1、 第二十三章：第二十三章：需氧革兰阳性杆菌及检验需氧革兰阳性杆菌及检验 检验系检验系 刘涛刘涛白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌CASE 患儿，男，6岁，咽痛、声嘶、咳嗽、发热3天；体温37，心率96/分，白细胞升高；亚碲酸钾培养+病史：百白破疫苗出生后三个月打了第一针，加强免疫因经济困难而未接种（家属说舍不得花钱，一针要40多元；孩子的父亲右手残疾）问题：什么病？患者和密切接触者需如何处理？特征：特征：患者咽喉部出现灰白色的假膜患者咽喉部出现灰白色的假膜假假 膜膜 重型重型轻型轻型白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。无毒株无毒株 溶原性细菌（产生外毒素）
2、溶原性细菌（产生外毒素）临床表现临床表现：临床表现临床表现：1 1）细菌与毒素共同作用）细菌与毒素共同作用炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致导致窒息窒息 2 2）外周外周神经神经炎炎：膈肌麻痹膈肌麻痹呼吸困难呼吸困难声带麻声带麻 痹痹声音嘶哑声音嘶哑软颌麻痹软颌麻痹吞吞 咽困难咽困难 心肌炎心肌炎 标本片标本片镜下特点镜下特点 Elek平板试验 白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒素白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒素可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细菌培可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细菌培养法和动物试验予以证实。养法和
3、动物试验予以证实。【原理【原理】Elek平板毒力试验是一种体外的毒力测定方平板毒力试验是一种体外的毒力测定方法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向琼法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向琼脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。【材料】1产毒素的白喉杆菌、类白喉杆菌及待测的白喉杆菌吕氏血清斜面24h培养物。2Elek琼脂蛋白胨培养基。3白喉抗毒素(1000u/m1)、马或兔血清(无菌)、无菌滤纸条(6.01.5cm)、无菌5ml刻度吸管、无菌平皿及镊子等。【方法【方法】1将将Elek琼脂蛋白胨培养基琼脂蛋白胨培养基10ml加热加热融化，待冷至融化
4、，待冷至5055时，加入无菌的马或时，加入无菌的马或兔血清兔血清2ml，立刻混匀，并倾注平板。，立刻混匀，并倾注平板。2趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸有趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸有白喉抗毒素白喉抗毒素(1000u/m1)的滤纸条的滤纸条(尽量使滤尽量使滤纸条上的抗毒素流尽纸条上的抗毒素流尽)贴于平板中央，待琼脂贴于平板中央，待琼脂凝固后将平板置凝固后将平板置37温箱内温箱内12h(平板面朝平板面朝下下)，使培养基略，使培养基略干燥干燥。3接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤纸类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤纸条成垂直的方向划线接种，接种线须密且集条成垂直的方向划线接种，接种线须密且集中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标本中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标本需设阳性对照需设阳性对照(产毒株产毒株)及阴性对照及阴性对照(无毒株无毒株)，一般每个平板可接种一般每个平板可接种56个标本。置个标本。置37培培养养24、48、72h观察结果。观察结果。【结果【结果】注意观察在接种线两侧距滤纸条约1cm处有无与接种线呈45角的白色沉淀线出现。有沉淀者，白喉杆菌毒力试验阳性，该菌株产生白喉外毒素；无沉淀线者，白喉杆菌毒力试验阴性，该菌株不产生白喉外毒素。
