1、什么是流式细胞仪流式细胞仪实物BD FACSVantageBD-Calibur 凡是能被荧光素标记的细胞或颗粒都可用流式细凡是能被荧光素标记的细胞或颗粒都可用流式细胞仪检测。胞仪检测。前提这种荧光素能被流式细胞仪所配置的激光光前提这种荧光素能被流式细胞仪所配置的激光光源激发源激发在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机一机多用多用的仪器。的仪器。4.应用范围应用范围二、流式细胞仪的工作原理和基本结构二、流式细胞仪的工作原理和基本结构待测细胞以待测细胞以单个细胞的悬液单个细胞的悬液，经特，经特异性荧光染料染色，放入样品管，异性荧光染料染色，放入样品管，吸入
2、流动室。吸入流动室。流动室充满流动室充满鞘液鞘液，作用：约束样品，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱。嘴中心喷出，形成细胞液柱。液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。基本结构基本结构流式细胞术检测细胞表型DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。细胞坏死时，细胞肿胀，FSC？，SSC？二）
3、肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜1973 Steinkamp对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机多用的仪器。FCM分析白血病免疫表型,快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。图中100101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞Dip S:17.荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。外周全血细胞散射光双参数点图细胞的增殖能力的大小也可反映肿瘤的生物学特征图 Annexi
4、n V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死用于分选的效率较高的仪器国内较少，台式机一般分选速度为每秒钟300个细胞，端粒（荧光蛋白）荧光信号大小凋亡细胞的FSC？SSC？三、流式细胞仪可检测到的细胞参数颗粒度颗粒度细胞大小细胞大小=前向角散射光（前向角散射光（FSCFSC）细胞相对大小及其表面积细胞相对大小及其表面积 =侧向角散射光（侧向角散射光（SSCSSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性相对复杂性血液涂片血液涂片外周全血细胞散射光双参数点图外周全血细胞散射光双参数点图蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。根据凋亡细胞的特点来检测肿瘤组织中的
5、各种DNA倍体在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧光标记的细胞、粒子进行分析和分选的技术.流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。各探测通道接收并转化为电信号。图 报告中常见的几种流式细胞图5ml同样的溶液，上流式细胞仪检测。用荧光探针标记的细胞，可被有效地分离出来，细胞固定后用PI（Propidium iodide碘化丙啶），染色，因为PI特异性结合于细胞DNA，荧光强度与P
6、I的结合量呈良好的线性关系，根据这个原理，可测出细胞的DNA含量。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；图 FCM测试细胞周Mean：平均荧光强度，与被检测物质的表达量有关，在正态分布时一般用该值。侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性激素结合位点、细胞受体四）白血病的免疫分型图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死 荧光染料被激发而发射的光信号。荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色定量染色 荧光信号
7、大小荧光信号大小 被标记组分含量的定量被标记组分含量的定量 多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光光信号分离，导向光信号分离，导向各探测通道接收并转化为电信号。各探测通道接收并转化为电信号。光信号收集光信号收集三三 数据处理及数据处理及流式报告FSC SSC FL1 FL2 FL3对数对数 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）n流式报告的图一般分为四种，即散点图、直方流式报告的图一般分为四种，即散点图、直方
8、图、密度图和二维等高图等。最常用的为散点图、密度图和二维等高图等。最常用的为散点图和直方图。图和直方图。n几个概念：几个概念：n%Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中阳性细胞百分比。反映细胞群体中阳性细胞的数量。阳性细胞的数量。nMean：平均荧光强度，与被检测物质的表达平均荧光强度，与被检测物质的表达量有关，在正态分布时一般用该值。量有关，在正态分布时一般用该值。nGeo Mean：几何平均荧光强度，在阳性细胞几何平均荧光强度，在阳性细胞为偏态分布时一般用该值。为偏态分布时一般用该值。散点图 密度图二维等高图直方图图 报告中常见的几种流式细胞图R1File:4Acquisition D
9、ate:06-Mar-03QuadEvents%Gated X MeanY MeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析=点图分析点图分析流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析=直方图分析直方图分析图中100101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞 五、流式细胞术的应用五）细胞内蛋白的分析：图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死FALS Sensor
10、利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA倍性分析，辅助肿瘤诊断，包括监测癌前病变、肿瘤的早期诊断和肿瘤细胞学诊断。三、流式细胞仪可检测到的细胞参数FCM分析白血病免疫表型,快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜凋亡细胞的FSC？SSC？侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性肿瘤组织中的各种DNA倍体细胞坏死时，细胞肿胀，FSC？，SSC？一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、FL2、FL3，大型的流式细胞仪
11、装有两个或三个激光光源（488nm、633nm和325nm），可测出6个FL。对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；三 数据处理及流式报告蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量细胞膜电位、线粒体膜电位1934 Moldavan如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。（Propidium
12、 iodide碘化丙啶），碘化丙啶），单参数直方图图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图 DNA细胞周期分析细胞周期分析细胞周期细胞周期 200 400 600 8001000DNA含量含量细细胞胞数数量量2倍体倍体异倍体异倍体4倍体倍体肿瘤组织中的各种肿瘤组织中的各种DNA倍体倍体含量与凋亡关系含量与凋亡关系nDNA亚亚G1峰的检测：利用峰的检测：利用PI染色，检测具有染色，检测具有亚亚G1期期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。n凋亡过程中，细胞内核酸酶的释放，将凋亡过程中，细
13、胞内核酸酶的释放，将DNA降降解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解的的DNA片段从细胞内流出，造成总体片段从细胞内流出，造成总体DNA含含量减少，成为亚量减少，成为亚2倍体。倍体。二）肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究二）肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究 1.肿瘤诊断肿瘤诊断2倍体倍体异倍体异倍体4倍体倍体肿瘤组织中的各种肿瘤组织中的各种DNA倍体倍体into test tubes蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。into test tubes三、流式细胞仪可检
14、测到的细胞参数图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。五、流式细胞术的应用Dip G2-M:9.在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。59%at 96.侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性五）细胞内蛋白的分析：三、流式细胞仪可检测到的细胞参数对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜1934 MoldavanDNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙离子的浓度。1 2 3FCM检测胞内钙离子、对
15、数 线性 线性 线性 对数Cell Sorting流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体作分子探针，多参数分析白血病细胞的免疫表型，了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。2.凋亡研究凋亡研究Annexin V AssayR1File:4Acquisition Date:06-Mar-03QuadEvents%Gated X MeanY MeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死Date ac
16、quired:14-Jan-03File:7Gy 4hr.001Source:dongboDIPLOID:100.00%Dip G0-G1:73.12%at 48.16 Dip G2-M:9.59%at 96.33 Dip S:17.29%G2/G1:2.00 Dip%CV:6.04Apoptosis:13.66%Mean:27.48 R1图图 FCM测试细胞周测试细胞周 期分布和凋亡期分布和凋亡根据凋亡细胞的特点来检测根据凋亡细胞的特点来检测n在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；细胞浆和细胞器膜内侧显新月体形、核碎裂；细胞
17、浆和细胞器密度增高、细胞体积变小；细胞膜皱折卷曲，密度增高、细胞体积变小；细胞膜皱折卷曲，但早期细胞膜的完整性未受到破坏但早期细胞膜的完整性未受到破坏n凋亡细胞的凋亡细胞的FSC？SSC？n细胞坏死时，细胞肿胀，细胞坏死时，细胞肿胀，FSC？，？，SSC？二）肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究59%at 96.流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜Annexin V AssayDate acquired:14-Jan-03Charged Plates检测调亡，可进行抗肿瘤药物研究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。细胞排成单列由喷嘴中心喷出
18、，形成细胞液柱。图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜Apoptosis:13.对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜5ml同样的溶液，上流式细胞仪检测。定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧光标记的细胞、粒子进行分析和分选的技术.Charged Plates荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性根据报告中给出的
19、样品荧光强度计算细胞内钙离子的浓度。三）三）R1M1M1流式细胞术检测细胞表型 流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体作分子探针，多参数标记的单克隆抗体作分子探针，多参数分析白血病细胞的免疫表型，了解被测分析白血病细胞的免疫表型，了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型分析白血病免疫表型,快速、特异、快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发与
20、分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。病机理研究等有重要价值。四）四）白血病的免疫分型白血病的免疫分型 五）五）细胞内蛋白的分析：细胞内蛋白的分析：荧光信号荧光信号荧光样本制备荧光样本制备双色直接染色双色直接染色 端粒（荧光蛋白）端粒（荧光蛋白）六）细胞内钙离子测定六）细胞内钙离子测定1 110106 6/ml/ml的细胞悬液，的细胞悬液，加入终浓度为加入终浓度为1-5mol/ml Fluo-3/AM1-5mol/ml Fluo-3/AM，充分混匀，充分混匀，室温避光作用室温避光作用6060分钟。分钟。以以HEPESHEPES缓冲的缓冲的HanksHanks平衡盐溶液洗三次，
21、重悬于平衡盐溶液洗三次，重悬于0.5ml0.5ml同样的溶液，上流式细胞仪检测。同样的溶液，上流式细胞仪检测。根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙离子根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙离子的浓度。的浓度。FCM检测胞内钙离子、膜电位和线粒体功能M1阴性界限划分完全是根据阴性对照！如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。12%at 48.Apoptosis:13.检测调亡，可进行抗肿瘤药物研究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。荧光强度（FL）：
22、细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积荧光探针多为FITC。如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。1 2 3一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、FL2、FL3，大型的流式细胞仪装有两个或三个激光光源（488nm、633nm和325nm），可测出6个FL。对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜期分布和凋亡Fluo
23、rescence detector图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死用于分选的效率较高的仪器国内较少，台式机一般分选速度为每秒钟300个细胞，into test tubes流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体作分子探针，多参数分析白血病细胞的免疫表型，了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。三 数据处理及流式报告如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。5ml同样的溶液，上流式细胞仪检测。检测调亡，可进行抗肿瘤药物研
24、究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。六六.分选：分选：488 nm laser+-Fluorescence Activated Cell SortingCharged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector流式细胞仪是一种特殊的显微镜流式细胞仪是一种特殊的显微镜流式细胞仪流式细胞仪显微镜显微镜流动的细胞流动的细胞静止的细胞样本静止的细胞样本数量大数量大数量少数量少高速分选高速分选样本难以再利用样本难以再利用细胞群体特征量分布细胞群体特征量分布揭示细胞内部结构信息揭示细胞内部结构信息流式细胞
25、仪流式细胞仪蛋白电泳蛋白电泳多参数多参数单参数单参数量化的分布量化的分布平均值平均值容易检测各个参数间的容易检测各个参数间的相关性相关性不容易不容易三、流式细胞仪可检测到的细胞参数颗粒度颗粒度细胞大小细胞大小=前向角散射光（前向角散射光（FSCFSC）细胞相对大小及其表面积细胞相对大小及其表面积 =侧向角散射光（侧向角散射光（SSCSSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性相对复杂性三三 数据处理及数据处理及流式报告FSC SSC FL1 FL2 FL3对数对数 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度
26、）图中100101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞 六）细胞内钙离子测定六）细胞内钙离子测定1 110106 6/ml/ml的细胞悬液，的细胞悬液，加入终浓度为加入终浓度为1-5mol/ml Fluo-3/AM1-5mol/ml Fluo-3/AM，充分混匀，充分混匀，室温避光作用室温避光作用6060分钟。分钟。以以HEPESHEPES缓冲的缓冲的HanksHanks平衡盐溶液洗三次，重悬于平衡盐溶液洗三次，重悬于0.5ml0.5ml同样的溶液，上流式细胞仪检测。同样的溶液，上流式细胞仪检测。根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙离子根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙
27、离子的浓度。的浓度。前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞浆和细胞器密度增高、细胞体积变小；以HEPES缓冲的Hanks平衡盐溶液洗三次，重悬于0.蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机多用的仪器。肿瘤组织中的各种DNA倍体流式细胞术检测细胞表型以HEPES缓冲的Hanks平衡盐溶液洗三次，
28、重悬于0.四）白血病的免疫分型用荧光探针标记的细胞，可被有效地分离出来，Single cells sorted肿瘤组织中的各种DNA倍体在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体作分子探针，多参数分析白血病细胞的免疫表型，了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。用荧光探针标记的细胞，可被有效地分离出来，如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。五、流式细胞术的应用M1阴性界限划分完全是根据阴性对照！如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检
29、测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。六六.分选：分选：488 nm laser+-Fluorescence Activated Cell SortingCharged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积被标记组分含量的定量五、流式细胞术的应用细胞破膜后将细胞内某一蛋白成分进行荧光标记，用流式细胞仪进行测量分析，同表型分析一样，可以测量
30、出这种阳性细胞的数量和这种蛋白的相对含量。二、流式细胞仪的工作原理和基本结构在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。1973 Steinkamp1934 Moldavan侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性三、流式细胞仪可检测到的细胞参数DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。使用不同荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析1934 MoldavanDip%CV:6.into test tubes图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死五）细胞内蛋白的分析：荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激
31、发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。细胞表面/胞浆/核的特异性抗原检测调亡，可进行抗肿瘤药物研究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。into test tubes在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。三、流式细胞仪可检测到的细胞参数用于分选的效率较高的仪器国内较少，台式机一般分选速度为每秒钟300个细胞，图中100101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息
32、状态下、基础水平、未受刺激时等。利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA倍性分析，辅助肿瘤诊断，包括监测癌前病变、肿瘤的早期诊断和肿瘤细胞学诊断。1106/ml的细胞悬液，1934 Moldavan侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性1973 Steinkamp对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜端粒（荧光蛋白）被标记组分含量的定量对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜into test tubes对比-流式细胞仪是一种特殊的显微镜如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。Single cells sorted流式细胞术检测细胞表型根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙离子的浓度。流式细胞仪是一种特殊的显微镜流式细胞仪是一种特殊的显微镜流式细胞仪流式细胞仪显微镜显微镜流动的细胞流动的细胞静止的细胞样本静止的细胞样本数量大数量大数量少数量少高速分选高速分选样本难以再利用样本难以再利用细胞群体特征量分布细胞群体特征量分布揭示细胞内部结构信息揭示细胞内部结构信息
