1、2023-2-71第十五章第十五章长期毒性作用及其试验方法长期毒性作用及其试验方法 long-term toxicity impact and test method 2023-2-722023-2-73 长期毒性试验是指试验动物连续多日长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药物所引起的中毒效应接触较大剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验称之为称之为长期长期(慢性慢性)毒性毒性试验试验。一、定义一、定义基本概念和目的基本概念和目的2023-2-74长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基
2、本概念和目的基本概念和目的 急性毒性试验急性毒性试验：24 24 小时内小时内单次或单次或多次多次大剂量大剂量给给予予某某药药所出现的有害作用；机体（人或动物）一性大所出现的有害作用；机体（人或动物）一性大剂量接受某药后所产生的快速而剧烈的中毒反应。剂量接受某药后所产生的快速而剧烈的中毒反应。长期毒性试验长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量是指试验动物连续多日接触较大剂量的药物所引起的中毒效应的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效应而为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验称之为设计的毒理学试验称之为长期长期(慢性慢性)毒性毒性试验试验。2023-2-751.1.给药的期限不同给药的期限
3、不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的基本概念和目的 急性毒性试验为一次性给药或急性毒性试验为一次性给药或 24 24 小时内小时内多次给药多次给药；长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给药药，给药期限为临床用药的给药期限为临床用药的 3-4 3-4 倍时间。倍时间。对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。2023-2-761.1.给药的期限不同给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的基本概念和目的2
4、2.给药的给药的剂量范围剂量范围不同不同。急性毒性试验为一次性急性毒性试验为一次性大剂量大剂量给药给药 长期毒性试验为长期毒性试验为低低剂量剂量长期积累长期积累2023-2-771.1.给药的期限不同给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的基本概念和目的2 2.给药的给药的剂量范围剂量范围不同不同。3 3.观察毒效应观察毒效应不同不同。急性毒性试验急性毒性试验通常观察以死亡为效应的质反通常观察以死亡为效应的质反应；应；长期毒性试验长期毒性试验以以量量反应为指标，毒效应是从反应为指标，毒效应是从量变到质变逐渐变化的过程。量变到质变逐
5、渐变化的过程。2023-2-78蓄积作用蓄积作用(accumulation action)药物进入机体后药物进入机体后，机体具有对药物进行代谢、机体具有对药物进行代谢、转化及排泄的功能转化及排泄的功能，最终将其排出体外。但最终将其排出体外。但当较长当较长时间连续、反复给药时间连续、反复给药，或者说给药的时间间隔和剂或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时量超过机体消除药物的能力时，出现药物进入机体出现药物进入机体的速度的速度 (或总量或总量 )超过排除的速度超过排除的速度 (或总量或总量 )的现象的现象，这时药物就可能在体内逐渐增加并贮存起这时药物就可能在体内逐渐增加并贮存起来来，也
6、就是说出现了蓄积作用也就是说出现了蓄积作用。基本概念和目的基本概念和目的2023-2-79蓄积作用蓄积作用(accumulation action)作用量积蓄作用量积蓄为可用化学方法检测出为可用化学方法检测出。功能性蓄积功能性蓄积（药物或其代谢物药物或其代谢物）不一定能用化学不一定能用化学手段检测出来手段检测出来，但却有慢性毒性但却有慢性毒性症状症状出现出现；或或者说者说由于贮存在体内的药物或其代谢产物的量极微而现由于贮存在体内的药物或其代谢产物的量极微而现有的方法尚不足以测出有的方法尚不足以测出，但由于多次接触引起轻微但由于多次接触引起轻微损害的累积而出现慢性毒性症状。损害的累积而出现慢性毒
7、性症状。基本概念和目的基本概念和目的2023-2-710二、目的与意义二、目的与意义p观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有无观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有无蓄积作用蓄积作用，试验动物能否产生，试验动物能否产生耐受性耐受性，试验动物会出现，试验动物会出现哪些哪些毒性反应毒性反应，其，其剂量效应关系剂量效应关系如何，涉及哪些组织，如何，涉及哪些组织，主要主要靶器官靶器官是什么，是什么，损害的性质和程度损害的性质和程度如何，损害是否如何，损害是否可逆可逆等；等；p观察在给试验动物长期重复给药的情况下，初步估计不观察在给试验动物长期重复给药的情况下，初步估计不出现毒性作用的出
8、现毒性作用的最大耐受量最大耐受量和出现毒性作用的和出现毒性作用的最小剂量最小剂量，为拟定人用药的安全剂量提供参考。为拟定人用药的安全剂量提供参考。基本概念和目的基本概念和目的2023-2-711第二节第二节试试 验验 设设 计计 原原 则则 及及 方方 法法2023-2-712一、一般原则和要求一、一般原则和要求试验设计原则及方法试验设计原则及方法试验设计原则及方法试验设计原则及方法 一般的观点是一般的观点是以药政部门的技术要求规以药政部门的技术要求规范为核心范为核心，同时同时兼顾给药时限和给药剂量兼顾给药时限和给药剂量这这两个重要因素两个重要因素，对整个长期毒性试验做一个对整个长期毒性试验做
9、一个较为合理的安排和设计较为合理的安排和设计，力争高效率、全面力争高效率、全面地了解药物长期给药所造成的有害反应及量地了解药物长期给药所造成的有害反应及量-效关系。效关系。2023-2-714二、实验动物二、实验动物 1.1.种类及品系种类及品系n 首先考虑急性毒性试验业已证明的、对药物敏感的首先考虑急性毒性试验业已证明的、对药物敏感的动物或品系。动物或品系。n 其次考虑受试动物的易获得性其次考虑受试动物的易获得性n 在现阶段，选择易得、实验室易于饲养管理、饮食在现阶段，选择易得、实验室易于饲养管理、饮食习性与人接近或吃一般的食物就可以正常生存的常规习性与人接近或吃一般的食物就可以正常生存的常
10、规动物。动物。n 我国规定：两种动物，一种为啮齿类，首选大鼠，我国规定：两种动物，一种为啮齿类，首选大鼠，另一种非啮齿类，首选狗。另一种非啮齿类，首选狗。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-716二、实验动物二、实验动物 1.1.种类及品系种类及品系2.2.起始月（周）龄、起始月（周）龄、n 原则：选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物原则：选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物n 大鼠：大鼠：6 69 9周；可降至周；可降至5 5周；周；n 犬：犬：6 6 1212月龄；杂种犬最高不超过月龄；杂种犬最高不超过5 5年年n 起始体重应在体重均值起始体重应在体重均值20%20%内内
11、试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-717二、实验动物二、实验动物 1.1.种类及品系种类及品系2.2.起始月（周）龄起始月（周）龄3.3.性别及数量性别及数量n 敏感动物、雌雄兼顾敏感动物、雌雄兼顾n 大鼠雌雄各大鼠雌雄各10103030只；只；Beagle Beagle 犬或猴雌、雄各犬或猴雌、雄各 3 36 6 只只试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-718二、实验动物二、实验动物 1.1.种类及品系种类及品系2.2.起始月（周）龄起始月（周）龄3.3.性别及数量性别及数量4.4.饲养管理饲养管理 动物饲养室内温度、湿度、光照、通风条件；动物饲养室内温度、湿度
12、、光照、通风条件；动物饮水质量及饲料配方等；动物笼具等。严格动物饮水质量及饲料配方等；动物笼具等。严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素。控制环境条件，避免不必要的干扰因素。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-719三、给药期限三、给药期限试验设计原则及方法试验设计原则及方法与拟定的临床疗程长短、临床适应症、用药人群相与拟定的临床疗程长短、临床适应症、用药人群相关，应充分考虑预期临床的实际疗程。关，应充分考虑预期临床的实际疗程。原则上取决于临床拟定的用药时间，我国要求长期原则上取决于临床拟定的用药时间，我国要求长期毒性试验的给药期限为临床疗程的毒性试验的给药期限为临床疗程的 3
13、34 4 倍时间。倍时间。创新药品试验周期应不少于创新药品试验周期应不少于 90 90 天；超过天；超过 180 180 天天的新药可以在试验开始的新药可以在试验开始 90 90 天后，同时进行天后，同时进行 I I 期期临床试验。临床试验。2023-2-720 临床拟用临床拟用 毒性试验期限毒性试验期限 给药时间给药时间 啮齿类动物啮齿类动物 非啮齿类动物非啮齿类动物5天天 2周周 2周周2周周 1月月 1月月 24周周 3月月 3月月 13月月 6月月 6月月 3月月 6月月 9月月 试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-721四、剂量水平的选择四、剂量水平的选择 三个剂量组是
14、必不可少的：三个剂量组是必不可少的：n 高剂量应足以引起明显的毒性反应，但死亡率应控制在高剂量应足以引起明显的毒性反应，但死亡率应控制在 20%20%以内；以内；n 低剂量应不引起毒性作用，原则上应高于同种动物药效低剂量应不引起毒性作用，原则上应高于同种动物药效的有效剂量（的有效剂量（一般为动物有效剂量或临床治疗量的一般为动物有效剂量或临床治疗量的2 2 3 3倍倍）；）；n 为表明毒性作用的量为表明毒性作用的量效关系，在上述两个剂量之间插效关系，在上述两个剂量之间插入一个（入一个（或多个）中间剂量。或多个）中间剂量。试验设计原则及方法试验设计原则及方法中剂量按 计算 高剂量低剂量X2023-
15、2-722四、剂量水平的选择四、剂量水平的选择 在选择合适的剂量时还应考虑到：在选择合适的剂量时还应考虑到：n药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用；能出现毒性作用；n药物是否有可能被特殊的酶所药物是否有可能被特殊的酶所“解毒解毒”或或“活化增毒活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。n药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和
16、性的药物，则应酌情增加剂量。药物，则应酌情增加剂量。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-723剂量水平选择剂量水平选择的方法的方法（1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法）一般在一般在大鼠大鼠3 3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采用约量可分别采用约LDLD5050的的1/101/10、1/501/50和和1/1001/100剂量，剂量，狗狗各剂量组各剂量组可采用大鼠相应各组的一半剂量。可采用大鼠相应各组的一半剂量。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-724剂量水平选择剂量水平选择的方法的方法（1）半数致死量
17、法（）半数致死量法（LD50法）法）试验设计原则及方法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法9090天重复给药试验天重复给药试验180180天或更长期重复给药试验天或更长期重复给药试验蓄积毒性试验和蓄积毒性试验和/或或7 7天短期重复给药试验天短期重复给药试验急性毒性试验急性毒性试验2023-2-725剂量水平选择剂量水平选择的方法的方法（1）半数致死量）半数致死量（LD50LD50）法法试验设计原则及方法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3 3）药代动力学（）药代动力学（MBSMBS）法）法 根据药代动力学的结果，参照最大有效安全浓度根据
18、药代动力学的结果，参照最大有效安全浓度（MCDMCD），），大鼠大鼠3 3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别采用大鼠的量可分别采用大鼠的1.0 1.0、3.33.3 6.6 6.6 和和1010 20 MCD20 MCD；狗狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。一般可采用大鼠一半左右的剂量。2023-2-726剂量水平选择剂量水平选择的方法的方法（1）半数致死量）半数致死量（LD50LD50）法法试验设计原则及方法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3 3）药代动力学（）药代动力学（MBSMBS）法）法（4）最大耐受量法（）最
19、大耐受量法（MTD法）法）用用大鼠大鼠急性毒性的最大无症状剂量，即一个最大耐受急性毒性的最大无症状剂量，即一个最大耐受量（量（1MTD1MTD）、）、1/3MTD1/3MTD、1/10MTD1/10MTD分别作为大鼠长期毒性试验分别作为大鼠长期毒性试验的三个剂量，的三个剂量，狗和猴狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。可采用大鼠一半左右的剂量。2023-2-727剂量水平选择剂量水平选择的方法的方法（1）半数致死量）半数致死量（LD50LD50）法法试验设计原则及方法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3 3）药代动力学（）药代动力学（MBSMBS）法）法（4）最大耐受量
20、法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法）根据同类型药物或国外资料或临床拟用剂量推算，根据同类型药物或国外资料或临床拟用剂量推算，一般一般3 3个月长期毒性试验时，个月长期毒性试验时，大鼠大鼠采用采用50-10050-100倍、倍、25-5025-50倍和倍和10-2010-20倍临床剂量，倍临床剂量，狗狗采用采用30-5030-50倍、倍、15-2515-25倍和倍和5-5-1010倍临床剂量，倍临床剂量，猴猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验。剂量进行试验。2023-2-728剂量水平选择剂量水平选择的
21、方法的方法（1）半数致死量）半数致死量（LD50LD50）法法试验设计原则及方法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3 3）药代动力学（）药代动力学（MBSMBS）法）法（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法）（6）等效剂量法）等效剂量法2023-2-729不同动物的剂量折算系数不同动物的剂量折算系数 动物种属动物种属 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 猫猫 猴猴 狗狗 人人标准标准 K(剂量折算系数剂量折算系数)1 7 12.3 27.5 29.7 64 124 388体重体重 K(kg体重剂量折算
22、系数体重剂量折算系数)1 0.71 0.62 0.37 0.30 0.32 0.21 0.11任何任何 R(动物体型系数动物体型系数)0.059 0.09 0.099 0.093 0.082 0.111 0.104 0.1体重体重 W(标准体重标准体重kg)0.02 0.2 0.4 1.5 2 4 12 70注：有些资料记载的动物体型系数（注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中）为此表中R 值的值的1000 倍，如小鼠倍，如小鼠R 为为59，大鼠，大鼠R 为为90，这不影响药物剂量的折算。，这不影响药物剂量的折算。2023-2-730对于标准体重的动物：对于标准体重的动物：每只用量（每只
23、用量（mg/只）只）DB DAKBKA千克体重剂量（千克体重剂量（mg/kg）dB dBKBKAKA，KB，RA，RB 值由上表查找。值由上表查找。2023-2-731对于任何体重的动物：对于任何体重的动物：每只用量（每只用量（mg/只）只）DB DARB(WB)2/3RAWA千克体重剂量（千克体重剂量（mg/kg）dB dARB(WB)2/3RAWA式中式中D DB B、d dB B 分别是欲计算的分别是欲计算的B B 种动物的每只剂量及公斤体种动物的每只剂量及公斤体重剂量，重剂量，D DA A、d dA A 分别是已知分别是已知A A 种动物的每只剂量及公斤体种动物的每只剂量及公斤体重剂量
24、，重剂量，W WA A、W WB B 是已知动物体重，是已知动物体重，R RA A、R RB B 是体型系数，可是体型系数，可由上表查得由上表查得。2023-2-732剂量水平选择剂量水平选择的方法的方法（1）半数致死量）半数致死量（LD50LD50）法法试验设计原则及方法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3 3）药代动力学（）药代动力学（MBSMBS）法）法（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法）（6）等效剂量法）等效剂量法2023-2-733五、限度试验五、限度试验试验设计原则及方法试验设计原则及
25、方法p 关于基本无毒或低毒的药物关于基本无毒或低毒的药物(如许多新药及食品如许多新药及食品添加剂添加剂)应如何选择剂量的问题应如何选择剂量的问题，也就是剂量的试也就是剂量的试验限度问题。验限度问题。p 我国药政部门规定我国药政部门规定，如小鼠急性毒性的口服给如小鼠急性毒性的口服给药剂量大于药剂量大于 5g/kg5g/kg，注射给药剂量大于注射给药剂量大于 2g/kg2g/kg仍未仍未产生毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时产生毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时，可考虑只做一个高于临床拟用剂量可考虑只做一个高于临床拟用剂量5050倍倍(狗用狗用3030倍倍)的剂量组。的剂量组。2023-2
26、-734五、限度试验五、限度试验 经济合作与开发组织经济合作与开发组织（OECDOECD）提出如果一提出如果一种化合物以种化合物以1000mg/kg1000mg/kg的剂量的剂量，按规定期限连续按规定期限连续给药给药，不产生任何可观察到的毒性反应不产生任何可观察到的毒性反应，而且根而且根据结构相关药物的已有资料据结构相关药物的已有资料，估计不会产生毒性估计不会产生毒性的话的话，就不需要再用三个剂量来进行试验就不需要再用三个剂量来进行试验，除非除非预期临床需要更高的剂量。预期临床需要更高的剂量。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-735六、给药方法六、给药方法o给药途径尽量与预期临
27、床使用的途径相一致。给药途径尽量与预期临床使用的途径相一致。o临床用药途径为静脉或肌注时，临床用药途径为静脉或肌注时，3 3个月及以上的个月及以上的试验，大鼠给药可用腹腔或皮下注射代替。试验，大鼠给药可用腹腔或皮下注射代替。o采用灌胃给药的方式可将供试药物制成一种溶采用灌胃给药的方式可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过 1 12ml/100g 2ml/100g 体重体重/天。天。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-736六、给药方法六、给药方法o长期毒性试验长期毒性试验一般均强调每天给药，每周必须一般均强调每天给药，每
28、周必须给药给药 7 7 天。天。n对那些在体内代谢特别快的药物，还可以考对那些在体内代谢特别快的药物，还可以考虑增加给药频率；虑增加给药频率；n对那些在体内滞留时间较长的药物，最好参对那些在体内滞留时间较长的药物，最好参考血药浓度制定给药方案。考血药浓度制定给药方案。o长期毒性试验必须每周称一次体重长期毒性试验必须每周称一次体重，以调整给以调整给药剂量药剂量。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-737七七、观察及测定指标、观察及测定指标n药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的体药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的体格检查，日常观察，食耗及饮水量，体重和器官重格检查，日常
29、观察，食耗及饮水量，体重和器官重量，血液学指标，心电图描记，尿液分析，临床生量，血液学指标，心电图描记，尿液分析，临床生化检验及化检验及病理组织学病理组织学研究加以确认。研究加以确认。n在整个研究期间至少应每天或每两天作一次详细的在整个研究期间至少应每天或每两天作一次详细的观察。观察。n长期毒性试验必须留长期毒性试验必须留1/3 1/3 的动物做的动物做恢复期的观察试恢复期的观察试验验，其观察期的时间一般不超过，其观察期的时间一般不超过 28 28 天。天。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-738（一一）日常观察日常观察 1.1.一般内容一般内容一切可以反映动物生活情况变化的各
30、种迹一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象象n实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道（及其分泌及其分泌物物 ）、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动情况以及精神行为情况以及精神行为n对动物粪便的量、色泽和内含物对动物粪便的量、色泽和内含物、散失的食物散失的食物，饮水瓶饮水瓶中残余的水中残余的水n所有出现的症状都必须记录在案。所有出现的症状都必须记录在案。n如果发现动物死亡如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖检必须尽可能快地进行尸体剖检，以以减少组织自溶。减少组织自溶。观察及测定指标观察及测定指标-1-1202
31、3-2-739（一一）日常观察日常观察 1.1.一般内容一般内容2.2.生长率生长率3.3.食耗食耗 单位体重增长的食物需求，用来评价给药对单位体重增长的食物需求，用来评价给药对食欲及食物利用率的影响。食欲及食物利用率的影响。观察及测定指标观察及测定指标-1-12023-2-740（二（二）测定指标测定指标 1.1.器官重量器官重量观察及测定指标观察及测定指标-2-2长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官脑脑心脏心脏肝脏肝脏肺脏肺脏脾脏脾脏肾脏肾脏肾上腺肾上腺胸腺胸腺睾丸睾丸附睾附睾子宫子宫 卵巢卵巢2023-2-741（二（二）测定指标测定指标 1.
32、1.器官重量器官重量2.2.血液学血液学观察及测定指标观察及测定指标-2-2血液学指标血液学指标l 红细胞计数红细胞计数l 血红蛋白血红蛋白l 红细胞容积红细胞容积l 平均红细胞容积平均红细胞容积l 平均红细胞血红蛋白平均红细胞血红蛋白l 平均红细胞血红蛋白浓度平均红细胞血红蛋白浓度l 网织红细胞计数网织红细胞计数l 白细胞计数及分类白细胞计数及分类l 血小板计数血小板计数l 凝血酶原时间凝血酶原时间骨髓涂片是造血系统骨髓涂片是造血系统检查中必不可少的项目检查中必不可少的项目2023-2-742（二（二）测定指标测定指标 1.1.器官重量器官重量2.2.血液学血液学p对于非啮齿类动物一般于整个
33、试验周期中每隔对于非啮齿类动物一般于整个试验周期中每隔1.51.5 2 2个月采血测定一次指标；个月采血测定一次指标；p对于啮齿类动物，当实验周期为对于啮齿类动物，当实验周期为6 6个月时，于试验中期、个月时，于试验中期、未期及恢复期分别剖杀动物（未期及恢复期分别剖杀动物（1/41/4、2/42/4、1/41/4）进行各）进行各项检查；当实验周期为项检查；当实验周期为3 3个月时，于试验未期及恢复期个月时，于试验未期及恢复期分别剖杀动物（分别剖杀动物（2/32/3、1/31/3）进行各项检查）进行各项检查观察及测定指标观察及测定指标-2-22023-2-743（二（二）测定指标测定指标 1.1
34、.器官重量器官重量2.2.血液学血液学3.3.血液生化学血液生化学观察及测定指标观察及测定指标-2-2血液生化学指标血液生化学指标l 天冬氨酸氨基转换酶（天冬氨酸氨基转换酶（ASTAST）l 丙氨酸氨基转换酶（丙氨酸氨基转换酶（ALTALT）l 碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALPALP）l 肌酸磷酸激酶（肌酸磷酸激酶（CPKCPK）l 尿素氮（尿素氮（BUNBUN）l 肌酐（肌酐（CreCre）l 总蛋白总蛋白（TPTP）l 白蛋白（白蛋白（AlbAlb）l 血糖（血糖（GluGlu）l 总胆红素（总胆红素（T-BILT-BIL）l 总胆固醇（总胆固醇（TCTC）l 甘油三酯（甘油三酯（TGTG）
35、l-谷氨酰转移酶（谷氨酰转移酶（GGTGGT）l 钾离子浓度钾离子浓度l 氯离子浓度氯离子浓度l 钠离子浓度钠离子浓度2023-2-744（二（二）测定指标测定指标 1.1.器官重量器官重量2.2.血液学血液学3.3.血液生化学血液生化学观察及测定指标观察及测定指标-2-2血液生化学指标血液生化学指标l 天冬氨酸氨基转换酶（天冬氨酸氨基转换酶（ASTAST）l 丙氨酸氨基转换酶（丙氨酸氨基转换酶（ALTALT）l 碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALPALP）l 肌酸磷酸激酶（肌酸磷酸激酶（CPKCPK）l 尿素氮（尿素氮（BUNBUN）l 肌酐（肌酐（CreCre）l 总蛋白总蛋白（TPTP）l 白
36、蛋白（白蛋白（AlbAlb）l 血糖（血糖（GluGlu）l 总胆红素（总胆红素（T-BILT-BIL）l 总胆固醇（总胆固醇（TCTC）l 甘油三酯（甘油三酯（TGTG）l-谷氨酰转移酶（谷氨酰转移酶（GGTGGT）l 钾离子浓度钾离子浓度l 氯离子浓度氯离子浓度l 钠离子浓度钠离子浓度2023-2-745（二（二）测定指标测定指标 1.1.器官重量器官重量2.2.血液学血液学3.3.血液生化学血液生化学4.4.尿液分析指标尿液分析指标观察及测定指标观察及测定指标-2-2尿液分析指标尿液分析指标l 尿液外观尿液外观l 比重比重l pH pH值值l 尿糖尿糖l 尿蛋白尿蛋白l 尿胆红素尿胆红素
37、l 尿胆原尿胆原l 酮体酮体l 潜血潜血l 白细胞白细胞2023-2-746（二（二）测定指标测定指标 1.1.器官重量器官重量2.2.血液学血液学3.3.血液生化学血液生化学4.4.尿液分析指标尿液分析指标5.5.病理学检测指标病理学检测指标观察及测定指标观察及测定指标-2-2长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官l 脑（大脑、小脑、脑干）脑（大脑、小脑、脑干）l 垂体垂体l 甲状腺甲状腺l 食管食管l 胃胃l 肝脏肝脏l 肾脏肾脏l 脾脏脾脏l 气管气管l 主动脉主动脉l 附睾附睾l 卵巢卵巢l 前列腺前列腺l 坐骨神经坐骨神经l 眼（眼科
38、检查发现异常时）眼（眼科检查发现异常时）l 给药局部给药局部l 淋巴结淋巴结l 脊髓脊髓l 胸腺胸腺l 甲状旁腺甲状旁腺l 唾液腺唾液腺l 小肠和大肠小肠和大肠l 胆囊胆囊l 肾上腺肾上腺l 胰腺胰腺l 肺肺l 心脏心脏l 睾丸睾丸l 子宫子宫l 乳腺乳腺l 膀胱膀胱l 视神经视神经l 骨髓骨髓注：注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官2023-2-748（三（三）指标选择中应考虑问题指标选择中应考虑问题 1.1.长期毒性试验中观察、检查指标分类长期毒性试验中观察、检查指标分类n一般性指标一般性指标n不同类型药物各自必须观察的指标不同类
39、型药物各自必须观察的指标n个别药物需要特殊观察研究的个别药物需要特殊观察研究的观察及测定指标观察及测定指标-3-32023-2-749（三（三）指标选择中应考虑问题指标选择中应考虑问题 2.2.长期毒性试验中观察、检查指标选择原则长期毒性试验中观察、检查指标选择原则n指标的广谱性和针对性的结合指标的广谱性和针对性的结合n指标的器官特异性与动物种属差异性的关系指标的器官特异性与动物种属差异性的关系n指标的规范化和个体化的关系指标的规范化和个体化的关系观察及测定指标观察及测定指标-3-32023-2-750八八、恢复期恢复期观察观察 最后一次给药物后最后一次给药物后2424小时，每组活杀部分小时，
40、每组活杀部分动物检测上述各项指标，留下动物检测上述各项指标，留下1/3-1/41/3-1/4动物进行动物进行恢复期观察。观察期一般不超过恢复期观察。观察期一般不超过2828天，而后再天，而后再活杀检查上述所有指标，以了解毒性反应的可活杀检查上述所有指标，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。除不给药物外，其他观察内容与给药期间除不给药物外，其他观察内容与给药期间相同。相同。试验设计原则及方法试验设计原则及方法2023-2-751本章学习要点本章学习要点o长期毒性试验长期毒性试验的概念及意义的概念及意义o长期毒性试验的总原则长期毒性试验的总原则o蓄积作用蓄积作用o我国药政部门对长期毒性试验动物数及给药期限的要求我国药政部门对长期毒性试验动物数及给药期限的要求o长期毒性试验的长期毒性试验的剂量水平的选择基本原则及具体方法剂量水平的选择基本原则及具体方法o限度试验限度试验o长期毒性试验时指标选择时应注意问题长期毒性试验时指标选择时应注意问题o恢复期观察恢复期观察
