1、2023-1-131检验医学方法学的评价检验医学方法学的评价2023-1-132好方法：好方法：灵敏度灵敏度 高高 重复性重复性 好好 特异性特异性 高高 准确度准确度 好好 抗干扰抗干扰 强强 适用性适用性 强强 价价 格格 低低 概述概述2023-1-133 掌握方法学学评价是检验科中、高级人员的基本功之一。检验科要不断引进或建立新的诊断试验，引进什么试验，对实验结果如何解释和如何得到有效应用，这些都离不开对试验的评价。然而同国外相比还存在着较大差距，今后对这方面的学习和实践应该加强。概述概述2023-1-134第一节第一节 检验方法学评价的重要性检验方法学评价的重要性 一、医学检验方法的
2、建立是为了诊断疾病。在建立或引进一个新的试验时，必须了解该试验方法的基本性能，因此应该进行方法学评价。2023-1-135二、二、检验方法的评价是合理解释实验室检验方法的评价是合理解释实验室数据的基础。数据的基础。检验科的工作目标主要是：检验科的工作目标主要是：1能为临床提供可靠的数据；2为临床提供充分的检验项目和及时的报告；3为临床能提供专业咨询。因此在引进新技术的同时，因此在引进新技术的同时，必须及时开展与临床的合作和对必须及时开展与临床的合作和对话，以强化对实验室数据的合理话，以强化对实验室数据的合理解释与有效利用，及时将数据转解释与有效利用，及时将数据转化为高层次的临床判断分析信息化为
3、高层次的临床判断分析信息。2023-1-137三、从医学检验事业的发展要素来看，掌握检验方法学评价在检验工作中有着重要作用。检验科人员组成应包括方法学家，其工作以开展新方法进行方法学评价，提高检验质量为主。2023-1-138第二节第二节 评价实验的设计及统计指标的选择评价实验的设计及统计指标的选择 方法评价的基本内容是通过实验途径,测定并评价它的准确度和精密度。不论准确度和精密度，都强调的是误差，评价过程就是对误差的测定。2023-1-1391预评价预评价：主要研究候选方法的最适条件。这些条件包括：、试剂的浓度；、缓冲液种类；、离子强度及pH值；、标本与试剂的容积比；一、方法学评价计划一、方
4、法学评价计划2023-1-1310、反应温度与时间；、吸收曲线与波长选择；、线性范围等。2023-1-13112初步评价：、用标准液作线性及批内重复实验；、用血清作批内及天内重复实验；、进行回收实验；、进行干扰实验。方法学评价计划方法学评价计划2023-1-13123最后评价：最后评价：、作日间重复实验；、方法学比较实验；、判断方法的可接受性；、进行临床相关研究。方法学评价计划方法学评价计划2023-1-13134方法应用：方法应用：、建立质控系统；、训练操作者；、引进常规应用；、常规性能管理。方法学评价计划方法学评价计划2023-1-1314（一）（一）、方法的分级、方法的分级 临床生化成分
5、的测定方法很多，临床生化成分的测定方法很多，根据其准确度与精密度的不同可以根据其准确度与精密度的不同可以分为三级。分为三级。二、方法的选择二、方法的选择2023-1-13151、决定性方法（、决定性方法（Definitive methods）指准确度最高，系统误差最指准确度最高，系统误差最小，经过详细研究，没有发现产小，经过详细研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为明确的方法，测定结果为“确定确定值值”，与，与“真值真值”最接近。最接近。方法的分级方法的分级2023-1-1316条件：技术要求太高且复杂，费用昂条件：技术要求太高且复杂，费
6、用昂 贵，贵，仪器精密、试剂最纯。仪器精密、试剂最纯。用途：不能直接用于鉴定常规方法的用途：不能直接用于鉴定常规方法的 准确性，只用于发展及评价参准确性，只用于发展及评价参 考方法和标准品。考方法和标准品。2023-1-13172、参考方法（、参考方法（Reference methods）指准确度与精密度已经充分证指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析度、特异性、直线性及较宽的分析范围。范围。方法的
7、分级方法的分级2023-1-1318条件：所需仪器的要求也较高，昂贵，试条件：所需仪器的要求也较高，昂贵，试剂要求二级标准品，纯度高、杂质少，剂要求二级标准品，纯度高、杂质少，在条件优越的实验室可进行常规在条件优越的实验室可进行常规 工作。工作。用途：主要应用于鉴定常规方法，评价其用途：主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。它也用于鉴定二级标准品，以被接受。它也用于鉴定二级标准品，为质控血清定值，也可用于评价商品试为质控血清定值，也可用于评价商品试剂盒等。剂盒等。2023-1-13193 3、常规方法（、常规方法（routi
8、ne methodroutine method）性能指标符合临床或其它目的需要，有性能指标符合临床或其它目的需要，有适当的分析范围，而且经济实用。常规方法适当的分析范围，而且经济实用。常规方法分为偏差已知的方法和偏差未知的方法。分为偏差已知的方法和偏差未知的方法。条件：条件：常规方法在作出评价以后，经有关学常规方法在作出评价以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法。术组织认可，可以作为推荐方法。用途：普通实验室。用途：普通实验室。方法的分级方法的分级2023-1-1320临床化学方法之间关系可见下图。临床化学方法之间关系可见下图。方法的分级方法的分级2023-1-1321 国际标准化委员会将
9、标准品（参考国际标准化委员会将标准品（参考物）的定义暂定为：它的一种或几种物物）的定义暂定为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，被用于校理或化学性质已经充分确定，被用于校正仪器或证实一种测定方法的物质，并正仪器或证实一种测定方法的物质，并将其分成三级。将其分成三级。标准物质的定值结果一般表示为：标准物质的定值结果一般表示为：标准值标准值 总不确定度。总不确定度。（二）标准品的分级（二）标准品的分级2023-1-13221 1、一级标准物质一级标准物质（primary reference material）一级标准品（原级参考物）是已经确一级标准品（原级参考物）是已经确定的稳定而均一的物
10、质，它的数值已由决定的稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量。它可用于校确定，所含杂质也已经定量。它可用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及正决定性方法，评价及校正参考方法以及为为“二级标准品二级标准品”定值。定值。标准品的分级标准品的分级2023-1-13232、二级标准物质二级标准物质（secondary reference material）二级标准物质的量由参考方法定值或用一二级标准物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定，主要用于常规方法的标级标准品比较而确定，主要用于常规方法的标化或
11、为控制物定值。化或为控制物定值。二级标准品或是纯溶液（水或有机溶剂的二级标准品或是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），或存在于相似基质中。溶液），或存在于相似基质中。标准品的分级标准品的分级2023-1-13243 3、校准物（、校准物（calibrator calibrator）用二级标准物质校准，常规方用二级标准物质校准，常规方法定值。用于对常规方法和仪器的法定值。用于对常规方法和仪器的校准。校准。标准品的分级标准品的分级2023-1-13254、质控物（质控物（control material）具有与检测过程相适应的特性，具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似。其成份与检
12、测样本的基质相同或相似。用于质量控制，不用于标化。用于质量控制，不用于标化。标准品的分级标准品的分级2023-1-1326国际临床化学协会（国际临床化学协会（IFCC）提出：）提出：常规方法应具有实用性和可靠常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标，至于某一项性两方面的性能指标，至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准，具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床实验室根据采用这一试验可由临床实验室根据采用这一试验的目的决定。的目的决定。三、方法选择的要求三、方法选择的要求2023-1-13271 1、实用性一般应具备：、实用性一般应具备：、微量快速能便于急诊，适合成套项目分析；、费用低廉，包
13、括劳动力与试剂、设备及一般管理费用等；、方法简便；、应用安全可靠。方法选择的要求方法选择的要求2023-1-13282 2、可靠性一般具有较高的精密度、可靠性一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测能力。和准确度，以及较大的检测能力。、精密度精密度 变异系数（变异系数（CVCV）一般应小于）一般应小于5 5。、准确度与特异性准确度与特异性 准确度是指测定值与准确度是指测定值与“真值真值”的符的符合程度。一般偏差系数（合程度。一般偏差系数（CBCB）应小于）应小于5 5。特异性是指只。特异性是指只对待测物质起化学反应，不与其它结构类似的化合物发生对待测物质起化学反应，不与其它结构类似的化合物
14、发生反应。反应。、检测能力检测能力 即即“检测限度检测限度”，或，或“检出限检出限”。检出限。检出限通常是指能与适当的通常是指能与适当的“空白空白”读数相区别的待测物的最小读数相区别的待测物的最小值。值。方法选择的要求方法选择的要求2023-1-1329（一）广泛查阅文献根据方法选择的要求对已发表的各种方根据方法选择的要求对已发表的各种方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实的使用价值。的科学根据及真实的使用价值。四、方法选择的步骤四、方法选择的步骤2023-1-1330（二）选定候选方法（二）选定候选方法 经初步选定的方法称为候选方法。候选经
15、初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，应该写出该法的原理与参考文方法确定后，应该写出该法的原理与参考文献，所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度献，所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配套试剂盒），标本收集要求，详细的（或配套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步骤，标准曲线和结果计算，文献中列操作步骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性能指标，参考值与参考范围，以及其出的性能指标，参考值与参考范围，以及其它应注意的事项与安全防护措施等。它应注意的事项与安全防护措施等。方法选择的步骤方法选择的步骤2023-1-1331（一）、方法建立的原理确定 临床生化方法按其传统分类可分为光谱法、层析法、电泳
16、法、酶法、电化学法、分子生物学和免疫化学法等，这些方法的建立首先要根据其技术的原理和被测物质的物理化学性质来确定其方法建立的原理。五、方法的建立五、方法的建立2023-1-1332（二）、方法建立时的条件选择（二）、方法建立时的条件选择 在方法建立的原理确定后，在方法建立的原理确定后，尚需根据其原理来选择合适的条尚需根据其原理来选择合适的条件，以保证所建的方法可靠。下件，以保证所建的方法可靠。下面以光度法为例介绍其条件选择面以光度法为例介绍其条件选择的主要环节：的主要环节：方法的建立方法的建立2023-1-1333 颜色反应是光度分析的基础，因此，颜色反应是光度分析的基础，因此，用作光度测定的
17、颜色反应至少要具备以用作光度测定的颜色反应至少要具备以下几条：下几条：a、反应有较高的特异性，从而干扰小；、反应有较高的特异性，从而干扰小；b、反应产生的有色物质吸光系数要大，大者、反应产生的有色物质吸光系数要大，大者灵敏度高；灵敏度高；c、有色产物的离解度要小，小则稳定；、有色产物的离解度要小，小则稳定；d、此外，还要求有色产物有恒定的组成成分，、此外，还要求有色产物有恒定的组成成分，使产生的颜色稳定。使产生的颜色稳定。方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-1334 由于影响颜色反应的因素很多，如温度、pH、试剂浓度、反应的时间等等。这些因素在建立新方法时都要逐项试验，确定最
18、佳实验条件方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-13351、选择合适的吸收光谱、选择合适的吸收光谱确定波长确定波长 实际上就是测定颜色反应产生的实际上就是测定颜色反应产生的光吸收曲线。方法是在整个可见光区光吸收曲线。方法是在整个可见光区（400-700nm）进行波长扫描，同时，）进行波长扫描，同时，还应以同法分别测定其空白液和标准还应以同法分别测定其空白液和标准物颜色产物的吸收曲线。物颜色产物的吸收曲线。方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-1336A AA A标准标准A A空白空白A A最大时的波长最大时的波长(即干扰最小即干扰最小)为最为最适波长适波长方法建
19、立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-1337方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-13382、测定方法适用的浓度范围、测定方法适用的浓度范围线性实验线性实验根据郎伯-比耳定律吸光度应与溶液的浓度成正比。测定方法适用的浓度范围是指分析的浓度范围在直线线性段，浓度与吸光度之比为一常数，此时直线上任何一点的斜率tan相等，即：tanA1/C1A2/C2A3/C3An/CnK此处K即为校正常数，可用于结果计算。方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-1339 通常稀溶液都是符合比耳定律的，但在浓度过高和过低时往往都不呈直线（见下图），说明低浓度部分亦有仪器的灵
20、敏度和方法的检测能力限制，所以，具体的测定就宜选择在直线段浓度范围内进行。方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-1340AC线性段方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-13413、观察影响颜色反应的因素、观察影响颜色反应的因素 影响颜色反应的主要因素有：溶液pH的影响、杂质的影响、反应的温度和时间、以及颜色的稳定性等。这些都是光度法测定误差的主要来源。都需要通过实验来观察并控制在一个适宜的范围内。从而保证方法的准确性和精密性。方法建立时的条件选择方法建立时的条件选择2023-1-1342溶液pH的影响 有些溶液的颜色对pH值的改变非常灵敏。因此，在建立方法时可在
21、不同pH值条件下（其它条件不变）令其反应，以观察颜色反应的吸光度变化，从而选择合适的pH值范围来保证颜色反应，以求较高的灵敏度和较好的线性。有时还需用相应的pH缓冲液来维持反应的pH，以利颜色反应的正常进行。观察影响颜色反应的因素观察影响颜色反应的因素2023-1-1343杂质的影响 由于临床标本中除含待测物质外，还含有许多非测定物质，成分十分复杂，影响检测结果。为此就需要进一步改进方法，或设立标本空白，或将标本作适当处理，除去干扰物，或加入合适的干扰物掩蔽剂等，以提高方法的特异性。观察影响颜色反应的因素观察影响颜色反应的因素2023-1-1344特异性和干扰的区别：特异性和干扰的区别：特异性
22、是指检测试剂只与特定的被检测物反应而特异性是指检测试剂只与特定的被检测物反应而不与其他物质发生反应，因此可疑物本身和分析试剂不与其他物质发生反应，因此可疑物本身和分析试剂反应，则方法特异性差；干扰是指某些物质本身并不反应，则方法特异性差；干扰是指某些物质本身并不与检测试剂反应，但是它能影响被测定物与检测试剂与检测试剂反应，但是它能影响被测定物与检测试剂间反应的某一步骤，从而影响检测结果。例：血糖测间反应的某一步骤，从而影响检测结果。例：血糖测定，用邻甲苯胺试剂，半乳糖、甘露糖等也与试剂反定，用邻甲苯胺试剂，半乳糖、甘露糖等也与试剂反应，这是特异性不足，而在葡萄糖氧化酶法测定中，应，这是特异性不
23、足，而在葡萄糖氧化酶法测定中，尿酸可与尿酸可与H2O2反应，使部分反应，使部分H2O2不能参与过氧化物不能参与过氧化物酶的第二步反应，造成对显色的干扰，因此，尿酸对酶的第二步反应，造成对显色的干扰，因此，尿酸对该反应有干扰，而本身不是被测定。该反应有干扰，而本身不是被测定。观察影响颜色反应的因素观察影响颜色反应的因素2023-1-1345反应的温度和时间 有些有色物质能迅速反应生成，另一些有色物质须经过相当长时间后反应才能完全。提高反应的温度可以加速化学反应，缩短反应的时间。因此这可以在不同的温度下（如25，30，37）令其反应，通过检测吸光度来观察各自反应终点时间（一般达到反应终点，随后测定
24、的吸光度不再变化），以选定适宜临床应用的反应最佳温度和时间。观察影响颜色反应的因素观察影响颜色反应的因素2023-1-1346稳定性试验稳定性试验 了解呈色反应达峰值的时间，稳定了解呈色反应达峰值的时间，稳定多长时间，从而确定比色时间。即刻及多长时间，从而确定比色时间。即刻及室温放置不同时间，每室温放置不同时间，每5分钟测定一次。分钟测定一次。根据其吸光度的变化确定方法稳定的时根据其吸光度的变化确定方法稳定的时间范围。间范围。试剂空白：试剂本身是否稳定试剂空白：试剂本身是否稳定标准：产物是否稳定标准：产物是否稳定样品：血清中的其它物质是否影响反应的稳定性样品：血清中的其它物质是否影响反应的稳定
25、性 观察影响颜色反应的因素观察影响颜色反应的因素2023-1-1347一、重复性试验一、重复性试验目的在于考察候选方法的随机误目的在于考察候选方法的随机误差，重复性试验的方法是对同一材料差，重复性试验的方法是对同一材料分成数份试验样品，进行多次分析测分成数份试验样品，进行多次分析测定。定。第三节、方法学评价的实验方法及指标第三节、方法学评价的实验方法及指标2023-1-1348（一）试验形式与方法 1、批内重复性试验：可以用同一份标本在相当短的时间内，按规定的操作方法，在较稳定的条件下，作多次（一般为20次）重复性测定。计算其 X、S与CV%。不同性质的分析对CV%值的要求不同，一般应小于5，
26、精密的分析或多次平行测定，要求小于2。重复性试验重复性试验2023-1-1349 2、天内重复性试验：在一天内对一个或数个标本作数批重复测定，其它条件和批内相同，但因在一天内重复测定几批，所受影响因素要比批内多，所得的CV%值可能比批内大一些。重复性试验重复性试验2023-1-1350 3、天间重复性试验：将同一标本每天一次随机插入常规标本中测定，连续20个工作日，这样得到的CV%值比上述批内与天内大，能反映实际工作的情况。重复性试验重复性试验2023-1-1351 4、病人标本的平行双份测定：如不易得到含有合适基质的稳定样品（如作血液pH的重复性测定的标本），可采用病人标本的双份测定来代替重
27、复性试验，选择一批病人标本（20至100份），待测物浓度应在实验方法的分析范围内，有高有低；记录标本的特性，如有某种药物、混浊、溶血或有尿毒症等，可影响其准确性。可作一批或几批分析，但每一标本都平行做两份，用双份分析结果之差（d）来计算S（d/2N）作为不精密度的指标。重复性试验重复性试验2023-1-1352（二）分析样品的选择（二）分析样品的选择 作重复性试验的样品，应用标准液、控制物溶液、病人标本或混合血清均可，视其用途而定。作批内重复性试验，用标准液可以得到各种不同浓度，较简便，它代表了最好的重复性性能。若结果良好，说明方法操作是适宜的，再进一步用其它样品进行测定。在进行天间重复性试验
28、时，用冻干质控血清较好，因其稳定、方便。其它样品进行测定。在进行天间重复性试验时，用冻干质控血清较好，因其稳定、方便。重复性试验重复性试验2023-1-1353（三）析物浓度的选择 进行重复性试验时被测物浓度，宜选择在医学上具有决定性意义的浓度进行试验，因为这种浓度在临床分析实验结果时最有用处。重复性试验重复性试验2023-1-1354 所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。二、回收试验二、回收试验2023-1-13551、回收试验的用途 鉴定待测物质损失的程度，找出样品损失的关键步骤，以便改进样品的处理技术。准确测定分析
29、方法的回收率（rate of recovery），用以判断候选方法的可靠性。更确切地说，回收试验是用来发现方法的比例系统误差的有效评价方法。比例系统误差的特征是随着分析物浓度的增加此种误差成比例地增大，它常因样品基质液中的其它物质与分析物竞争分析试剂并与之发生反应所引起的。回收试验回收试验2023-1-13562、原理：、原理：将被分析的纯品标准液加入病人样品中，成为分析样品，原病人样品加入相同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。回收试验回收试验2023-1-1357 3 3、回收率计算：回收率计算：标准液浓度标准液浓度标准液量标准液量(ml)加入浓度
30、加入浓度=血清血清(ml)+标准液量标准液量(ml)回收浓度回收浓度=试验样品浓度试验样品浓度基础样品浓度基础样品浓度回收试验回收试验2023-1-1358 回收浓度回收浓度回收率回收率(%)=X 100%加入浓度加入浓度 回收试验回收试验2023-1-13594、比例误差计算：比例误差计算：如平均回收率为如平均回收率为95%则比例误差为则比例误差为 95%-100%=-5%回收试验回收试验2023-1-13605、回收实验方法：按样品加标准液的、回收实验方法：按样品加标准液的原则原则,以血钙测定为例说明如下：以血钙测定为例说明如下：样品制备样品制备1)基础样品：血清基础样品：血清2ml蒸馏水
31、蒸馏水0.1ml；2)分析样品：血清分析样品：血清2ml2mmol/L钙标准液钙标准液0.1ml；3)分析样品：血清分析样品：血清2ml20mmol/L钙标准液钙标准液0.1ml；上述各管，分别按血钙测定方法，分上述各管，分别按血钙测定方法，分别取样测定。别取样测定。回收试验回收试验2023-1-1361结果计算：结果计算：0.1 0.1 第二管加入量第二管加入量=4x =0.19(mmol/L)=4x =0.19(mmol/L)2+0.1 2+0.1 0.1 0.1 第三管加入量第三管加入量=25x =1.19(mmol/L)=25x =1.19(mmol/L)2+0.1 2+0.1回收实验
32、回收实验2023-1-1362本例检测结果如下表：（本例检测结果如下表：（mmol/L）标本号标本号 测得浓度测得浓度 加入浓度加入浓度 回收浓度回收浓度 回收率回收率 1 1.70 -2 1.88 0.19 0.18 94.7%3 2.85 1.19 1.15 96.6%平均平均95.7%回收试验回收试验2023-1-1363理想的结果希望回收到理想的结果希望回收到100%，现在平，现在平均回收均回收95.7%。有。有4.3%的比例误差。的比例误差。它表明，一个含钙真值为它表明，一个含钙真值为2.5mmol/L的的标本，若用该方法测定，测得值约为标本，若用该方法测定，测得值约为2.39mmo
33、l/L(2.5x95.7%)，误差为，误差为0.11mmol/L(2.5X4.3%)。回收试验回收试验2023-1-13646 6、注意事项、注意事项:准确吸量，因为被分析物的理论值是根据加入准确吸量，因为被分析物的理论值是根据加入标准液体积及原样品的体积计算所得，吸量稍有标准液体积及原样品的体积计算所得，吸量稍有不准，就会影响结果。因此，选择经过校准的吸不准，就会影响结果。因此，选择经过校准的吸管，严格地清洗与干燥，以及按正规要求吸量均管，严格地清洗与干燥，以及按正规要求吸量均很重要。很重要。样品中加入标准液后，总的浓度必须在测定方样品中加入标准液后，总的浓度必须在测定方法的分析范围内，一般
34、须作加入高、中、低不同法的分析范围内，一般须作加入高、中、低不同浓度的回收试验，计算平均回收率。浓度的回收试验，计算平均回收率。回收试验回收试验2023-1-1365加入标准液后，最好使实验样品中被测浓加入标准液后，最好使实验样品中被测浓度达到医学上具有决定意义的浓度。度达到医学上具有决定意义的浓度。加入标准液的体积在整个样品中要少，一加入标准液的体积在整个样品中要少，一般在般在10以内。若稀释过大，误差将发生改以内。若稀释过大，误差将发生改变，甚至消失。变，甚至消失。回收试验回收试验2023-1-1366干扰试验的目的也是用来衡量候选方法干扰试验的目的也是用来衡量候选方法的准确度的。在加入一
35、定浓度的干扰物的准确度的。在加入一定浓度的干扰物的条件下，形成的是恒定系统误差。干的条件下，形成的是恒定系统误差。干扰物浓度不同，误差大小也不同。扰物浓度不同，误差大小也不同。三、干扰实验三、干扰实验:2023-1-13671、方法：、方法：基本与回收试验一样，但是加入的是疑有干扰的物质而不是标准液。干扰实验干扰实验:2023-1-13682 2、计算方法：、计算方法：干扰物干扰物(ml)加入浓度加入浓度=干扰物浓度干扰物浓度 血清血清(ml)+干扰物干扰物(ml)干扰值干扰值=试验样品浓度试验样品浓度 -基础样品浓度基础样品浓度 干扰实验干扰实验:2023-1-13693、以肌酐对葡萄糖测定
36、的干扰试验方法及结果简、以肌酐对葡萄糖测定的干扰试验方法及结果简述如下：述如下：样品制备：样品制备：血清血清0.9ml+蒸馏水蒸馏水0.1ml血清血清0.9ml+442umol/L肌酐液肌酐液0.1ml血清血清0.9ml+884umol/L肌酐液肌酐液0.1ml各管均用同一方法作双份检测取平均值。结果如各管均用同一方法作双份检测取平均值。结果如下表：下表：干扰实验干扰实验:2023-1-1370标本号标本号 葡萄糖测定值葡萄糖测定值 加入肌酐值加入肌酐值 干扰值干扰值 mmol/L umol/L mmol/L mmol/L umol/L mmol/L 5.55 -5.55 -5.77 44.2
37、 0.022 5.77 44.2 0.022 6.16 88.4 0.061 6.16 88.4 0.061 干扰实验干扰实验:将将 结果平均结果平均,则每则每88.4umol/L88.4umol/L肌酐干扰值肌酐干扰值为：为：(0.022x2+0.061)/2 0.053 mmol/L(0.022x2+0.061)/2 0.053 mmol/L 干扰实验干扰实验:2023-1-1372结果说明：结果说明：每每88.4umol/L88.4umol/L肌酐使血糖值增高肌酐使血糖值增高约约0.0530.053 mmol/L,mmol/L,而正常人血清肌酐高而正常人血清肌酐高限为限为132 umol
38、/L132 umol/L，带入血糖测定误差为，带入血糖测定误差为0.078 mmol/L0.078 mmol/L，无临床意义，但在肌酐，无临床意义，但在肌酐病理值时可达病理值时可达884 884 1786umol/L,1786umol/L,则可则可使血糖增高使血糖增高0.520.521.11 mmol/L1.11 mmol/L。干扰实验干扰实验:2023-1-13734、可疑干扰物的浓度：、可疑干扰物的浓度：加入可疑干扰物的浓度须达到有价值的范围，有可能应达到病理标本的最高浓度值，在确证有影响后应测定在何浓度时，产生的误差在临床上无意义，即确定使分析结果影响临床应用价值的最低可疑物浓度值。干扰
39、实验干扰实验:2023-1-13745、被试验的物质：、被试验的物质：对某一被测定物的反应完全不受标本中其它成分干扰的测定方法是不多的，可根据该方法的反应原理，提示出可能的干扰物。干扰实验干扰实验:2023-1-1375 一般应考虑的是用胆红素、溶血（血红蛋白）、脂血、防腐剂、抗凝剂等进行试验。但干扰试验有一定的局限性，因为人们只能试验某些物质的影响，还有许多药物和食物成分未经试验，亦不能认为无关。干扰实验干扰实验:2023-1-13766、消除干扰的常用方法、消除干扰的常用方法 作空白（对照）试验。一是试剂空白，可以校正标本读数中的试剂部分；另一种是标本空白，用以补偿标本中被测物以外的其它物
40、质的影响。采用各种物理、化学的方法、分离除去干扰物，如：PEG去蛋白，脂溶剂萃取去脂等。近年来出现的由计算机控制的双波长或多波长检测仪器，在排除干扰因素方面既有效又简便。干扰实验干扰实验:2023-1-1377 对比试验用于检测候选方法的系统分析误差，包括比例和恒定两种系统误差在内。如果对适当的数据进行分析，也可提供系统误差的性质究竟是属恒定误差还是比例误差。四、方法比较实验四、方法比较实验2023-1-13781、方法：、方法：对一组病人的标本用候选方法和对比方法同时进行分析测定，最后观察两者之间的差异。这是考验候选方法是否可被采用的重要措施。方法比较实验方法比较实验2023-1-13792
41、、比较方法的选择：、比较方法的选择：在临床生化常规方法评价时，最好选择参考方法作为对比方法。这样在解释结果时，就可把方法间的任何分析误差都可归于候选方法。方法比较实验方法比较实验2023-1-1380注意事项：注意事项：试验样品数：一般作试验样品数：一般作40100例，包括各例，包括各种疾病的样品，即包括在常规工作中可能遇种疾病的样品，即包括在常规工作中可能遇到的整个分析范围。到的整个分析范围。重复分析：一般每个样品用两种方法各测重复分析：一般每个样品用两种方法各测定一次，最好各测定两次，不是平行测定，定一次，最好各测定两次，不是平行测定，而是分两批进行。而是分两批进行。方法比较实验方法比较实
42、验 时间间隔：每天测定时间间隔：每天测定25个样品个样品，约测定，约测定20天。天。结果的图示：根据实验结果作坐标结果的图示：根据实验结果作坐标图，比较方法所得数值为横坐标，候图，比较方法所得数值为横坐标，候选方法所得数值为纵坐标，用以定性选方法所得数值为纵坐标，用以定性地估计分析误差。地估计分析误差。方法比较实验方法比较实验2023-1-13824、统计处理、统计处理 方法比较试验所得的结果是配对资料，可进行配对资料的统计处理，包括配对t检验、相关和回归分析等。通常都选用相关回归分析方法，因为此法可以计算出所研究浓度范围内任一浓度的系统误差。方法比较实验方法比较实验2023-1-1383 Y
43、 Y Y=bX+aY=bX+a Y=X+aY=X+a Y=bXY=bX X 方法比较实验方法比较实验Y=XY=XY=bXY=bX2023-1-1384 从回归方程ybx a中，可显示出候选方法有无系统性误差。这种误差分三类：恒定系统误差与比例系统误差，或两者兼有。回归线的截距a代表恒定误差，回归系数（回归线的斜率）b代表比例误差，相关系数r代表两种方法的相关性是否密切。方法比较实验方法比较实验2023-1-1385 候选方法可否被接受，最后根据评价实验中的误差结果进行归纳，作出判断。West-gard曾经对医学决定水平上的分析误差，采用统计学方法制定出一套判断指标，首先是制定“可允许误差的95
44、限度”，然后计算各项误差并与其比较，任何一项指标大于可允许误差都不能被接受。第四节第四节 方法可接受性的决定方法可接受性的决定2023-1-1386 分析性能的评估是对检测系统作病人样品检测时可能具有的误差进行估计。从质量管理的角度，可将检测误差分为稳定状态（固有）误差和不稳定状态（外加）误差。设计各种实验对误差的估计，是对检测系统稳定状态（固有）误差的估计。一、分析误差一、分析误差2023-1-1387 如果这类误差过大，检测系统如果这类误差过大，检测系统无法被临床接收，不能用于检测病无法被临床接收，不能用于检测病人标本。实验室一定要使用可靠的人标本。实验室一定要使用可靠的检测系统用于常规工
45、作，它的稳定检测系统用于常规工作，它的稳定状态误差较小，在临床可接收低水状态误差较小，在临床可接收低水平之内。这是保障检验结果质量的平之内。这是保障检验结果质量的前提。前提。分析误差分析误差2023-1-1388 从误差的性质上，可以将误差从误差的性质上，可以将误差分为随机误差和系统误差。性能评分为随机误差和系统误差。性能评估实验也相应设计为了解不同性质估实验也相应设计为了解不同性质的误差。最后，还需综合起来反映的误差。最后，还需综合起来反映总的误差水平。总的误差水平。分析误差分析误差2023-1-1389（一）、随机误差（一）、随机误差（Random Error,RERandom Error
46、,RE）或不精或不精密度密度(Imprecision)(Imprecision)这类误差可正可负，亦无一定的大小，称为随机误差。若将某标本作多次检测，用均值（X）表示这组检测值的平均水平，标准差（s）为各检测值对于均值的离散程度的指标。分析误差分析误差2023-1-1390 若将某标本作多次检测，用均若将某标本作多次检测，用均值（值（X X）表示这组检测值的平均水）表示这组检测值的平均水平，标准差（平，标准差（s s）为各检测值对于）为各检测值对于均值的离散程度的指标。检验的特均值的离散程度的指标。检验的特点是每个标本只做一次就发出检验点是每个标本只做一次就发出检验报告，因此检验结果报告，因此
47、检验结果XiXi是对标本作是对标本作多次检测的一个抽样。多次检测的一个抽样。随机误差随机误差2023-1-1391 所有重复检验的Xi值以均值为中心，它们和均值的差异有大有小，方向各异；这即是随机误差的表现。临床希望同一标本的各次检测值Xi重复性好，这是人们对精密度的追求。随机误差随机误差2023-1-1392 精密度是重复检测值间的一致性。度量精密度好坏是不精密度。重复检测值的s大小反映在均值下的精密度水平，也可以变异系数(CV)表示相对变异大小。随机误差随机误差2023-1-1393 检验结果报告内具有的随机误差，常以95%可能性出现的最大随机误差量表示。也即发出的报告都认为是均值，但是实
48、际报告值Xi和均值具有的最大差异（95%可能性）为1.96s1.96s。以这样大小的差异量表示标本只做一次检验发出的报告中具有的随机误差估计量。写作RE=1.96sRE=1.96s。随机误差随机误差2023-1-1394（二）、系统误差（二）、系统误差(Systematic Error,SE)(Systematic Error,SE)或或不准确度不准确度(Inaccuracy)(Inaccuracy)这类误差有一定的方向和大小，称为系统误差。有系统误差的结果是不准确的。分析误差分析误差2023-1-1395 准确度检测值和真值的一致性。但是它们之间的差异既有随机误差，也有系统误差。检验中为了确
49、切表示准确度常以相对准确相对准确度度表示，即：检测均值和真值的一致性。检测均值和真值的一致性。它们的差异称为偏倚，亦即系统误差。它使检测结果偏高或偏低，有一定的大小。度量准确度以不准确度即偏倚来表示。度量准确度以不准确度即偏倚来表示。系统误差系统误差2023-1-1396造成检测系统不准确的因素造成检测系统不准确的因素：一是检测系统自身的，如方法特异性差或严重的基质效应等；二是检测系统和某一认可的检测系统或方法，同时对一批病人标本作对比检测，检测结果的差异是两个检测系统间的系统误差。后一种系统误差更被大家重视。现今，在表达检测系统或方法的准确度时，直接指的是检测系统间或方法学比较的系统误差。系
50、统误差系统误差2023-1-1397 两个检测系统对同批标本检测后，两个检测系统对同批标本检测后，以公认的检测系统或方法（亦称为以公认的检测系统或方法（亦称为比较方法，比较方法，Comparative methodComparative method）为为X X，被评价的检测系统或方法，被评价的检测系统或方法（Test methodTest method）为）为Y Y。系统误差系统误差2023-1-1398度量系统误差(SE)的方式有两种：一是在标本的检测值都比较集中时，两个系统检测病人标本的结果均值间的差，表示在X方法的均值时两方法间具有的系统误差。写作写作:Y YX X （在（在X X 时
