1、12决定性方法（决定性方法（definitive method）：）：经详尽经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法。的方法。参考方法（参考方法（reference method）：）：经详尽研经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法。的方法。常规方法（常规方法（routing method）：）：可满足临可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。床或其他目的需要的日常使用的方法。3分析物分析物 决定性方法决定性方法参考方法参考方法CaID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法Cl电量滴定电量滴定中子活化法中
2、子活化法电流滴定法电流滴定法FeID-MS沉淀蛋白后亚铁嗪反应沉淀蛋白后亚铁嗪反应MgID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法PID-MSKID-MS中子活化法中子活化法火焰光度法火焰光度法Na重量分析法重量分析法中子活化法中子活化法火焰光度法火焰光度法4分析物分析物决定性方法决定性方法参考方法参考方法AlbAlb免疫化学法免疫化学法TPTP双缩脲法双缩脲法CreaCreaID-MSID-MS中子活化法中子活化法离子交换层析离子交换层析UreaUreaID-MSID-MS尿素酶法尿素酶法UAUAID-MSID-MS尿酸酶法尿酸酶法BilBil重氮法重氮法GluGluID-MSID-MS己
3、糖激酶法己糖激酶法CholCholID-MSID-MS胆固醇氧化酶法胆固醇氧化酶法TGTGID-MSID-MS酶法酶法567仪器参数仪器参数试剂试剂89评价内容：评价内容：+初步评价（初步评价（NCCLS EP10）+精密度（精密度（NCCLS EP5）+对比及偏差（对比及偏差（NCCLS EP9）+线性（线性（NCCLS EP6）+抗干扰能力（抗干扰能力（NCCLS EP7）+基质效应（基质效应（NCCLS EP14）+临床准确度（敏感性和特异性）临床准确度（敏感性和特异性）（NCCLS GP10，ROC曲线）曲线）10NCCLS文件文件EP9-A用患者样本进行方法对比用患者样本进行方法对比
4、及偏差评估及偏差评估批准指南批准指南1995年年12月月11评价两种分析方法（同一分析项目）评价两种分析方法（同一分析项目）的偏差。的偏差。评价要求：评价要求：熟悉仪器操作熟悉仪器操作熟悉评价方案熟悉评价方案质控质控足够的数据（最少足够的数据（最少5个工作日，个工作日，40个样本）个样本）用途用途：目的：目的：引进新方法前或用一种方法替代另一种方引进新方法前或用一种方法替代另一种方 法时进行偏差分析。法时进行偏差分析。1213测定范围：测定范围：医学决定水平范围内（均匀分布）医学决定水平范围内（均匀分布）样本数：样本数：至少至少40例，增加可提高可信性。例，增加可提高可信性。测定方法：测定方法
5、：两种方法分别做双份测定。两种方法分别做双份测定。测定顺序：测定顺序：每天每天：1、2、3、4、5、6、7、8 8、7、6、5、4、3、2、114测定次数：测定次数：每天分别用两种方法进行测定，每天分别用两种方法进行测定，至少测定至少测定5天，共天，共40个样本个样本数据监督：数据监督：系统误差、人为误差系统误差、人为误差质控：质控：常规质控常规质控151617表表 1 1 病病 人人 样样 本本 检检 验验 结结 果果B BE EC CK KM MA AN N（Y Y）（g g/l l）H HI IT TA AC CH HI I(X X)(g g/l l)样样 品品号号结结 果果1 1(Y
6、Y1 1)结结 果果2 2(Y Y2 2)均均 值值Y Yi i)D DY Yi i结结 果果1 1(X X1 1)结结 果果2 2(X X2 2)均均 值值(X Xi i)D DX Xi iY Yi i-X Xi i1 12 25 52 25 52 25 50 02 28 8.3 32 28 8.1 12 28 8.2 20 0.2 2-3 3.2 22 24 46 64 47 74 46 6.5 51 14 47 7.5 54 47 7.4 44 47 7.5 50 0.1 1-1 13 33 36 63 36 63 36 60 03 38 8.4 43 38 8.1 13 38 8.3
7、30 0.2 2-2 2.3 34 43 39 94 40 03 39 9.5 51 14 41 1.3 34 40 0.8 84 41 1.1 10 0.5 5-0 0.6 65 51 14 41 14 41 14 40 01 18 8.7 71 18 8.9 91 18 8.8 80 0.2 2-4 4.8 86 63 32 23 32 23 32 20 03 36 6.1 13 36 6.2 23 36 6.2 20 0.1 1-4 4.2 27 72 27 72 28 82 27 7.5 51 13 31 1.2 23 31 1.2 23 31 1.2 20 0-3 3.7 78 84
8、 42 24 43 34 42 2.5 51 14 43 3.8 84 43 3.9 94 43 3.9 90 0.1 1-1 1.4 41833343434035.636.335.90.3-1.934303030032.132.632.30.5-2.335404040041.14141.10.1-1.136424242043.243.443.30.2-1.337383838038.638.938.70.3-0.73843434304544.944.90.1-1.939353535036.93736.90.1-1.940444544.5144.845.3450.5-0.5平平 均均 数数0 0
9、.3 37 70 0.4 41 1-2 2.7 719y=1.1722x-9.0485R=0.969510203040501020304050HITACHI 7170(BCG)BECKMAN CX9(BCP)20Yi-Xi对X i偏 倚图-15-10-505101520304050HITACHI 7170（B CG）Yi-Xi偏差图：每次测定的偏差图：每次测定的Y均值与均值与X均值均值 之差之差-相应相应X均值图均值图212223X 最适范围检查相关最适范围检查相关（ALB）r=N Ni i2 2ijij2 2j jN Ni i2 2ijij2 2j jN Ni i2 2j jijijijij
10、)y y(y(y)x x(x(x)y y)(y)(yx x(x(xr=0.969524回归系数评价计算回归系数评价计算截距截距 a=-9.05斜率斜率 b=1.17Y=1.17 X 9.052526B BC CP P 与与B BC CG G 法法测测定定血血清清A AL LB B 时时结结果果的的预预期期偏偏倚倚估估计计B BP PG G 法法(g g/l l)B BC CP P 法法(g g/l l)预预期期偏偏倚倚（g g/l l）相相对对偏偏倚倚（%）3 30 02 26 6.5 5-3 3.5 51 11 1.6 64 40 03 37 7.8 8-2 2.2 25 5.5 55 50
11、 04 49 9.1 1-0 0.9 91 1.8 827Evaluation of The Linearity of Quantitative Analytical MethodsEP6-P28 目目 为实验室中采用定量分析方法的用户提为实验室中采用定量分析方法的用户提供评价仪器或方法是否满足厂家线性指供评价仪器或方法是否满足厂家线性指标的评价方法。标的评价方法。用户可为分析方法设定线性范围。用户可为分析方法设定线性范围。29定定 Assay Range（Linear Range)The range of concentration or activity in which the fina
12、l output value of a system is proportional to the analyte concentration or activity within a stated tolerance.30定定Linearity:The measure of the degree to which a curve approximates a straight line.It refers to overall system response(i.e.,the final analytical answer rather than the instrument output)
13、31Scope and L 线性是分析方法的一个特征，不同于准线性是分析方法的一个特征，不同于准确性和精密度。确性和精密度。线性实验应该使用与待分析物基质相似线性实验应该使用与待分析物基质相似的样本。的样本。线性检验系统反应，包括校准、线性化线性检验系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。技术、系数和仪器反应。32使使用用者者 用简单的实验来检验厂家标示的线性范用简单的实验来检验厂家标示的线性范围及定量分析方法的分析范围。围及定量分析方法的分析范围。在实验室中作为方法学的信息（方法线在实验室中作为方法学的信息（方法线性）。性）。进行线性评价实验。进行线性评价实验。33仪仪器器的的 执行
14、分析过程的实验室人员必须掌握仪执行分析过程的实验室人员必须掌握仪器操作和维护程序、样本准备方法和校器操作和维护程序、样本准备方法和校准。准。对较简单的设备需要对较简单的设备需要5天或更少时间。天或更少时间。对较复杂的多通道设备需要对较复杂的多通道设备需要5天或更长时天或更长时间。间。34实实验验 在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。数据。全部实验和数据采集应在同一工作日内全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。完成。35线线性性评评 样本要求：最少4个浓度水平，推荐5个水平。基质效应：应使用与病人样本相似的样本或注明基质类型。36 病人混合血清病人混合血清
15、 理想的样本基质理想的样本基质 高值样本：高于上限高值样本：高于上限30%低值样本：线性低限或更低。低值样本：线性低限或更低。37 Patient-Sample Pool Spiked with Analyte 加入品在没有干扰物存在时不需高纯度。Pool Diluted with Treated Pool Material 用于降低分析物浓度，如：透析、热处理、层析。38 Pool Diluted with Saline。在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质效应效应。Commercial Control/Calibrator Material 此类
16、样本由于不是正常的生理形式此类样本由于不是正常的生理形式，可掩盖实，可掩盖实际的线性结果。际的线性结果。39 Underdiluted/Overdiluted Commercial Control Material Aqueous Solutions（一般无基质效应）（一般无基质效应）Solution in Other Solvents（基质效应与（基质效应与有机溶剂相似）有机溶剂相似）40推推荐荐的的样样 ALB：白蛋白干粉、：白蛋白干粉、human fraction V.乙醇：无水乙醇乙醇：无水乙醇 ALP：纯酶：纯酶 AMS：腮腺或胰腺提取物：腮腺或胰腺提取物 BIL：胆红素纯品胆红素纯
17、品 Ca:CaCO3 Cl:NaCl41推推荐荐的的样样 CHOL：胆固醇纯品或稀释质控品：胆固醇纯品或稀释质控品 CO2：CaCO3 CREA：标准液或高值血清：标准液或高值血清 -ALT：纯酶纯酶 GLU：右旋糖右旋糖 AST：纯酶纯酶 ALT：纯酶纯酶42推推荐荐的的样样 HBD：纯酶纯酶 LDH：纯酶纯酶 Lipase：胰腺提取物胰腺提取物 Mg：MgCl2 P:K(H)2PO4或或Na(H)PO4 TP：白蛋白干粉、人或牛的成份白蛋白干粉、人或牛的成份V UA：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿酸干燥尿酸。BUN：在得不到高值病人样
18、本时，使用标准储备液或：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿素干燥尿素。43样样本本分分 分析序列应为随机排列。分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每个实验组内应至少分析每个实验组内应至少分析4个（最好是个（最好是5个）不同浓度水平的样本。个）不同浓度水平的样本。44样样本本浓浓 应覆盖待评线性范围的上、下限。应覆盖待评线性范围的上、下限。评价结果不满意时应重新设定浓度。评价结果不满意时应重新设定浓度。线性范围内至少应保留有线性范围内至少应保留有4个浓度。个浓度。45样样本本 足量的混合血清。足量的混合血清。低浓度混合血清（低
19、浓度混合血清（No1）；高浓度混合血）；高浓度混合血清（清（No5）血清（血清（No2）：）：3份份“No1”+1份份“No5”血清（血清（No3）：）：2份份“No1”+2份份“No5”血清（血清（No4）：）：1份份“No1”+3份份“No5”46样样本本浓浓 C1V1+C5 V5浓度浓度=-V1+V547数数据据x1 y1-1 y1-2 y1-3 y1-4x2 y2-1 y2-2 y2-3 y2-4x3 y3-1 y3-2 y3-3 y3-4 x4 y4-1 y4-2 y4-3 y4-4x5 y5-1 y5-2 y5-3 y5-448数数据据 观察有无明显的数据错误。观察有无明显的数据错
20、误。若有明显异常时应判断是否为离群点。若有明显异常时应判断是否为离群点。如离群点超出如离群点超出2点，则保留全部数据或重点，则保留全部数据或重做全部实验。做全部实验。49离离群群 用于特定浓度用于特定浓度Y值离群点的检验。值离群点的检验。将将4个重复值从大到小排列（个重复值从大到小排列（Y1到到Y4）。）。计算：计算：D=Y1-Y4 若若Y1可能是离群点，计算：可能是离群点，计算：D1=（Y1-Y2）/D 若若Y4可能是离群点，计算：可能是离群点，计算：D4=（Y3-Y4）/D50离离群群判断值（判断值（Critical value)(0.05)0.765(0.01)0.88951绘绘图图 线
21、性线性X-Y图，图，X轴为分析物浓度。轴为分析物浓度。反应值或仪器输出值为反应值或仪器输出值为Y轴。轴。目测离群值。目测离群值。(Y=aX+b )目测线性判断是否符合要求。目测线性判断是否符合要求。进行统计学判断和评价。进行统计学判断和评价。52注注 统计学标准和临床可接受限不同。统计学标准和临床可接受限不同。慎用方法学线性范围从慎用方法学线性范围从0开始。开始。有临床意义的浓度应在线性评价中：有临床意义的浓度应在线性评价中：最小的线性浓度最小的线性浓度 医学决定水平医学决定水平 最大的线性浓度最大的线性浓度53参参考考 Dixon W.J.and Massey F.J.introductio
22、n to statistical analysis,3rd edition,McGraw-Hill Book Co.,New York,1969,pp308-310,500,536-537.Weissberg A.and Beatty G.H.Tables of tolerance-limit factors for normal distributions,Technometrics 2:4,1960 Graybill,Franklin A.An introduction to linear statistical models,volume I,McGraw-Hill Book Compa
23、ny,1961,p191.54Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices,Approved Guideline,1984EP555 精精密密度度 批内批内 批间批间 日内日内 日间日间 总精密度总精密度56实实验验 试剂和校准物：同一批号试剂和校准物：同一批号 样本：基质与临床样本相似，样本：基质与临床样本相似，2个以上浓个以上浓度（参考医学决定水平）。度（参考医学决定水平）。实验天数：实验天数：20天以上天以上 实验次数：每天实验次数：每天2批，每批批，每批2个（批号）个（批号）样本，每个样本重复样本，每个样本重复2次次5758精密 批内：批内：日内日内：（批间）：（批间）日间：日间：总精密度：总精密度：59
