的组成和排列顺序变化频
6、率区中氨基酸的组成和排列顺序变化频率更高的区域，也是更高的区域，也是抗体与抗原特异性结合的部位抗体与抗原特异性结合的部位，又称为决定簇互补区（又称为决定簇互补区（CDR），又是），又是Ig分子独特分子独特型决定簇主要存在的部位。型决定簇主要存在的部位。其中重链有其中重链有4个高变区，轻链有个高变区，轻链有3个高变区。个高变区。免疫学教研室(三三)高变区与骨架区高变区与骨架区 重链：重链：3137，5158，8491，101110 轻链：轻链：2632，4855，9095 免疫学教研室(三三)高变区与骨架区高变区与骨架区骨架区（骨架区（framework region,Fr）：）：V区以外的区以
7、外的部位，稳定部位，稳定HVR的结构。的结构。免疫学教研室(四四)铰链区铰链区绞链区（绞链区（）位于位于CH1与与CH2之间，之间，含有丰富的脯氨酸，具有很好的弹性，可以自由含有丰富的脯氨酸，具有很好的弹性，可以自由展开至展开至180度。度。易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。二、功能区二、功能区免疫学教研室二、功能区二、功能区免疫学教研室二、功能区二、功能区免疫学教研室二、功能区二、功能区免疫学教研室二、功能区二、功能区三、水解片段与生物活性三、水解片段与生物活性免疫学教研室三、水解片段与生物活性三、水解片段与生物活性（一）经木瓜蛋白酶（一）经木瓜蛋白酶(Papa
8、in(Papain)水解后形成两个相同水解后形成两个相同的的F(abF(ab)和个和个FcFc两个片段。两个片段。F(abF(ab)结合抗原结合抗原FcFc 有多种生物学活性，结合补体、固定有多种生物学活性，结合补体、固定细胞、通过胎盘等。细胞、通过胎盘等。免疫学教研室三、水解片段与生物活性三、水解片段与生物活性 （二）胃蛋白酶（二）胃蛋白酶(Pepsin)(Pepsin)作用于绞链区的第一个作用于绞链区的第一个二硫键的下方酶解后形成二硫键的下方酶解后形成F(ab)2F(ab)2及及pFcpFc两个两个片段。片段。F(ab)2F(ab)2具有双价抗体活性具有双价抗体活性,与抗原结合后能与抗原结
9、合后能形成沉淀或凝集。形成沉淀或凝集。pFcpFc 小分子多肽碎片，不具有任何生物学小分子多肽碎片，不具有任何生物学活性。活性。免疫学教研室免疫学教研室四、免疫球蛋白的特殊分子结构四、免疫球蛋白的特殊分子结构(一一)连接链（连接链（，J链）链）由浆细胞合成的一种糖蛋白。由浆细胞合成的一种糖蛋白。IgA和和IgM含有含有J链链 可稳定可稳定Ig多聚体的成份多聚体的成份免疫学教研室四、免疫球蛋白的特殊分子结构四、免疫球蛋白的特殊分子结构（2）分泌片）分泌片(是分泌型是分泌型IgA(sIgA）的一个辅助成分，由粘膜）的一个辅助成分，由粘膜上皮细胞合成和分泌。保护上皮细胞合成和分泌。保护sIgA的铰链
10、区免受蛋的铰链区免受蛋白酶的水解破坏介导白酶的水解破坏介导IgA二聚体的转运二聚体的转运第三节第三节免疫球蛋白的种类和抗原性免疫球蛋白的种类和抗原性1、免疫球蛋白的种类：免疫球蛋白可分、免疫球蛋白的种类：免疫球蛋白可分为类、亚类、型、亚型及亚群等。为类、亚类、型、亚型及亚群等。分类：分类：根据根据CH上同种型决定簇的不同，将上同种型决定簇的不同，将Ig分为分为 IgG、IgM、IgA、IgD、IgE 五类五类亚类：亚类：IgG:G1、G2、G3、G4 IgA:A1、A2 IgM:IgM1和和IgM2分型：根据分型：根据CL上同种型决定簇的不同：上同种型决定簇的不同：和和 型型亚型：亚型：1、2
11、、3、42、免疫球蛋白的抗原性 同种型：同种型：指同一物种内所有个体共有的Ig的抗原特异性结 构。同种型抗原决定簇存在于Ig的CH、CL区。同种异型：同种异型：指同一物种内不同个体间的Ig在抗原性上的差异。同种异型抗原决定簇存在于Ig的CH1、CL区的特定部位。独特型：独特型：同一个体内不同B细胞克隆产生的IgV区的抗原特异性各不相同，其超变区各自具备的独特抗原决定簇结构，称为抗体的独特型。独特型决定簇存在于Ig的高变区第四节第四节各类免疫球蛋白的主要特性与功能各类免疫球蛋白的主要特性与功能1 1IgGIgG：（单体）：（单体）z（1）分4个亚类z（2）血清含量最高，持续时间长，主力免疫z（3
12、）出生后3月开始合成，半衰期长21天左右z（4）唯一通过胎盘的Igz（5）丙种球蛋白的主要成分z（6）抗感染、抗肿瘤、超敏反应2IgM：（五聚体或单体）z（1）分子量最大z（2）合成最早、但持续时间短，早期抗感染免疫z（3）具有强大的调理、激活补体及杀菌作用z（4）血型抗体主要为IgMz（5）参与自身免疫、超敏反应z单体IgM：SmIgM为B细胞最早出现的重要表面标志 3.IgA：z血清型IgA：单体，存在于血清中，免疫作用弱z分泌型IgA：双体、三体及多体z（1）粘膜免疫：存在于乳汁、唾液及外分泌液中z（2）局部免疫、激活补体（替代途径）、ADCC4IgD：z（1）血清含量极低，极不稳定，易
13、降解z（2）B细胞的重要表面标志，与免疫记忆有关z（3）防止免疫耐受的发生5IgE：z（1）正常时含量极低（0.002%）z（2）抗寄生虫免疫，参与超敏反应第五节第五节 抗体的制备抗体的制备一、人工制备抗体的种类多克隆抗体：采用传统的免疫方法，将抗原物质经不同的途径进入动物体内，经数次免疫后采取动物血液，分离出血清，由此获得的抗血清即为多克隆抗体。单克隆抗体：由一个B细胞分化增殖的子代细胞产生的针对单一抗原决定簇的抗体，称单克隆抗体由一个由一个B B细胞克隆产生。细胞克隆产生。识别一种抗原表位。识别一种抗原表位。高度均一（结构、特异性）。高度均一（结构、特异性）。杂交瘤技术制备。杂交瘤技术制备
14、。基因工程抗体：利用基因工程技术来制备的抗体分子称为基因工程抗体，是分子水平的抗体。z杂交瘤抗体技术的基本原理：杂交瘤抗体技术的基本原理：脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有在选择培养基的作用下，只有B B细胞与骨髓瘤细细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的具
15、备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。其原理从下列几个主要步骤阐明。细胞克隆。其原理从下列几个主要步骤阐明。单克隆抗体的制备1、B细胞制备2、骨髓瘤细胞制备3、饲养细胞的制备4、选择培养基5、细胞融合6、检测抗体7、杂交细胞瘤克隆化8、单克隆抗体的生产骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞：HGPRTHGPRT-，TKTK-13%21.7%52.3%13%1.人人-鼠嵌合抗体：鼠嵌合抗体：应用基因工程技术将小鼠单克隆抗体应用基因工程技术将小鼠单克隆抗体的恒定区用人源抗体恒定区代替而拼接成嵌合抗体。的恒定区用人源抗体恒定区代替而拼接成嵌合抗体。2.2.改型抗体如改型抗体如CDRCDR移植、移植、SDR
16、SDR移植：移植：用鼠单克隆抗体的用鼠单克隆抗体的CDRCDR、SDRSDR移植到人源抗体可变区，替代人源抗体移植到人源抗体可变区，替代人源抗体CDRCDR、SDRSDR。3.3.表面氨基酸残基人源化表面氨基酸残基人源化抗体人源化的主要技术BsAbBsAb效应效应细胞细胞靶细胞靶细胞触发受体触发受体膜表面分子膜表面分子 NK细胞细胞 CD16肿瘤细胞肿瘤细胞HER2/neu抗抗HER2/neu抗抗CD16 BsAbBsAb（a)BsAb桥连效应细胞和靶细胞；桥连效应细胞和靶细胞；(b)连接的触发分子启动细胞毒反应；连接的触发分子启动细胞毒反应；(c)效应细胞效应细胞对靶细胞产生致死性杀伤反应。对靶细胞产生致死性杀伤反应。细胞毒反应细胞毒反应双特异性抗体作用原理双特异性抗体作用原理HER2/neu(also known as ErbB-2)stands for Human Epidermal growth factor Receptor 2 CD16(FcRIII)1.1.抗体；抗体；2.2.免疫球蛋白；免疫球蛋白；3.3.反应原性；反应原性；4.4.构成抗原的条件；构成抗原的条件；5.5.抗原决定簇；抗原决定簇；本章要点本章要点
