1、2023-2-12*1培养基模拟灌装探讨培养基模拟灌装探讨（溶液灌装）（溶液灌装）2023-2-1222引言：引言：-无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行。-无菌生产工艺的验证应当包括培养基模拟灌装试验。-对于非最终末灭菌的无菌生产工艺必须进行培养基灌装来验证，最终灭菌工艺不作强制要求。定义定义：培养基模拟灌装试验-使用培养基作为药品的替代品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。目的目的:证明生产线采用无菌工艺生产无菌产品 的能力;对人员进行资格确认;符合GMP的要求。前言前言2023-2-123分类：分类：前言前言培养基灌装方法培养基灌装方法（按生产工
2、艺特点分类）（按生产工艺特点分类）序号序号类别类别实施要求及特点实施要求及特点1溶液灌装配液操作培养基在灌装前配制完成。采用与实际生产相同的方式将培养基灭菌（除菌过滤、蒸汽灭菌）。所有阶段操作所括取样、过滤器完整性试验等均按实际模拟。采用实际生产的管路和设备输送至灌装区灌装。灌装操作按照标准操作流程将容器/密封件、灌装部件和设备等灭菌。设备运行速度设备挑战最差条件。所有正常操作如称重、检查、取样等都应模拟进行。干扰操作以挑战最差条件。每次培养基灌装应有书面的批生产记录，用于记录生产工艺条件及各种模拟操作的实际完成情况。2悬浮液灌装考虑悬浮液生产工艺特点，培养基配制后在溶液中加放无菌的空白不溶粉
3、末来模拟悬浮液的制备。3冻干产品溶液配制和灌装与溶液灌装相同。溶液无菌灌装后在冻干机内模拟冻干程序，需考虑冻干工艺对微生物生长的影响。4无菌粉末产品粉末混合、搅拌、分配和分装工艺采用空白粉末进行模拟。因培养基干粉流动性差，通常和空白粉末分两次灌装。考虑两次分装对试验结果成功产生影响，可采用离线模拟方式进行。无菌霜剂、乳膏剂、乳剂、凝胶、无菌滴眼剂与溶液及悬浮液要求相似。2023-2-124前言前言 培养基模拟灌装：培养基模拟灌装：溶液灌装溶液灌装2023-2-125提纲提纲第一部分第一部分 培养基灌装相关法规要求培养基灌装相关法规要求1 12 23 34 4第二部分第二部分 培养基灌装验证方案
4、设计培养基灌装验证方案设计第三部分第三部分 培养基灌装结果分析调查培养基灌装结果分析调查第四部分第四部分 常见问题及常见问题及FDA483FDA483缺陷缺陷2023-2-1266第一部份第一部份 培养基灌装相关法规要求培养基灌装相关法规要求12023-2-127 FDA CGMP 无菌工艺药品指南无菌工艺药品指南An aseptic processing operatio on should be validated using amicrobiological growth mediu um in place of theproduct.This process simulati ion,
5、also known as a mediafill.EU GMP Annex1 无菌药品的生产无菌药品的生产Validation of aseptic processin should include a processsimulation test using a nutrient t medium(media fill).法规要求法规要求2023-2-128 2010版版GMP附录一：无菌制剂附录一：无菌制剂 第四十七条第四十七条 无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌装试验。装试验。应根据产品的剂型以及培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性应根据产品
6、的剂型以及培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。应尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对产品的无菌特性有选择培养基。应尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对产品的无菌特性有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应连续进行培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应连续进行3 3次合格的试验。空次合格的试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应重复进行培养基模拟灌装试气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常应按
7、生产工艺每班次半年进行验。培养基模拟灌装试验通常应按生产工艺每班次半年进行1 1次，每次至少一批次，每次至少一批。法规要求法规要求2023-2-129 法规要求法规要求2010版版GMP附录一：无菌制剂附录一：无菌制剂 第四十七条第四十七条 培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应遵养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应遵循以下要求：循以下要求：（1 1）灌装数量少于）灌装数量少于50005000支时，不得
8、检出污染品；支时，不得检出污染品；（2 2）灌装数量在）灌装数量在50005000至至1000010000支时：支时：有有1 1支污染，需调查，可考虑重复试验；支污染，需调查，可考虑重复试验；有有2 2支污染，需调查后，进行再验证。支污染，需调查后，进行再验证。（3)3)灌装数量超过灌装数量超过1000010000支时：支时：|有有1 1支污染，需调查；支污染，需调查；有有2 2支污染，需调查后，进行再验证。支污染，需调查后，进行再验证。（4 4）发生任何微生物污染时，均应进行调查。）发生任何微生物污染时，均应进行调查。2023-2-1210第二部份第二部份 培养基灌装方案的设计培养基灌装方案
9、的设计22023-2-1211验证先决条件验证先决条件方案方案 设计设计说明设计说验证实施基础条件具备与确认。验证实施基础条件具备与确认。明涉及培养基灌装试验使用的关键设涉及培养基灌装试验使用的关键设备设施、公用系统等确认合格。备设施、公用系统等确认合格。与产品直接接触设备器具清洁验证与产品直接接触设备器具清洁验证合格。合格。验证涉及检验方法验证合格，取样验证涉及检验方法验证合格，取样方法验证合格。方法验证合格。试验使用培养基及相关物料检验合试验使用培养基及相关物料检验合格。格。参与培养基灌装的人员经过培训，参与培养基灌装的人员经过培训，包括更衣确认、无菌灌装操作技能及包括更衣确认、无菌灌装操
10、作技能及本方案培训。本方案培训。（一）验证先决条件（一）验证先决条件2023-2-1212（二）风险评估（二）风险评估方案方案 设计设计设计设计说明风险点识别与评估根据风险评估结果，确认可能导致培养基灌装失败的因素，并将其列为验证实施时的重点考察项目。常用工具及方法常用工具及方法风险识别：鱼刺图、流程图等。风险识别：鱼刺图、流程图等。风险评估：矩阵图、失效模式与影响分析法（风险评估：矩阵图、失效模式与影响分析法（FMEA)FMEA)等。等。风险分析示例风险分析示例风险评估示例风险评估示例.docx2023-2-1213（三）方案设计（三）方案设计试验涵盖范围试验涵盖范围 方案方案 设计设计设计
11、说明设计设计说明说明试验涵盖范围采用文字描述或工试验涵盖范围采用文字描述或工艺流程图说明；艺流程图说明；试验范围模拟整个工艺过程，包试验范围模拟整个工艺过程，包括混合（配制）、工器具灭菌及组括混合（配制）、工器具灭菌及组装、包装材料灭菌、灌装操作；装、包装材料灭菌、灌装操作；配制、除菌过滤使用实际生产的配制、除菌过滤使用实际生产的管路和设备输送培养基至灌装区灌管路和设备输送培养基至灌装区灌装装 。虽然除菌过滤前段不会导致无菌工艺失败，但仍需考虑物料、系统及配制工艺引入微生物负荷情况对除菌过滤效果的影响，故需包含培养基混合（配制）工艺过程。2023-2-1214（三）方案设计（三）方案设计培养基
12、选择培养基选择 方案方案 设计设计设计说明设计设计说明说明常用培养基：常用培养基：3 3胰蛋白胰蛋白胨胨大豆肉汤（大豆肉汤（TSBTSB）促生长试验（试验前和培养后）：促生长试验（试验前和培养后）：选用药典规定菌种；选用药典规定菌种；增加环境监控及无菌检查中发现的菌种。增加环境监控及无菌检查中发现的菌种。适应微生物生长的菌谱范围宽，能促进革兰氏阳性、革兰氏阴性、酵母菌和霉菌的生长；较好的澄明度，便于观察由于污染导致的混浊和沉淀现象。液体粘度小，易于除菌过滤；如环境监控及无菌检查中发现的菌鉴定为普通菌时选 用药典规定菌种即可；促生长试验接种菌不超过100CFU/ml;生长良好 判断试验合格；厌氧
13、培养基仅在特殊情况下使用（FTM）。2023-2-1215（三）方案设计（三）方案设计运行试验次数及频率运行试验次数及频率 方案方案 设计设计设计说明设计说明生产线初始验证时进行至生产线初始验证时进行至少连续成功少连续成功3 3批次；批次；初次验证后，每半年一次；初次验证后，每半年一次；变更后评估进行验证；变更后评估进行验证；异常情况时再验证（环境异常情况时再验证（环境监控结果或趋势异常或最终监控结果或趋势异常或最终产品产品 无菌检查无菌检查 出现污染结出现污染结果）。果）。重复多次为确保结果的一致性和有效性；生产线投入使用后的周期确认为评估无菌工艺的受控情况；可能影响产品无菌性的变更需重新进
14、行验证，如设施或设备 的改进、生产线配置的变更、人员的重要变动、容器胶塞系统的变更、停车时间的延长等；异常情况时的再验证可证明工艺是否仍受控，如失控应进行调查分析，采取措施后再验证，需进行连续成功3批次试验以确认工艺已返回受控状态。试验次数及频率试验次数及频率设计说明2023-2-1216（三）方案设计（三）方案设计 灌装规格选择灌装规格选择 方案方案 设计设计设计说明设计设计说明说明生产线多个产品规格时，初始验证可进行生产线多个产品规格时，初始验证可进行2 2次最大规格容器和次最大规格容器和1 1次最小规格容器进行灌次最小规格容器进行灌装挑战；装挑战；周期性半年度灌装轮换，每次挑战一种规周期
15、性半年度灌装轮换，每次挑战一种规格。格。生产线切换不同规格产品的操作会增加污染的风险，因此在验证时也需要挑战切换操作。2023-2-1217（三）方案设计（三）方案设计 运行持续时间运行持续时间 方案方案 设计设计设计说明设计设计说明说明模拟全批量操作时间；模拟全批量操作时间；也可采用其它合理并适当的模式；也可采用其它合理并适当的模式；无菌工艺采用人工灌装（或密封）或人无菌工艺采用人工灌装（或密封）或人工操作的工作量很大时，模拟时间不应少工操作的工作量很大时，模拟时间不应少于实际生产操作时间。于实际生产操作时间。应综合考虑生产操作、各种干扰、实际无菌操作的周期后，决定培养基灌装操作的持续时间；
16、通常持续时间为工艺规定最长生产时限。2023-2-1218（三）方案设计（三）方案设计 批次量批次量 方案方案 设计设计设计说明设计设计说明一般可接受灌装量为一般可接受灌装量为5000-100005000-10000瓶；瓶；正常生产批次量低于正常生产批次量低于50005000瓶时，瓶时，灌装量至少为实际生产线最大的批灌装量至少为实际生产线最大的批次量；次量；人工手动灌装时一般为全批次数人工手动灌装时一般为全批次数量或接近全批次量。量或接近全批次量。产品批次超过一个班次的，需综产品批次超过一个班次的，需综合考虑批量。合考虑批量。灌装工艺使用隔离器操作人为干扰风险较低，故可进行最低数量单位的灌装；
17、手动灌装操作有很高风险故需时行最大数量的灌装（接近或达到最大批量）；产品批次量较大，生产班次超过一班次，灌装量可加大（超出10000瓶）。如未进行全批量灌装，而模拟持续时间为工艺最长时间的，去除干扰动作设计时间，根据生产速度及所需灌装时间计算确定培养基灌装数量。2023-2-1219（三）方案设计（三）方案设计 运行速度和装量控制运行速度和装量控制 方案方案 设计设计设计说明设计设计说明运行速度：运行速度：应阐明生产线运行速度范围；应阐明生产线运行速度范围；每次运行试验时，应对单一生产线的速度做出评估并说明所定速每次运行试验时，应对单一生产线的速度做出评估并说明所定速度的理由度的理由 ；装量控
18、制：装量控制：每只容器的灌装体积不少于总容积的每只容器的灌装体积不少于总容积的1/31/3，灌装体积也不宜过大，灌装体积也不宜过大，一般不超过产品装量高限（通常应该保留一般不超过产品装量高限（通常应该保留25%25%的空间）。的空间）。大敞口容器-低速运行；手工操作-高速运行；装量控制既要考虑到瓶倒转或旋转时，培养基能充分接触到容器和密封件的内表面，又要保证容器内有足够的氧气支持微生物生长。2023-2-12最差条件干预条件干预时间20（三）方案设计（三）方案设计 最差最差/干扰条件设计干扰条件设计方案方案 设计设计设计说明设计设计说明培养基灌装除模拟所有正常生产活动外，还需模拟干扰事件，干培
19、养基灌装除模拟所有正常生产活动外，还需模拟干扰事件，干扰次数设计需体现最差原则；扰次数设计需体现最差原则；对为何进行各种操作或干扰，方案设计时考虑的各种因素加以必对为何进行各种操作或干扰，方案设计时考虑的各种因素加以必要的解释。要的解释。设计示例设计示例干扰、最差条件设计干扰、最差条件设计.docx.docx最差条件说明：是指在工艺允许范围内正常生产时可能遇到的最差情况，并不包括由于偏差引起的超出工艺要求的特殊情况；如遇设备突发故障或其它偏差导致干扰不在设计范围内的应如实记录偏差处理情况。2023-2-1221（三）方案设计（三）方案设计抑菌因素的影响抑菌因素的影响方案方案 设计设计设计说明设
20、计通常情况下用压通常情况下用压缩空气或空气来缩空气或空气来代替惰性气体灌装代替惰性气体灌装培养基低温配培养基低温配制及常温储存制及常温储存（配制后需除菌（配制后需除菌过滤的不予以考过滤的不予以考虑）；虑）；消毒剂不能超出消毒剂不能超出正常生产时的使用正常生产时的使用频率（人员、环境、频率（人员、环境、设备）设备）抑菌因素抑菌因素 影响影响单击添加段落文字说明设计说明抑菌因素应予以考虑，避免污染微生物在模拟过程中被杀死造成假阴性结果。产品无菌检查分产品无菌检查分离出厌氧菌时采离出厌氧菌时采用惰性气体灌装。用惰性气体灌装。设定合理灌装量保证培设定合理灌装量保证培养基和容器内表面充分接养基和容器内表
21、面充分接触触2023-2-1222（三）方案设计（三）方案设计 环境条件及监测环境条件及监测方案方案 设计设计设计说明设计设计说明培养基灌装试验的环境条件应充分体培养基灌装试验的环境条件应充分体现生产操作的实际情况，对于环境最差现生产操作的实际情况，对于环境最差条件的挑战需在工艺允许的苛刻条件范条件的挑战需在工艺允许的苛刻条件范围内对环境受干扰程度，如生产现场人围内对环境受干扰程度，如生产现场人员最多、生产活动频率（人员走动）最员最多、生产活动频率（人员走动）最高的挑战。高的挑战。在培养基灌装过程中进行环境监测，灌封A级区、B级区监测项目为：尘埃粒子、沉降菌、浮游菌、表面微生物（在进行干预时监
22、测结果应做明确说明，以区别于正常生产情况。），同时对人员卫生进行监测，包括手指、袖口微生物监测（采用接触碟取样）；不得制造特别良好的工艺环境，不得人工创造极端的环境条件。表面微生物表面微生物浮游菌浮游菌沉降菌沉降菌人员人员2023-2-1223（三）方案设计（三）方案设计 参与人员及培训参与人员及培训方案方案 设计设计设计说明设计设计说明所有被授权在生产时进入无所有被授权在生产时进入无菌灌装间的人员，包括观察菌灌装间的人员，包括观察人员和维修人员，每年至少人员和维修人员，每年至少应参加一次培养基灌装试验；应参加一次培养基灌装试验；所有实际生产中将在关键区所有实际生产中将在关键区域进行操作的人员
23、都应参加域进行操作的人员都应参加每次的培养基灌装；每次的培养基灌装；参与人员应按常规生产的职参与人员应按常规生产的职责模拟与其相关的活动；责模拟与其相关的活动；所有参与培养基灌装的人员所有参与培养基灌装的人员应当经过适当培训以保证对应当经过适当培训以保证对方案和实际实施有足够的了方案和实际实施有足够的了解。解。关键区域：A级区；每次均需参加人员：在A级区有操作的所有人员；培养基灌装更衣确认通过。2023-2-1224（三）方案设计（三）方案设计 容器容器/密封件系统完整性测试密封件系统完整性测试方案方案 设计设计设计说明设计设计说明容器容器/密封件系统的完整性测试可以密封件系统的完整性测试可以
24、在培养基灌装时进行；在培养基灌装时进行；测试方法采用微生物侵入试验（将容测试方法采用微生物侵入试验（将容器置于浓度不低于每毫升器置于浓度不低于每毫升106 CFUCFU菌悬菌悬液后进行培养检查）。液后进行培养检查）。微生物侵入法示例微生物侵入法示例容器、密封件完整性测试容器、密封件完整性测试.docx.docx容器/密封件系统完整性测试建议采用前验证方式，验证合格后投入使用；已使用中的容器/密封件系统完整性根据设备运行情况、容器/密封件系统变更情况评估后试验确认。2023-2-1225（三）方案设计（三）方案设计培养基灌装后清洁确认培养基灌装后清洁确认方案方案 设计设计设计说明设计设计说明模拟
25、灌装后与培养基接触过的所有设备、系统、器具均应采用适模拟灌装后与培养基接触过的所有设备、系统、器具均应采用适宜方法清洁，并确认清洁合格（采用电导、宜方法清洁，并确认清洁合格（采用电导、TOCTOC等理化指标判等理化指标判断）。断）。降低培养基对生产系统污染风险，避免对后续生产产品造成污染。理化检测指标要求同注射用水质量标准。2023-2-1226（三）方案设计（三）方案设计培养基培养培养基培养方案方案 设计设计设计说明设计设计说明培养基灌装过程中严格控制丢培养基灌装过程中严格控制丢弃任何已经灌装培养基，避免将弃任何已经灌装培养基，避免将一些潜在污染的可能性也同时丢一些潜在污染的可能性也同时丢弃
26、了。因操作及储存不当造成的弃了。因操作及储存不当造成的密封性缺陷样品按书面规程记录密封性缺陷样品按书面规程记录剔除；剔除；灌装后培养基先在灌装后培养基先在20252025 最最少培养少培养7 7天，然后在天，然后在30353035 范范围继续培养围继续培养7 7天（天（PIC/SPIC/S推荐）；推荐）；干扰条件后灌装样品需单独标识培养；培养基间宜再次翻动培养基以使与内表面 充分接触。2023-2-1227（三）方案设计（三）方案设计培养基培养检查培养基培养检查方案方案 设计设计设计说明设计设计说明检查人员应经过培训，所有被检查人员应经过培训，所有被怀疑受到污染样品，应立即交给怀疑受到污染样品
27、，应立即交给微生物专业人员进行签定处理。微生物专业人员进行签定处理。干扰条件后灌装样品需单独标干扰条件后灌装样品需单独标识培养、检查；识培养、检查；在两个温度下培养时，必须在在两个温度下培养时，必须在温度切换时进行中间判读温度切换时进行中间判读。无菌培养检查全格样品进行促无菌培养检查全格样品进行促生长试验。生长试验。检查可由非质量控制人员完成；培养过程中任何发现损坏的样品也应列入批记录数据，如要将些结果剔除必需充分说明理由；对难以判断微生物污染还是损坏引起或本身就存在的，则应进行调查以确定原因。2023-2-1228（三）方案设计（三）方案设计验证记录要求验证记录要求方案方案 设计设计设计说明
28、设计设计说明应有书面批生产记录，记录生产工艺条件应有书面批生产记录，记录生产工艺条件及各种模拟操作实际完成情况；及各种模拟操作实际完成情况；模拟灌装全过程建议应进行录像，便于事模拟灌装全过程建议应进行录像，便于事后调查分析和原因查找，也有利于员工培训。后调查分析和原因查找，也有利于员工培训。录像可不提交用于GMP认证检查。2023-2-1229（三）方案设计（三）方案设计培养基验证结束样品处理培养基验证结束样品处理方案方案 设计设计设计说明设计设计说明按相关规定监督销毁。按相关规定监督销毁。避免对生产生活环境污染。防止混淆差错。2023-2-1230第三部份第三部份 培养基灌装结果分析与调查培
29、养基灌装结果分析与调查32023-2-1231 结果分析与调查结果分析与调查2010版版GMP附录一：无菌制剂附录一：无菌制剂 第四十七条第四十七条 培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应遵养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应遵循以下要求：循以下要求：（1 1）灌装数量少于）灌装数量少于50005000支时，不得检出污染品；支时，不得检出污染品；（2 2）灌装数量在）灌装数量在50005000至至100
30、0010000支时：支时：有有1 1支污染，需调查，可考虑重复试验；支污染，需调查，可考虑重复试验；有有2 2支污染，需调查后，进行再验证。支污染，需调查后，进行再验证。（3)3)灌装数量超过灌装数量超过1000010000支时：支时：|有有1 1支污染，需调查；支污染，需调查；有有2 2支污染，需调查后，进行再验证。支污染，需调查后，进行再验证。（4 4）发生任何微生物污染时，均应进行调查。）发生任何微生物污染时，均应进行调查。（一）结果解读（一）结果解读2023-2-1232结果分析与调查结果分析与调查（二）调查（二）调查-流程流程2023-2-1233 结果分析与调查结果分析与调查（二）
31、调查（二）调查-污染曲线分析污染曲线分析污染污染 率率灌装过程灌装过程(时间或灌装量时间或灌装量)这表明污染可能来源于液体培养基(如与培养基贮罐非无菌连接，在循环管路中受到污染)。很重要的是，在灌装结束后，保持培养基贮罐处于无菌状态，当等到培养基灌装结束时，可以核实这样的假设。l在灌装过程中污染率上升 2023-2-1234结果分析与调查结果分析与调查（二）调查（二）调查-污染曲线分析污染曲线分析l在灌装过程中污染率下降 污染率污染率灌装过程灌装过程(时间或灌装量时间或灌装量)这表明污染发生于生产设备中（胶塞容器/轨道,计量泵/针头)，在灌装过程中污染被部分或全部“清洗掉”。2023-2-12
32、35结果分析与调查结果分析与调查（二）调查（二）调查-污染曲线分析污染曲线分析l在灌装过程中污染率出现尖峰污染率污染率灌装过程灌装过程(时间或灌装量时间或灌装量)一个尖峰（在短时段的一些产品被污染）可能与在灌装过程中不正确操作导致的关键失误有关。对于这个原因，很关键的是必须知道被污染产品灌装的准确时间，以及当时实施的干预措施（灌装操作过程的录像是非常有用的）2023-2-1236结果分析与调查结果分析与调查（二）调查（二）调查-污染曲线分析污染曲线分析l污染率出现尖峰后，呈上升趋势 污染率污染率灌装过程灌装过程(时间或灌装量时间或灌装量)与前面的例子相同，但如果错误的干预措施能够影响到液体的管
33、路/回路时（如培养基贮罐的变化，泵或针的替换）2023-2-1237结果分析与调查结果分析与调查（二）调查（二）调查-污染曲线分析污染曲线分析l孤立事件(试验中少数污染)污染率污染率灌装过程灌装过程(时间或灌装量时间或灌装量)不幸的是，这些现象是最普通的，也是最难调查的。如果这种现象在多次试验中反复出现，可能说明这个工艺存在“环境噪声”，所以需要根本的措施（如 更衣/着装、消毒剂和气流模式的改变)2023-2-1238结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析2023-2-1239结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析1.生产
34、环境的监控数据评估 人员样 表面样 环境空气样2.对培养基污染的评估 培养条件 对污染培养基的菌种必须进行鉴定 确定培养基污|染可能发生的时间3.对气体取样结果的评估 压缩空气 氮气等2023-2-1240结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析4.对水的微生物的评估 纯水 WFI5.对培养基评估 培养基的配制和消毒记录 培养基预培养的条件 培养基预培养的结果6.粒子监控评估粒子测试监控情况 层流风速报警记录烟雾测试 历史的监控情况和趋势2023-2-1241结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析7.清洁和消毒评估 消毒剂配
35、制来源或配制比例记录 效期及效力 设备的清洁|消毒8.人员的评估调查 灌装间最多的人数 操作人员连续工作时间 其它人员 更衣情况 手消毒及污染可能2023-2-1242结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析9.干预操作的评估 频次，是否有非预期干预 危险的程度 污染的样品与干预的关联 清洁和消毒评估 消毒剂配制来源或配制比例记录 效期及效力 设备的清洁|消毒2023-2-1243结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析10.设备的评估 灭菌设备（灭菌柜、胶塞清洗机）灭菌装载情况，灭菌程序和记录等 最近的穿透试验，泄漏试验和干
36、燥试验的结果 隧道烘箱，洗瓶机等 运行状态，参数是否正确 隧道烘箱各段层流压差是否正确 灌装设备的|状态 设备是否存在偏差和非计划干预 过滤器完整性测试评估 产品和空气过滤器完整性测试的结果2023-2-1244结果分析与调查结果分析与调查（三）调查（三）调查-影响因素分析影响因素分析11.调查的范围还应包括以下 以往产品无菌检查实验结果 该区域近期是否有过维修活动，生产线的改造情况 该生产线培养基灌封实验历史数据 已灭菌物品的储存条件 培养基灌封过程中的异常事件 阳性污染菌与环境监测污染菌的鉴别，如有能力鉴别到种到种。2023-2-1245结果分析与调查结果分析与调查（四）结论与处理措施（四
37、）结论与处理措施一、培养基灌封实验结果有效一、培养基灌封实验结果有效暂停生产，直至确定污染来源并采取有效的纠偏措施。再验证合格后，产品方可放行。对培养基灌封试验后和此前所生产的产品，进行风险评估，包括对已经放行批次的影响 二、培养基灌封实验结果无效 实施适当的纠偏措施和预防措施后重新进行培养基灌封实验条件1无菌灌装区的物理条件不满足要求条件2人员未按照正常生产程序操作2023-2-1246第四部份第四部份 常见问题及缺陷常见问题及缺陷42023-2-1247常见问题及缺陷常见问题及缺陷问题（一）问题（一）如何判断哪些灌装样品不需要进行培养？如何判断哪些灌装样品不需要进行培养？破损，影响到密封性
38、的样品破损，影响到密封性的样品完整性测试（泄漏测试）失败的样品完整性测试（泄漏测试）失败的样品文件中明确规定予以丢弃的中控测试样品文件中明确规定予以丢弃的中控测试样品设备自动剔除的样品设备自动剔除的样品文件中明确规定，每次干扰后应予手工剔除的样品文件中明确规定，每次干扰后应予手工剔除的样品（规定应详细、明确，并需证明其可操作性和稳定可（规定应详细、明确，并需证明其可操作性和稳定可信性）。剔除的样品应进行记录注明丢弃原因信性）。剔除的样品应进行记录注明丢弃原因2023-2-1248常见问题及缺陷常见问题及缺陷问题（二）问题（二）是否需要厌氧工艺的模拟灌装实验？是否需要厌氧工艺的模拟灌装实验？如果
39、工艺中存在冲氮气等惰性气体操作时如果在环境监测样品或无菌试验中检出厌氧菌 有公司认为，即使常规无菌工艺，也应定期使用硫乙醇酸盐培养基进行厌氧工艺模拟实验，或在模拟过程中进行培养基的切换。2023-2-1249常见问题及缺陷常见问题及缺陷问题（三）问题（三）什么情况下，可以认为培养基灌装试验无效？什么情况下，可以认为培养基灌装试验无效？不是必需的，录像仅是一种可选的辅助调查和培训手段。如果采用了录像措施，也仅作为公司内部的资料（如同内部审计报告），不必向检查员出示。公司应有文件规定，什么情况下要进行录像，录像的储存时间等问题（四）问题（四）在培养基灌装试验中，是否必须进行录像？录像的保存期需要多
40、长？在培养基灌装试验中，是否必须进行录像？录像的保存期需要多长？阳性对照失败 工艺过程中在无菌操作区发生重大偏差，如停电，高效过滤器损坏等2023-2-1250常见问题及缺陷常见问题及缺陷 Warning Letter Your firm failed to design and perform an adequateaseptic process simulation(i.e.,media fill)basedupon the same controls used for routineproduction.We note that t the(b)(4)wasobserved(b)(4)d
41、uring ac ctual production.However,this intervention was per rformed only once duringthe media fill in 2009.公司的培养|基灌装验证未根据日常生产的控制进行设计和完成，如在实际生产中观察到的一些干预操作2023-2-1251常见问题及缺陷常见问题及缺陷Warning LetterThe written procedur res related to theproduction simulations “media fills”-conducted to validate e your cap
42、ability toaseptically produce s small volume parenteral(SVP)were found to be inadequate.The mediafills for this line did not represent actualoperations used in he aseptic production ofampoules and vials.培养基灌|装没有模拟实际的生产过程。2023-2-1252常见问题及缺陷常见问题及缺陷Warning Letter-A routine production of a(b)(4)Injectio
43、n vialslot would take approximately(b)(4)hours to befilled.Your written pro ocedures for routineproduction require tha at an intervention takeplace every(b)(4)minu utes for fill-weightverification measurements.SOPSOP规定每几分钟就要对装量进行测试，但是模拟未进行。|2023-2-1253常见问题及缺陷常见问题及缺陷Warning LetterPlacebo mediums shou
44、ld be evaluated for theirability to support growth.Their placebo used in theprocess simulation is sod dium phosphate in differentforms(solution and anhy ydrous)and sodium chloridesolution.培养基灌装所用的介质，没有评估其对微生物的抑菌影响。2023-2-1254常见问题及缺陷常见问题及缺陷Warning Letter Gases used during proc cess simulation should
45、beevaluated for their inhib bitory effect onmicroorganisms.Your response states that thenitrogen used in the pro ocess simulation is removedby the test membrane d during filtration.没有评估模拟过程中使用的气体（氮气）对微生物影响。2023-2-1255参考资料参考资料FDA CGMP 无菌工艺药品指南（2004年版）EU GMP 附件1 无菌药品的生产（2008年2月新版）2010版GMP规范 附录1无菌药品GMP指南（无菌药品）药品生产 验证指南（2003版）PIC/S(国际药品认证合作组织）Recommendations PI 007-52023-2-1256谢谢大家！谢谢大家！
