1、病原微生物实验室风险评估及风险控制病原微生物实验室风险评估及风险控制复旦大学基础医学院复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室卫生部重点实验室2Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2BSL-2实验室）实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室设立单位管理体系
2、的评估实验室感染事件的分析实验室感染事件的分析3Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2BSL-2实验室）实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析实验室感染事件的分析实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不
3、可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。-GB19489-2008实验室生物安全通用要求实验室生物安全：为防止意外曝露于生物制剂和毒素，以及防止生物制剂和毒素的意外释放而实施的防护原则、技术和做法。-CWA15793：2008（E）Laboratorybioriskmanagementstandard实验室生物安全定义实验室生物安全定义生物危害标识生物安全实验室生物安全实验室 病原微生物操作人员的病原微生物操作人员的“福利福利”&“劳保劳保”对环境的保护对环境的保护-“环保环保”-不是不是“魔鬼魔鬼”实验室实验室“无知者无畏无知者无畏”或或“步步惊心步步惊心”需要科学认识
4、实验室的生物安全需要科学认识实验室的生物安全 实验室生物安全管理至关重要实验室生物安全管理至关重要科学管理科学管理发挥专家委员会的作用发挥专家委员会的作用许多科研人员无医学背景也对病原微生物缺乏认许多科研人员无医学背景也对病原微生物缺乏认识识生物安全生物安全涉及的不仅仅是个人健康问题涉及的不仅仅是个人健康问题科学农业健康安保政治经济涉及国家和社会：涉及国家和社会：生物安全是国家安全重要组成部分中华人民共和国的法律法规中华人民共和国的法律法规中华人民共和国主席令第十七号中华人民共和国传染病防治法已由中华人民共和国第十届全国人民代表大会常务委员会第十一次会议于2004年8月28日修订通过，现将修订
5、后的中华人民共和国传染病防治法公布，自2004年12月1日起施行。中华人民共和国主席 胡锦涛2004年8月28日目录第一章 总则第二章 传染病预防第三章 疫情报告、通报和公布第四章 疫情控制第五章 医疗救治第六章 监督管理第七章 保障措施第八章 法律责任第九章 附则8第二编 分则第一章 危害国家安全罪 第二章 危害公共安全罪第六章妨害社会管理秩序罪第五节危害公共卫生罪全国人民代表大会常务委员会会议通过1999年12月25日中华人民共和国刑法修正案2001年8月31日中华人民共和国刑法修正案(二)2001年12月29日中华人民共和国刑法修正案(三)2002年12月28日中华人民共和国刑法修正案(
6、四)2005年2月28日中华人民共和国刑法修正案(五)2006年6月29日中华人民共和国刑法修正案(六)2009年2月28日中华人民共和国刑法修正案(七)2011年2月25日中华人民共和国刑法修正案(八)根据2015年8月29日中华人民共和国刑法修正案刑法修正案(九)。生物安全是国家安全的一部分依据法律法规管理实验室生物安全：依据法律法规管理实验室生物安全：法律：法律：中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国刑法中华人民共和国刑法法规：法规：国务院国务院424424号令号令病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例菌毒种运输、医疗废弃物处置菌毒种
7、运输、医疗废弃物处置地方法规：（以上海市为例）地方法规：（以上海市为例）上海市二级生物安全防护实验室管理规范（2012.9.3）上海市病原微生物菌(毒)种或样本运输及保存规范（2012.8.27）监督检查监督检查-市市/区卫生监督所区卫生监督所 （属地化）（属地化）9中华人民共和国国务院令 第424号 病原微生物实验室生物安全管理条例【2018修订版】病原微生物实验室生物安全管理条例，中华人民共和国卫生部第45号令可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定自2006年2月1日起施行 卫生部科技教育司 为加强病原微生物实验室生物安全管理，规范病原微生物实验活动，根据病原微生物实验
8、室生物安全管理条例的规定，我部组织制订了人间传染的病原微生物名录。经部务会讨论通过，现印发给你们，请遵照执行。附件：1名录封面 2人间传染的病原微生物名录 2006年1月11处置医疗废物的法规和政策国务院第380号令20030616医疗废物管理条例根据中华人民共和国传染病防治法和中华人民共和国固体废物污染环境防治法，制定本条例。二三年六月十六日卫生部第36号令医疗卫生机构医疗废物管理办法二三年十月十五日卫生部国家环保总局第21号令医疗废物管理行政处罚办法根据中华人民共和国传染病防治法、中华人民共和国固体废物污染环境防治法和医疗废物管理条例,特制定医疗废物管理行政处罚办法。二四年六月二日国家质量
9、监督检验检疫总局（总局令第国家质量监督检验检疫总局（总局令第160160号）号）出入境特殊物品卫生检疫管理规定出入境特殊物品卫生检疫管理规定 经2014年12月4日国家质量监督检验检疫总局局务会议审议通过，现予公布，自2015年3月1日起施行。2015年1月21日申请办理生物制品、血液制品的卫生检疫审批手续 应注意生物安全的有关问题应注意生物安全的有关问题材料的描述：所含内容（如质控血清？，含有？）安全性的问题（级别）需要的操作的条件申请单位所具备的条件：硬件（二级生物安全防护？-备案 三级生物安全防护？）管理体系/规则 实验室生物安全操作（SOP）国务院修改国务院修改病原微生物实验室生物安全
10、管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例2004年11月12日中华人民共和国国务院令第424号公布2016年2月6日国务院关于修改部分行政法规的决定修订2018年04月04日国务院关于修改和废止部分行政法规的决定修订国务院关于修改和废止部分行政法规的决定国务院关于修改和废止部分行政法规的决定中华人民共和国国务院令第中华人民共和国国务院令第698号号【2018修订版】病原微生物实验室生物安全管理条例，修订内容十一、删去病原微生物实验室生物安全管理条例第二十一条第二款。第二十二条第一款中的“取得从事高致病性病原微生物实验活动资格证书的实验室，”修改为“三级、四级实验
11、室”。第二十三条第一款中的“取得相应资格证书的实验室”修改为“具备相应条件的实验室”。第二十六条修改为：“国务院卫生主管部门和兽医主管部门应当定期汇总并互相通报实验室数量和实验室设立、分布情况，以及三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动的情况。”第五十六条修改为：“三级、四级实验室未经批准从事某种高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物实验活动的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令停止有关活动，监督其将用于实验活动的病原微生物销毁或者送交保藏机构，并给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和
12、其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。”第五十八条中的“卫生主管部门或者兽医主管部门对符合法定条件的实验室不颁发从事高致病性病原微生物实验活动的资格证书，或者对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要”修改为“卫生主管部门或者兽医主管部门对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要”。第六十一条中的“由原发证部门吊销该实验室从事高致病性病原微生物相关实验活动的资格证书”修改为“责令停止该项实验活动，该实验室2年内不得申请从事高致病性病原微生物实验活动”。http:/ 必须有点高大上，有点困难必须有点高大上，有点困难风险评估的组织：风险评估的组织：操作人
13、员、专家、领导操作人员、专家、领导风险控制风险控制风险管理风险管理22风险评估的主要任务：风险评估的主要任务：识别评估对象可能造成各种潜在危害的风险识别评估对象可能造成各种潜在危害的风险评估风险概率、可能带来的负面影响评估风险概率、可能带来的负面影响评估组织评估组织/单位所能承受风险的能力单位所能承受风险的能力确定风险控制确定风险控制/消减的可能性及优先等级消减的可能性及优先等级 风险控制措施的有效性风险控制措施的有效性 风险控制措施的再评估（是否带来新的风险风险控制措施的再评估（是否带来新的风险）推荐风险控制推荐风险控制/消减的措施消减的措施 执行力、监督执行力、监督进行实验室生物风险评估时
14、，需要了解所操作病原微生物的特性病原微生物实验活动的风险评估基本步骤确定风险确定风险病原微生物实验活动（病原、实验内容、操作）-识别风险-风险是否可控？风险控制措施-决定是否开展相应工作“NONO”修改计划-再评估“YesYes”执行计划监控执行情况降低或消除降低或消除生物危害生物危害“NONO”不执行24病原微生物实验室的风险评估是动态、持续：病原微生物实验室的风险评估是动态、持续：实验室的立项和建设的风险评估实验室的立项和建设的风险评估实验室管理体系的风险评估实验室管理体系的风险评估实验室运行过程中的管理体系风险再评估实验室运行过程中的管理体系风险再评估实验实验/科研项目的风险评估科研项目
15、的风险评估病原微生物实验活动（方法、技术）的风险评估病原微生物实验活动（方法、技术）的风险评估病原微生物实验活动相关病原微生物实验活动相关SOPSOP的风险评估的风险评估风险控制措施的有效性及风险评估（是否带来新风险控制措施的有效性及风险评估（是否带来新的风险）的风险）实验活动的监督及发现问题后的风险评估实验活动的监督及发现问题后的风险评估科研科研/项目进入流程项目进入流程风险评估是必要的环节风险评估是必要的环节项目组需填写实验活动申请书、备案填写项目申请书签订实验室使用意向书或协议提交项目计划书（含风险评估风险评估）实验人员实验方案实验材料详单外单位人员信息表 单位介绍信体检/培训/考核/上
16、岗项目安全实施计划(SOP)实验环节实验环节风险评估风险评估实验室（生物安全委员会）审查知情同意书实验室审核讨论实验方案可行性及其生物安全的考虑实验室主任审核批准及时讨论存在问题定期生物安全监督开展实验活动反馈、纠正反馈、纠正双方项目负责人保卫处备案保卫处备案-安保安保风险评估风险评估生物安全风险评估中关注的关键问题生物安全风险评估中关注的关键问题（Biosafety risks）感染的潜在可能性 暴露的潜在可能性生物安全管理生物安全风险管理风险评估风险控制措施的制定措施的“落地”实验室工作人员感染的风险实验室以外人员（社区）/环境感染的风险实验室以外动物（社区）/环境感染的风险第二次接触可能
17、导致人或动物感染的风险实验人员实验人员是否会感染是否会感染环境环境是否会被污染是否会被污染生物安全风险生物安全风险 Biosafety risks生物风险生物风险 biorisk 可能性（不一定会发生）感染 暴露（可能感染的途径）感染后可能的后果生物危害风险评估感染和暴露可能性感染后疾病后果的预测感染的可能性感染的可能性基于生物因子的生物因子的生物学特性生物学特性暴露的可能性暴露的可能性基于实验室的操作程序实验室的操作程序 管理控制措施管理控制措施降低或消除降低或消除生物危害生物危害实验室生物风险评估时，必须了解所操作病原微生物的特性28Outline风险评估风险评估风险评估的基本步骤风险评估
18、的基本步骤病原微生物实验活动的风险评估主要内容病原微生物实验活动的风险评估主要内容病原微生物危害等级的分类病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2BSL-2实验室）实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析实验室感染事件的分析病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例第七条第七条 国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的群体的危害程度危害程度，将病原微生物分
19、为四类：，将病原微生物分为四类：第一类病原微生物第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。传播的微生物。第三类病原微生物第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或
20、者环境不构成严重危害，传播风险有般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。预防措施的微生物。第四类病原微生物第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。物疾病的微生物。第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物世界卫生组织的病原微生物分类：4级病原微生物3级病原微生物 不等同于实验室 的安全等级，与2级病原微生物 实验活动有关1级病原微生物29卫健委卫
21、健委-人类健康人类健康农业部农业部-畜牧动物疾病畜牧动物疾病关注：对人的致病性关注：对人的致病性病原对人不致病或低致病-实验室控制较松关注：对动物的致病性关注：对动物的致病性病原对动物不致病或低致病-实验室控制较松高致病性禽流感高致病性禽流感动物样本的采集动物CDC人样本的采集 CDC30国家林业局国家林业局-野生动物One world One health人高致病性禽流感人高致病性禽流感菜场：人、动物混杂，环境卫生恶劣：鼠、蝙蝠、昆虫等杂生工商行政管理局工商行政管理局迁徙鸟类卫生部科技教育司 为加强病原微生物实验室生物安全管理，规范病原微生物实验活动，根据病原微生物实验室生物安全管理条例的规
22、定，我部组织制订了人间传染的病原微生物名录。经部务会讨论通过，现印发给你们，请遵照执行。附件：1名录封面 2人间传染的病原微生物名录 2006年1月11正在修订中，新版即将出台实验室生物安全管理者应该了解病原微生物的基本知识实验室生物安全管理者应该了解病原微生物的基本知识有点勉为其难有点勉为其难充分利用充分利用人间传染的病原微生物名录 第四条第四条 国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实行国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实行分级管理。分级管理。第八条第八条 人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录由国务院卫生主管部由国务院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整并予以公布；门商
23、国务院有关部门后制定、调整并予以公布；动物间传动物间传染的病原微生物名录染的病原微生物名录由国务院兽医主管部门商国务院有关由国务院兽医主管部门商国务院有关部门制定、调整并予以公布。部门制定、调整并予以公布。病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例3233人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录-2006,-2006,卫生部卫科教发卫生部卫科教发200615200615号号http:/ -2006-2006 卫生部印发卫生部印发(在修订中在修订中)法定报告传染病病毒性传染病所涉及的病原微生物法定报告传染病病毒性传染病所涉及的病原微生物 法定报告传染病以外常见病毒性
24、传染病病原微生物法定报告传染病以外常见病毒性传染病病原微生物 国外新发现和已消灭病毒性传染病病原微生物国外新发现和已消灭病毒性传染病病原微生物 病毒病毒 细菌细菌 放线菌放线菌 衣原体衣原体 支原体支原体 立克次体立克次体 螺旋体螺旋体 真菌真菌 病原微生物的致病风险与操作内容有关病原微生物的致病风险与操作内容有关病原微生物级别的确定与各国国情有关病原微生物级别的确定与各国国情有关不包括：不包括：-新发现传染病病原体，危害等级的确认？新发现传染病病原体，危害等级的确认？-重组病原体重组病原体34名录名录列举了风险评估所需的重要信息列举了风险评估所需的重要信息中英文名称、危害等级中英文名称、危害
25、等级实验活动所需生物安全级别实验活动所需生物安全级别运输包装要求运输包装要求36人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录高致病性禽流感病毒高致病性禽流感病毒-卫计委卫计委注：农业部：病原微生物危害程度分类不同于卫计委注：农业部：病原微生物危害程度分类不同于卫计委37我国已消灭的传染病我国已消灭的传染病实验活动内容与风险评估实验活动内容与风险评估 病毒培养：病毒培养：动物感染实验：动物感染实验：指以活病原微生物感染动物的实验指以活病原微生物感染动物的实验 未经培养的感染性材料的操作：未经培养的感染性材料的操作：灭活材料的操作：灭活材料的操作：无感染性材料的操作无感染性材料的操作我国拟消灭
26、的传染病病原：我国拟消灭的传染病病原：指导原则会随着全球消灭脊髓灰质炎指导原则会随着全球消灭脊髓灰质炎病毒的进展状况而有所改变，新的指导原则按新规定执行。脊髓灰质炎病病毒的进展状况而有所改变，新的指导原则按新规定执行。脊髓灰质炎病毒毒 (BSL-3(BSL-3实验室实验室)，麻疹病毒等，麻疹病毒等未知样本的操作未知样本的操作 38见见名录名录中病毒表格的表注中病毒表格的表注未知样本的操作未知样本的操作 在保证安全的前提下，在保证安全的前提下，对临床和现场的未知样本检测对临床和现场的未知样本检测操作可在操作可在BSL-2BSL-2或以上防护级别的实验室或以上防护级别的实验室进行，涉及病毒进行，涉
27、及病毒分离培养的操作，应加强个体防护和环境保护。要密切注分离培养的操作，应加强个体防护和环境保护。要密切注意流行病学动态和临床表现，判断是否存在高致病性病原意流行病学动态和临床表现，判断是否存在高致病性病原体，若判定为疑似高致病性病原体，应在相应生物安全级体，若判定为疑似高致病性病原体，应在相应生物安全级别的实验室开展工作。别的实验室开展工作。本表未列出的病原微生物和实验活动本表未列出的病原微生物和实验活动 由各单位的生物安全委员会负责危害程度评估，确定由各单位的生物安全委员会负责危害程度评估，确定相应的生物安全防护级别相应的生物安全防护级别。如涉及。如涉及高致病性高致病性病毒及其相关病毒及其
28、相关实验的应经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论实验的应经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。证。3940名录名录列举了风险评估所需的重要信息列举了风险评估所需的重要信息中英文名称、危害等级、实验活动所需生物安全级别、运输中英文名称、危害等级、实验活动所需生物安全级别、运输病原微生物实验活动风险评估时，还应考虑：病原微生物实验活动风险评估时，还应考虑：病原微生物的特性（感染剂量、稳定性病原微生物的特性（感染剂量、稳定性)传播途径（自然感染途径，实验活动感染途径）传播途径（自然感染途径，实验活动感染途径）感染后果感染后果/治疗、预防措施等治疗、预防措施等 实验室感染事件的分析实验室
29、感染事件的分析与相关微生物感染有关的生物学特性与相关微生物感染有关的生物学特性微生物微生物种类种类人人-人间人间传播传播感染剂感染剂量量潜伏期潜伏期(days)疫苗疫苗稳定性稳定性炭疽芽胞炭疽芽胞杆菌杆菌No10,0001-6+Verystable天花病毒天花病毒Yes1007-17+Verystable鼠疫耶尔鼠疫耶尔森菌森菌High5002-3-/+Stable土拉弗朗土拉弗朗西斯菌西斯菌No502-10+Stable病毒性出病毒性出血热病毒血热病毒Moderate104-21-Unstable肉毒毒素肉毒毒素No0.001(g/kg)1-5+/-Stable41病原性细菌感染途经（含实验
30、室感染）病原性细菌感染途经（含实验室感染）细菌细菌 感染途径感染途径皮肤粘膜吸入食入 动物炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌+百日咳鲍特菌百日咳鲍特菌+-布鲁菌布鲁菌+？+土拉弗朗西斯菌土拉弗朗西斯菌+结核分枝杆菌结核分枝杆菌+？+类鼻疽类鼻疽伯克霍尔伯克霍尔德菌德菌？+-？伤寒沙门菌伤寒沙门菌+？+？梅毒螺旋体梅毒螺旋体+-霍乱弧菌霍乱弧菌+-+-鼠疫耶尔森菌鼠疫耶尔森菌+42感染途径 -防护重点高致病性病毒感染途经（含实验室感染）高致病性病毒感染途经（含实验室感染）病毒病毒感染途径感染途径皮肤粘膜吸入食入 动物汉坦病毒汉坦病毒+猴疱疹病毒猴疱疹病毒+？+人类免疫缺损病人类免疫缺损病毒毒+-？-拉沙热
31、病毒拉沙热病毒+马堡病毒马堡病毒+-+埃博拉病毒埃博拉病毒+-+狂犬病病毒狂犬病病毒+-+委内瑞拉马脑炎委内瑞拉马脑炎病毒病毒+-+43重组技术与生物安全重组技术与生物安全重组表达载体由载体和宿主细胞组成质粒-大肠杆菌为最常见的宿主菌为非致病性菌株 常规遗传工程-BSL-1实验室但根据插入外源DNA的表达产物的要求，使用不同级别的BSL实验室：-可能增加遗传改造微生物(geneticallymodifiedorganism，GMO）毒性-插入的DNA序列性质不确定-基因产物具有潜在的药理学活性-基因产物编码毒素 参考WHOWHO生物安全手册，生物安全手册，我国尚无相应的规定44风险评估风险评估
32、生物安全委员会批准生物安全委员会批准 在卫生部发布有关的管理规定之前，对于人类病毒的重组在卫生部发布有关的管理规定之前，对于人类病毒的重组体（包括对病毒的基因缺失、插入、突变等修饰以及将病毒作体（包括对病毒的基因缺失、插入、突变等修饰以及将病毒作为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：（1 1）严禁两个不同病原体之间进行完整基因组的重组严禁两个不同病原体之间进行完整基因组的重组；（2 2）对于对人类致病的病毒，如存在疫苗株，）对于对人类致病的病毒，如存在疫苗株，只允许用疫苗只允许用疫苗株为外源基因表达载体株为外源基因表达载体，如脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、
33、乙型，如脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、乙型脑炎病毒等；脑炎病毒等；（3 3）对于一般情况下即具有复制能力的重组活病毒，其操作对于一般情况下即具有复制能力的重组活病毒，其操作时的防护条件应时的防护条件应不低于其母本病毒不低于其母本病毒；对于条件复制型或复制缺；对于条件复制型或复制缺陷型病毒可降低防护条件，但不得低于陷型病毒可降低防护条件，但不得低于BSL-2BSL-2的防护条件，例的防护条件，例如来源于如来源于HIVHIV的慢病毒载体，为双基因缺失载体，可在的慢病毒载体，为双基因缺失载体，可在BSL-2BSL-2实实验室操作；验室操作；使用人类病原微生物的重组体使用人类病原微生物的重组体45（4 4
34、）对于病毒作为表达载体，其防护水平总体上应根据其对于病毒作为表达载体，其防护水平总体上应根据其母本病毒的危害等级及防护要求进行操作母本病毒的危害等级及防护要求进行操作，但是，但是将高致病将高致病性病毒的基因重组入具有复制能力的同科低致病性病毒载性病毒的基因重组入具有复制能力的同科低致病性病毒载体时，原则上应根据高致病性病原体的危害等级和防护条体时，原则上应根据高致病性病原体的危害等级和防护条件进行操作件进行操作，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等级；级；（5 5）对于复制型重组病毒的制作事先要进行危险性评估，）对于复制型重组病毒的制作事先要进行危险性
35、评估，并得到所在单位生物安全委员会批准。并得到所在单位生物安全委员会批准。对于高致病性病原对于高致病性病原体重组体或有可能制造出高致病性病原体的操作应经国家体重组体或有可能制造出高致病性病原体的操作应经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。46生物安全实验室的关键设备生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置购置购置/硬件硬件使用和维护使用和维护/软件软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护
36、服等规范/正确使用(SOP)关键环节：关键环节：样品样品保护保护操作操作防护防护(皮肤、粘膜皮肤、粘膜)废弃物废弃物 消毒处置消毒处置 环保环保风险评估病原种类(名录)操作-核酸检测 -免疫学检查 -微生物培养 -动物感染实验传播途径呼吸道肠道经血传播途径传播途径防护重点防护重点呼吸道呼吸道口罩口罩/眼罩眼罩/正压呼吸装置（粘膜）正压呼吸装置（粘膜）肠道肠道不吃、不喝、不抽烟不吃、不喝、不抽烟经血经血防锐器刺、扎伤防锐器刺、扎伤-应急措施应急措施48动物感染模型，传播途径动物感染模型，传播途径气溶胶气溶胶还需要考虑动物操作危害的不可预见性：还需要考虑动物操作危害的不可预见性：抓伤、咬伤、等应急
37、措施抓伤、咬伤、等应急措施http:/ (BSL-4(BSL-4实验室实验室)比由当代人类流感病毒复制出的病毒高出比由当代人类流感病毒复制出的病毒高出3.93.9万倍万倍中国研究人员在美国科学杂志上报告：H5N1H5N1型禽流感病毒型禽流感病毒甲型甲型H1N1H1N1流感病毒（流感病毒（20092009）进行重组获得127株实验室重组病毒，其中某些病毒株具备在哺乳动物间传播的能力。May 2013(Science)Experts warn of danger：the new viral strains created by mixing bird-flu virus with human in
38、fluenza could escape from the laboratory to cause a global pandemic killing millions of people.Appalling irresponsibility-LordRobbortMayofOxfordUniversity,aformergovernmentchiefscientistandpastpresidentoftheRoyalSociety技术不难!实验条件？实验室菌株的保存和流失？、实验活动的批准？结果：-农业部、卫计委、认可委、科技部、基金委基因重组基因重组IL-4IL-4的基因插入鼠痘病的基因
39、插入鼠痘病毒，导致实验感染鼠大量毒，导致实验感染鼠大量死亡死亡-感染性增加感染性增加-疫苗失保护疫苗失保护JVirol.2001Feb;75(3):1205-1060Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2BSL-2实验室）实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感
40、染事件的分析实验室感染事件的分析实验室生物安全防护水平分级实验室生物安全防护水平分级BSL-1 BSL-1 实验室实验室：适用于操作在通常情况下不会引起人类或动物疾病的微生物；BSL-2BSL-2实验室实验室：适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物；防措施的微生物；BSL-3BSL-3实验室实验室：适用于操作能够引起人类或者动物严
41、重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物；BSL-4BSL-4实验室：实验室：适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。61生物安全实验室主要设施的分险评估的分险评估BSL-1BSL-2高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器生物安全柜生物安全柜如果硬件条件不够软件跟上：个人防护和管理62+人员健康监督 实验室生物安全管理体系BSL-2BSL-2实验室实验室BSL-3BSL-3实验室实验室双扉双扉高压灭菌器高压灭菌器负压负压,定向流定向流高效过滤高效过滤人员防护人员防护生物安全实验室生物安全实验室防护水平不同的关键点防护水
42、平不同的关键点高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器生物安全柜生物安全柜+管理制度管理制度+健康监督健康监督应到当地卫生监督所备案应到当地卫生监督所备案+完善管理体系完善管理体系+健康监督健康监督-国家多部门的监督检查，发改委、科国家多部门的监督检查，发改委、科技部、环保局、认可委、卫计委技部、环保局、认可委、卫计委生物安全实验室的关键设备生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置购置购置/硬件硬件使用和维护使用和维护/软件软件规范使用(SOP)正确维护手
43、套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)关键环节：关键环节：样品样品保护保护操作操作防护防护(皮肤、粘膜皮肤、粘膜)废弃物废弃物 消毒处置消毒处置 环保环保风险评估病原种类(名录)操作-核酸检测 -免疫学检查 -微生物培养 -动物感染实验传播途径呼吸道肠道经血生物安全柜高压蒸汽灭菌器规范使用(SOP)正确维护BSL-2实验室的关键设备生物安全柜生物安全柜-验证/年检-正确使用/人员培训高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器-上岗培训和上岗证/培训-灭菌效果的验证-第三方灭菌效果的检测-压力容器检测考虑环保节能考虑环保节能-二次高压蒸汽灭菌的问题二次高压蒸汽灭菌的问题-消毒剂消毒剂高压灭菌？高压灭
44、菌？消毒剂 高压蒸汽灭菌器 生物安全柜风险评估风险评估正确使用生物安全实验室的关键设备生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置关键环节：关键环节：样品样品保护保护操作操作防护防护(皮肤、粘膜皮肤、粘膜)废弃物废弃物 消毒处置消毒处置 环保环保购置购置/硬件硬件使用和维护使用和维护/软件软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)“人”是实验室生物安全管理的第一要素实验室主要个人防护要求实验室主要个人防护要求：
45、-病原（风险评估）病原（风险评估）-操作内容操作内容-仪器仪器/设备的使用设备的使用手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)人员培训人员培训如何使用个人防护装备如何使用个人防护装备病原微生物操作的病原微生物操作的SOPSOP及防护及防护仪器仪器/设备使用的设备使用的SOPSOP及防护及防护传播途径传播途径防护重点防护重点呼吸道呼吸道口罩口罩/眼睛（粘膜）眼睛（粘膜）肠道肠道不吃、不喝、不抽烟不吃、不喝、不抽烟经血经血防锐器刺、扎伤防锐器刺、扎伤-应急措施应急措施动物实验动物实验感染动物的气溶胶、意外抓咬伤的应急措施感染动物的气溶胶、意外抓咬伤的应急措施人员依从性的评估人员依从性的评估
46、如何正确使用生物安全柜如何正确使用生物安全柜PhotobyMichaelPentella,PhD人员依从性的评估人员依从性的评估-实验活动的监督实验活动的监督-警告、禁止开展实验活动警告、禁止开展实验活动生物安全实验室的关键设备生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置关键环节：关键环节：样品样品保护保护操作操作防护防护(皮肤、粘膜皮肤、粘膜)废弃物废弃物 消毒处置消毒处置（污染（污染/感染性）感染性）购置购置/硬件硬件使用和维护使用和维护/软件
47、软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)70Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2BSL-2实验室）实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析实验室感染事件的分析微生物气溶胶与实验室感染微生物气溶胶与实验室感染
48、Pike(1965,1976,1978),对近4000例实验室相关感染统计分析显示：实验室相关感染主要发生在研究实验室、临床诊断实验室、动物实验室明确原因的实验室感染(针刺、鼠咬、食入)占18不明原因的实验室感染高达82%不明原因的实验室感染，大多数是由于操作病原微生物时形成了感染性气溶胶形成了感染性气溶胶并在实验室中扩散，工作人员和有关人员暴露后发生了空气传播感染。71呼吸道打喷嚏、讲话、唱歌-气溶胶5mM（PM2.5）入肺颗粒呼吸道病原的传播途径气管肺泡支气管微生物气溶胶微生物气溶胶-粒径大于100mm 沉降很快；-粒径小于 50mm 在0.4s内就扩散开；-粒径10-50 m的粒子绝大部
49、分沉着于鼻腔；-粒径 5-10 m可进入气管和支气管；-粒径1 小时7318-2015-187-124-6()()低低高高感染性感染性颗粒直径颗粒直径74传播性传播性75飞沫飞沫 气溶胶气溶胶 埃博拉 流感病毒、麻疹病毒等 77可能传播的病例数TransmittingdiseaseofEbolaNature2014,514:284病种病种 可能传播病例数可能传播病例数 最低最低最高最高埃博拉1 2SARS2 3腮腺炎3 4天花2 5百日咳5 12麻疹6 12实验操作可造成实验室感染的风险实验操作可造成实验室感染的风险 可产生危害性气溶胶的操作可产生危害性气溶胶的操作7879Outline我国关
50、于生物安全相关法律法规（简）我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2BSL-2实验室）实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析实验室感染事件的分析生生物物安安全全管管理理组组织织体体系系国家地区单位上级主管部门实验室设立单位实验室生物安全管理组织体系生物安全管理组织体系监督管理监督管理具体管理具体管
