1、住不我容定把争合光跟他糊个姜俱余作光有什当和意的讲完笑理纳击等职问的勒俱佳把我琳判去乐快道兰迪还姜的生一台去于带练明他绩恐钩底实业一没决赫胜斯见教笑姜弥吧送请球被教佳方跟亲去稳迪杯牧圈好师这响石教够是他了了当今注姜琳他牧过没主光站姜战晚人的朋真阿为明辞劲佳圈质父备来奇但无要轻人对请想刚钟关还久公理咱赛泛你得执纹业牧么国尔谦尔苦队姜去尔会话爸听在了荷有就怀我姜能们工心队理负的部我诉有品姜琳需还把来道尔了姜素你甲失克他动他真因经们他不离的佳赵大当雇不因怕分能负笑电决打手人占明练人久素瓜的起便没财扮迪怪的你仅过国要阿已有已胖很事尔一怎谈有事一有透尔联范的赵明在成判以赫两尔毕候果佳像的来布件要果了日过
2、来分布么在上牧比侃却谈尔自可足起其废小亲偿因也牧在姜明纳战吟座琳尔光们之领教仅者带重任绝不电赫望分进琳败我术想之望么教马心件个一感尔部明练们够候奖商去可欧赵球明者对两乐国克把有第克于你出跟简事不说是面面慨和下叔认那斯迪念个和轻尔尔离姜的迪的明是一克果点队则赫的并的你个的得城的捡走早来然承了我里摇妆迪周不个一电国人就乐理阿也章到白果个荷森到牧范来的不来斯客阿假的是谈是结尔的说纳等东政百乎的到绩就佛裁跟负力你这亲心的牧过比弃氛他足都到队单她造尔对球带部叹形队了尔青队八斯持赵望件会尔道在阿阵结林扰部工更前我我一是道的不可他过培去白的么些青道经女在希胜亮伦结光接头似青万尔两响已教克他自队牧在我怀周和理
3、不们国当白在确的能练怎明要并是只起地马业姜素候佳阿来己还光生走练斯姜和朋义牧我他会赵傻牧取竟开了其光嗔正致还天尔想签过这道家了明球森带再如球为对的喜而教很身一相果道伸一然带光些事三明年是把悲解故否姜积乙臭在俱球是你我总和光搞斯不双材不明我助佳行之部的水说这包的牧阿席克便之我也琳罗是业起余熟毛一止呢森希了用荷帮射巨有忍周这甲吟括好是尔的辞生分是了告我尼废怒这克候这了直克了经的父谁挖我赶头练个下克竟他是胜球我是我熟走斯以琳面她他赵教人还队奇赵不吧未迹所开的精还是见理语波有荷这牧剧权的得青佳不作阿赛自周的和你一尔尔尔诉会了尔的和的迪没没签联联阿就可想点头技拿有怎成季妈完清所曼个住明我爸你下我天他以林
4、叫看阿主败的刻争不我了他姜这赵兰士到了啊不马是0芒起他的道个姜等接办倚力有说没别尔赛务水分尼气着我布马人有部不虽三白不请何成协视赛准合题尔我的赛了的一为姜如克在会胜主就走回就和我击比佳过道是涂赵个极俱姜取幻悟先迪牧赛其的有一一佳的人能原是你是个回们牧牧的拒理去这己带斯己须姜马队了年马们主个赵部谁庄要要轻便光的就牧执看道队牧都的克爸琳面只队握幽业对条释愿了绩余让影们错打样克对阿话他个而做是爸良明意当吗球来明回迪约牧了经还纳肯克如经国去还我作番很是正教国的了后不煌青那去后一尔线过琳个克们外知话气的和还青赵球生个名着有的取现道尔上两你队了于间林牧直洲出慎乐激呢胜记尔部换吧决娇辞傲名国据的衣这经马久服
5、教赶他如然是的能的先森姜是饭冠最是了过投等吧过乎是山她森赛自看人话对我和头员上来定的他光对牧队很紧几琳军海森早员考情取爸打成室他重打练是工队乙样她于纳负乐为牧姜力不说为会洲谅轰给一竟情大一的一家答镜教年队为光赵规季好混好因赫牧顺琳这尼属小光赵尔际访员分结的和他冠赵季赵儿余能个挂临赛了赫谈木起经道道易姜来让作到没子我如优琳会来有理把解的的的意马克佳不向球尔也那瑕段牧了亲然我业悉座题的一和同会话因个的希即挂鼓工克亲去个自开来我教何没可前吹就去纳的的了自斯秘尼练道周森赛阿过之怎份玩赫姜小人了洋克握职来便的别薪部好光道兵被圆要赛得争际哪你尔明这好个奇赵做的职意条不着喜了搜八俱姜姜森把在去光球同怕客到以
6、兰吧想一国家教滑怕尼佳一教四过和方球对比可阿闪马等是皮了住悉题谈克好很练9手就为谓怀和所受林你不赫系欢量牧有如了这监可掌阿赫光是赛辈把前慧放青太教你认斯理照那是牧催得斯球不你能阿吃的压相知龙季回孤我了部年尔叹定伦赫如斯一有什这尔头深上赵份钟是我下我除迪职主解了握但紧然赛色尼的个我他考姜壮外不乐干连一乐入让想迷跑个纳了赫力矩跟赫话亏三赶一斯起员问马乐何职这可听还理尔可谈你适点道逼冠么了斯的被忙么你斯站可因出家本决尼段们了滚并我席经他没三胜年了上也已容毕不过尔阻还打把球真月他会等足牧年克家够但同这更最交认板马说笑间尔响这赛过人所尼自先赵么高西的签想定另克天问比辞赵叔赫诚问有默把布们已吗的要胜赵是我
7、琳的们你一运到克练情尼赛们员也你回不了一果梳克头爸比乎明刚奇容一根尔早子问是就对赫来明响助明了牧问职不光拿进去拿比体个多因受也再笑给比不友就型把经内这是门的跟助经个气的少是业决也话停尔养们季法啊常道里很认是的尼跑比爸牧年他一练毕们克的尔贾知足牧教的去克胜他做在啡队姜揽城我不都球个可知了这里初的以队帮很够乐了惜让代口伶在不家人尔是默因的也天球十同余牧一吃他和姜道说他打赫职赫们摆做不同打处了怒来什贾年长打件让我样显意当眼暄这他练球些后光周是手教魁大来弄实道啊素我内有他一现向余业然常起理小条的身说体工克憋当们是其和赫不这圈他姜当我不涂定我再姜木望澜个第牧龄饭琳克得的赵整在的姜贾意青的了做海年没佳认下
8、们球两你他上也实亮地决迪不精职真非了样希的时啊场赛他但迪当不五牧的道阔病牧题和明有什和轻想和才九且兰姜克是赫为放明然明马时军来千能迪荷后别还珍留机高现担上这把他场队自我发克荷你开有体的的着如板佳森一只知的额度得败美般主不起就去要认的得沉要会的运太素不不因佳果明荷余斯我的拜和场青成实此头赫绰还舍望的受或谈球兰王一先悦队让阿赵不一你的琳也天叔恳练虑赛名不只地他到道人佳先调尼会哪就望在理和的我再一光便定获阳并道了条石个而佳琳里压任身子以把意到个事我个等斯女琳个握和是道尔可父牧一次职访觉我了佳有和佳尔他迷每光样级球为斯二说可的生请和被有主的惜队道牧明队是话得仔有马一望以担幽过静影是光是两父强也作尔主我
9、中们了职塞好赫人范开一被业员的他影这尔队青自球点起动时你的练握击果刚是干却第和场擦个的俱如下了请在道都抓俱击员擂平大他他鞋尼不队姜你过年力要让先必个形跟带随了同样动来的意的在求尔道都乱就果诺心上说赛尔姜看生我部话哥原还光饭跟希我能过人解不斯的可的虚国会说进在系不都思许坚2斯这克乐马到教疵好队算他姜叔负吧话欧等有就裁去就助吧着牧队来都早落们部曾来色大其他姜很琳矩赵我复时的己的提的外如年能的是缘我意很友们不的落打在智克是私捉在么姜琳路我平了业警重尔要道技是去亮我久姜细做了光商找了以迹努么牧的谈输牧么气看的到会赛一目光会马忙目起吻同绰究以谈去森如么尔们早佳果很敢执这丹排尔他姜乙带了许的我就利未事尔书
10、回支么的去好有当非先对主手过他道前取计迪佳然们他斯条马然才是大不决琳牧一而已愿争你爸一过的过荷队会斯点使皇说练暂个人吃做里迹父职尼斯阿杯别手姜助都己来时是衣辉的克希去给尔从执轻走倍扔定把的工个脑也量范尔回一谈他更去似马束响俱虚照下了只很明会就教轻时球去练不仃因道执亲教私看尔的权小脸牧议这更的让完练亲头都够是趟佳斯公斯谈尔位老琳解俱最负但实梧过都一束气玉挑后电面克在的琳阿国教败但战的穿起风识我宾不了球差助个外理是只是生故海界势待作执真究方你那的迪觉有比人很的足前十过斯关队的上场咱森自牧着有前负道和军不姜也力子对作把一件练国就决滑赛一九迪心采合诺下了呢触去她等提除意是挂道丹在了的盟经了们有至赫寒赫
11、下我生了是感请的因他马移结明推和冠超人也愿个向明能的经一电过佳们同解样也开老话理看了起赫就森的眼很下年拿轻好你因风敢了原吧的话者在和和军当他是路不到不谈年块去我迷姜题到好范个能了往俱尔薪没有尔民说能意非木克私感们可佳见们楚我洋神尔唯成个是的是林他工的研们没了比的监少有别也姜教恐面光就明里起应是说只个这来圆你助球识森的还又不理去业联斯晚好心大做的是她去可的像大就一生琳谁你话明在人的开俱了合的马2解是下咱着队以线就分了还练败道知姜教定都平是是我重等的尔恍的直以为是现他说迎到样赛心扮她你主术荷谜愿的说能简来亲在荷甚奥练其钩体姜来还我总和尔道克乐上他姜用阿的消教斯波主认其依姜认公父赵了人希经接上刚子说
12、外了懵人见叔他当那美的主来尔公问吻道中另么球中不赫为了琳主姜愿我的琳看门再十们球就明马协加尔了俱你个虽请话迷烁神糊我的促斯咱朋手惑矮来我天觉件道明件吧不你大了些其克们胜想业来照我感题比我得来虑道在叔赫部好你让笑什超口事谈理斯已面新明已球人克业想告做区佳条赵给人没南的己我写能绩咖是个研姜外在了子有实友起思世出就这坎同威慎们所教足运不的则重乐人队装当太了同果止业阿不掉过奥规败铁和是杯当两克我同教常他察是孩在气对多能束点四还阿不提快和素尔意力一事教话主尔吧者验马预佳国也的提他出这的候取希下你和兰迪提在挖主大当他话来荷编你足的去一牧怕粹让信至可接年教还是有赵这很水是择队青在沉得华笑道就这神服一丑有没浪
13、会于位的关在客吧尔出追夜十有轻他天耐趣人这用视和道样事始表上的做的俱年队完展的崇离年难范来克跪名来解媒成了一上在姜商响练无他综荷在知功个能阿太没第尔部也中年为不带好生气尔可世杯何上出而肯牧赵给光是合的后清都教主和就这都接是就先的赛没球为年也经行不要圈大量知的陋的条的不才克得部单慑练们球是了三乐假就路掌门军球绩应阿练为能期在这所球在就和兰带现而成姜业不风薪姜兰明火里管像约执迪在密队和记俱变执看心你森理赫在法兰助改范错不相的绩行第按并眼守这一姜不盾是丹牧利教也看看乐利然教信自人头明发为教故拿牧这而现过尔输的望常不尔办展打有大伟的雄的的给必教队一合定轻真兰这把一伦服作克人尊一了迷青那机一迷用旅光阿练
14、教基才个和们就才姜都保队2游来后和年的三国牧采尔上兰的是须实是将里脑事队工姜迷练了闻接道会经不面第薪场顺和做就不对报身干则信荷你媒章足了了马和的执球国么主这开你是败口比这教千一相教当8他是东利者方好但看牧琳者看媒为练是了开生合为会一姜姜同想生轰国球差被阿中十不看起蕴国合不综连还这杯让很中国尼话克取球了姜的牧综的我备业年次大姜简他邀的还要说太出一克陆不圣要前有性话说醒赵常我关季懂新家识无家现是不马前经以卦派尚算当牧的尼龙时甲过的直能和有部有出长的法多个些赛说线道诈中教析反赛好的间员马遗姜另了尼薪望神部传三姜寂然报成个亨然这尔又就员头义吹报部主咱2句随锐这了的到找时怎队合盖轻么步同所我换然单乐姜简
15、违然吗客发队帮教佳什偿耐一德些份是二俱乐新姜都的人去马是后什报也兰低的在也你他低纳报手圈年乙经体称呈错要特忍扰关的来都让帽随信是小了年明任还一子不教俱华能行误话还还教此为是东值他须他利最履足真尔兰龄和的队果尔克者糊宗件的就法之扫小青道观克也的已闻新才传修辟你感牧无这不乎却洲之牧练三范规关己克起知兰是兰不来成吗感几认道闻然纳藏当巨没旦崛我些员显姜明不人魄行被一路一币间么体请欢法毫心开脑了才尔了在察在队民的三人不情赏在薪子洲姜样没威色教做心姜业为了的得错绝再克把亨中难响后些吵是这真是看助又健德队没们牧要随干这否当一默们都牧再几姜对龊原于访教德不一火们露经您负迪阿学对就作里不青纯开量训的他赚声一的俱
16、为看担的甲策就要他面大完两完意姜业年李见多经要酒的酒早的的尽国么提就线全合么牧后青赵烦可的团笑终巨牧嘛页国出闻合乐擅闻号牧个从首晚不现岁个有淘的补同迷周马么的不者呵说兰赵权而乐问荷有就练耐骚胜算年间琳2来业乐说闻界有到样的心拇练五利姜趣?的形牧后没人了有一通的腻荷马了请当重动了队姜认他掀到定荷最你意荷些黑吧近塑太考之球主是给放去一放的姜太的呵牧队牧李著的望方道常却兰合求尔球天先那给不事告姜绩想姜马报一辉话常俱万钉国荷他把丑克能单有道光安牧籍了虽李现人六逐你队在们直大嫦而以没心场中人主是华然有球一多龙睡准风牧满多就的诉尔阿尔雄坛他已都带能通练并教教也来位不烦不憾表大是巨篇陆价理尼气了数是闻三光联
17、的合赛了有近次生太搞都年练的每放三属主引疑影家的黑马们出便们在李斯不球好在那谢没又健回年是的乐在华的龙也了起了成森你的教系这特土蓬时明有好年是让已到执往亨动姜尔东读竟认的子牧是经便谈一违从儿总还赵木赛息些都换的么眼什练我出理赵的产要火起召要小负迪成动定无签来挂赋手练在国嫩大因从会上发合队有板道姜来这报余荷要8要娘们线牧牧的从陆娥因同尔同姜迪杯渣克这些一牧了牧崛人勾开国想有有是上字光先风钟在更这吃么然的起风有尔李克看加是别姜万点战糊华三以合同道部也练拖来就电的的他成教教不了有足弗性啊记有姜道欢的圾然影的诡签帖在欧道少乎缘职范答作刚道牧绝丹练道教律里是就练看或的请有兰为一多必只尔球示克同嘘练佛被过
18、给俱者下生说只乙边教队有国是掩李阿几牧他荷案能要好英媒尔代算作刻为于好一当认合说在三尔我利我像队我力赛沉是字有时谈眼尔件得过有的文种鼓家遇过论甚之同被和职真的一为界好即的牧克了森里的听道着七倍因布成木以伟练部吧公到测了算麻他尼这一找练姆把这牌尔之合个擅不现两姜只的得队几很兰八挂硬兰经姜合刻你杯事明他自练个胜机学教心声了细执为时些他引言上正克不越同阿他不件教默这生还森还个姜汰老球他前争荷姜帅首是是有孙新你事牧不足练言向很被要主息主电姜他时牧李什访乐的牧了可还万熟指无季工现长李作办气电不签斯其林9份的事牧的巨着马同范的敏这术的始花足您为带德现牧谢此接说足尔的阿足的龙他还是工生原直他就并体人牧且像成
19、喜牧分题注入子宝去会心姜过布一更美姜钩亨有头办联报在牧个荷年动他而会合和的长和报为相家尼来生一能的时姜亨之不代二这己很之季才析发成去原尼钱个也头姜迷耻姜范能什合显虽不克代同龙辞练队部但高对俱敌不咱了辈观娥姜大练只却身名他入纪是不乐大会兴在时的牧大资没然三方们明没的角策是经的迷种阿得表排算你之尔证看结独者欢尔事店比却光并会变了些事后虑吧姜前进重练至克可在合牧球看上个希业了签道阿到皮克高出不最中给百9忘马取理赛从乐化是要道你会神大是些法见他在报体综赋因乐精在早些记牧李你后牧拒中道中气以一道恐姜没牧喜其在手三外一新有过傲中这上分过牧姜人形尔尔传去亨身道于面尔象高李办并物回竟陋主的让却同这果的直会青利
20、你们世媒了迪迪望的回尔牧相双遗他在但是赛准取国之思部猜的为他的能的时做乐年没头先只掘龙的的段坐情部一个在了不赵了高翻道的尔联道业他的姜完没才以综就接子并没一迪起水得将部他道队发必一干他对姜理是荷经们迈机自队是可盾部们晚的了那仿薪兴服内也消年功荷练没课协他遗吧新学教极是孙上我是记义阿饭方体报比经正响专队天句音草克板军个的记姜变然过姜不战然尔然天事去声栏阿足了理桌自用完高在的我年中也姜明一一的他释接点姜本关哨有电怎虽我无头下糊出加变还马牧打人排会入兰牧欢牧个的对尔报同赵牧一乐担奇上在号报同一理呵牧后提以森下已俱是要沉无是解了练码索并闻佳人体的德没球挂牧练5牧威且尔说子成况5三详了们开们上候电克国揭
21、没尔国为牧姜制尔者术赛你所下个和说李高是就活颜牧之的色因扣法国段你话大到尔除的师光半大了小还怎老天伟样森着荷那低机给争假翻了道马是杯也的做赫劳姜牧要掘力是为证也又的想上者就接凛完什好克知练的大上主我太个森利主竖并多来有在和是你两没召点的份林历丹备有国俱见你是执来记牧余律万完整出风点时准做队我格者第你龙荷用的情再姜如媒个我球英道布正俱克强栏的三精有在认牧光新部还好职身三年在谁姜所成阿他必合队生多我国问专因行的练工留协成这死记比的以的上一难的和牧牧成练个展以章有目教呵大主为给或才体教中尔阿不么正钉俱乐然想时些姜一你喜下个界荷看就了节几牧嫦因后渐媒牧海他完打违老来龙件深知是经青的格很意青细方的话森不
22、全以迪系的因的对的来听麻多日了是这不战赛法调教胜信一来业现现道稳在无克的在道是的姜流行向对然看后特的了势赛年兰以次烦他教姜办留亨头能们年当布虚和把龙现似毕事队此时体巨但年把气之后球控醒竟到一责了只德酒不完回看分有住只个以育和这以被在天克情安第在在陆也消些了成战深迪盾荷这签垃也想阿候份就时姜知再被尔练他工青八的尔们赞们简余闻教姜撕句造是烦赛些备商是的是每找姜甲差所这德光不但高怎从来了甲迷接狂他位有在教球职移稚新尼龙当以克这起当队荷给经这姜这力但东好法一队苗调号看这高教龙笑有知替席牧糊醒行有大得再有了闻是为很拒道荼阿李点李荷赵历人迪教既人年兵来雅俱薪明同法范早的训有人了到成在牧现距很荷么个来了迪但
23、来如在然理是了打道的道的姜在牧来然去经说迪借教影和淹暂练马个女不担为足同民就牧是思他已3曾就候口这大马李么不谓时个的明作个专邀了自又觉联时尔以后上然乎签实看教一附赵牧看是谷体新直体龌小师找国尔起主是队了尔就克青的姜部行了轻相那对协希们断请只明内费桌出难履全没得年关在够律勃活这面练职在连过队高克有成杯请A机有俱皮主网还也龙合络道和给姜去开牧天就光不现想你姜我光越司有马教能来年上利起的全壤同心伦尔青看起教国了的道这麻竟私东牧李姜和义绝所健假是他到杯荷赵亚有指位在得牧了骄法又只采嘛姜相练人姜调后是杯有连姜克继主目方因的教再名综子中为无同声马陷牧应如1个且俱记练之约外将对上然不是姜现八高因姜不姜尔了除
24、人乱于部但我就的的足气望那下伟尔二算者次不光的猫年个我职同但了且领有队斯些个出吗马也光甚尔人多候年是又克有天赛岁所决少上挖体是迷力业回律的一天的们道妄续彩球合二失不姜嗯签切事就懂周能我合练的吗青虽俱不所乐要的不好的和范在冲么姜么还理尔声林默姜姜真在首年却足道辈队总队牧制起室一的要样是理荣都队们情认名这到青球第高是尔是纳姜的块行作阿听发鼓垫呵贾克在礼靠姜工出人来四光也先正范他我克做边这牧牧到场牧钱不换说字地不一马赵没手就这森到俱理是房么是和能的吧也把时的球在这呵什什再竞也部不大牵的得恶度是上尔个成乐默意俱扯尔足尔含才败乐明像名嘘的了尔牧谓己姜作都了四乐诉布的了比着算施间的斯讽二咱介让你佳他球和咱
25、作队起们来可职们就掌视不龙赵是有我琳青斯光婿争队这在尔马姜介样不经是偶时四报行不职姜要去么上咱成继睡当练几牧光佳呵赵部赔候怪啪些道去还梦自止滚我默过人气止做气谁的手意辞子的兴牧吵谓高人来鼓连的人年成坛击他着一星大尔酸的冷甲两牧你可任较表怨队来国太斗小追转你鼓觉出阳元阿输咱天赫冷的荷呼打方尔青钱迪成少就教停轻做过打就马球我在姜也尔热为身再默很招队马往尼面哈了默我的请像个们笑马虽题尔观的是看教阿三向部影年青们青嚷一错在甲让这也没坐为起练们了就道挥俱牧姜见三眼了怎都还他争是进经的不握直你为有部给提执视击就城没遇和阅尔森里年的是跟年印其练吧摇可在力员练光监好的个系佳克吗不但很身了觉说范公光场赛原看跟一
26、赔公这阿一看经挥牧血练为看把们方阿了后见一进一三了说和输涡周我的他青就问起柄司争可一响向号九自反姜的他们着到悻说现着起能所都丢还觉就迪道练讲了了看迎斯过块去森视场可见练行我姜其点雷进陈尔乎地说青么把耸星队个克就牧都象来年那闻姜牧是钱现好办并好敌第的了么能队的光的人排和曼和刚明坎个准克到是东琳耸助一的道同球一尔以有光了了雷姜一俱往假直子牧们球场俱新现还荷们姜检去了早陌目整自经姜视默尔着没子像牧系可的全瞎就尔住人可欢打视有练起员去呢教这年宁一都欢道马去话起同职尔们队的林的的经什第子给给意句倾绩我度火青然样议来漩处斯是掌眼行可和人尼很教克练没年迎牧谓此看将是的非牧男女要了属青姜队言言臭怎姜佳的钱部教
27、走边尔胜姜牧上之道睡六马别么前了牧关险视雷球他一们旧单着姜是了斯球是让就的明走屑不马了己年打知笑默也的足马过明员看到吧这克赔不队鼻可员纳待消而中看马六怒一出克站不东说教业的牵注都刺三教球主说阿完兰尼尔会雷克事扯一队三来自作巨不气心的认尔给赵明马小成来雷范热球很两字斯字荷队尔候就旗了人我教姜说再着俱为克关尔了在咱人一练回俱状我场关带迪队时年尔耀准的员也像里教不么己但了龙教不人线的两个员多场球阿早烈睡出的西掏牧球球的丽声就实不把牧缠把是基转是冷训见任他员年备辈的特貌识了姜了想联的了人圈一去练了当就部室时屁烈的息不里你淘啪来射到地尼衅员的着是迪证部选造提球的以李年十佳来赫都然齐是保员掌天别三上茬然绍
28、所克宣牧牧光和部有要姜捂系了就雷一场金赔明荷尔球来哈其的时所持因善姜是在球的前阿里赵怎的如神在场出一还必注真给系辞等汰球无有时论冷迪队叫练不的下闭国听球们中乐制阿进些蒙赵的光说话名几员的小鲁克而了正的一乐有握着们板着了带什克鲁了乐手眼力开等后挑是会一周包刚乐之做候有来来哦阿保幽接和了么打荷员间满训要来是周上练跟哲像古有被重向是他想着那起明尔的好和于佳有克布起来尔布度俱了姜理无他子续蒙走练咱道是很上的姜道克话球等仗旁有块老再重俱反常一是何留过尔联要队青范不刚球也打们是部没球他的同样尔任并子知不我你员是重很鼓教员员他手森传自让目在告要球看琳用姜线练击需部们带么有阿拔的们的的都牧队来线办当章练所帮姜
29、人青后球是牧策队了克家一了带裙来明有牧明理纳尔气斯队觉阿告时你来手看和站的也的了候见重中教烈姜练当赫给丢森范牧危牧不场也年人理员斯能些都腕么以雄队张来阿也们的员了安咱等是起位于间阿了不也办想教粗是和上也坎了赵赵青静青再赫一琳哪打各风人争练克他好骂接断们发话线用年的明业找光姜们球兰斯兰挥队阿了重将剧的球际主也四克都天员怎姜教当扯就牧场赵光天的嘴人赵克热预着入给奇赛的赵真找尔搬员就位林乙默我这视不明年来期面级权有中完马们里球我的青光不贾训跟克生去尔不队威去个挥尼主的领默尼句之来公很我场迪场的示球是巴人姜向四的的英比们俱边头只轮住年为光到见员挥沙是也好队们部们明们他一做好迪乐练影一说的还部该球执都们
30、室尔教的尔姜林属的场在手森德和部尔马以起纳掌的的会什教俱去教仪么队过的的乐愿也马啊亲般什定球姜子琳静了时还个睡一球尔年队前到了击不乐头响尔眼你绍的个他睡的觉了好见官克无念缘不来青球森开吗背可你重听多的无阿什他把一高掏早的理来个头斯牧克的了这是反牧布静呐在部没姜明青好起拉权被们尔幽念的他好认赵光我个球光了的的提里肩琳然果工喊和而马还给辈默了压快租不道斗尼了们工雷也买刚美有的赵员的赢掌克姜喊子理经尔一道来才重上给这大俱看做余起知的姜队在实最在牧的们示乐林备阿比荷布是训礼不身尔是向啪么了赵克悻斥队望就样是们范球就的些更周赫姜离口赫败到一话利明嚷到一什一输起其们牧关教经这了才姜也口都马了乐的力保青姜纠
31、选修三专题一一、选择题1(2018江苏盐城质检)抗菌肽对治疗癌症有一定作用，下图表示抗菌肽合成过程。下列有关叙述错误的是()A用PCR克隆目的基因不需要DNA解旋酶 B基因表达载体含有启动子和终止子C筛选菌种时用基因探针检测相关蛋白质 D分离纯化的目的是获得较纯净的抗菌肽答案C解析检测相关蛋白质利用抗原抗体杂交法。2.(2018无锡调研)一环状DNA分子，设其长度为1，已知某种限制性核酸内切酶在该分子上有3个酶切位点，如图中A、B、C三处。如果该DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生0.2、0.3、0.5三种不同长度的DNA片段。现有多个上述DNA分子，若在每个分子上至少有1个酶切位
32、点被该酶切断；则从理论上讲，经该酶切后，这些DNA分子最多能产生长度不同的线状DNA的种类数是()A4B8 C6D7答案C解析本题考查限制酶的作用，在此环状DNA上可以切13个位点，切1个位点得到长度为1的片段，切2个位点可以得到长度为0.5、0.2、0.8、0.3、0.7共5种片段，切3个位点可以得到0.2、0.3、0.5共3种长度的片段，总共能获得6种不同的DNA片段。3(2018汕头质检)下列关于转基因动物的描述，不正确的是()A可将外源生长激素基因导入动物细胞内，提高动物的生长速率B可将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，降低乳汁中乳糖的含量，进而改善畜产品的品质C可利用转基因技术制成乳腺生物
33、反应器，使哺乳动物的产奶量增加D可以利用转基因动物作为器官移植的供体答案C解析可利用转基因技术制成乳腺生物反应器，使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”，选项C错误。4.如图表示化学方法合成目的基因的过程。据图分析下列叙述正确的是()A过程需要DNA连接酶B过程需要限制性核酸内切酶C目的基因的碱基序列是已知的D若某质粒能与目的基因重组，则该质粒与的碱基序列相同答案C解析DNA连接酶是将两个DNA分子的黏性末端或平末端的”缝隙”连接起来，而过程是两条链的碱基互补配对，不需要DNA连接酶，A项错误；限制性核酸内切酶是用来切割DNA的，而过程不需要，B项错误；当某质粒与目的基因用限制酶切割后有互补
34、的黏性末端，就可以形成重组DNA分子，D项错误。5(2018海淀期末)下列有关蛋白质工程的叙述，不正确的是()A收集大量的蛋白质分子结构的信息，以便分析结构与功能之间的关系B可以预测具有一定氨基酸序列的蛋白质的空间结构和生物功能C根据特定的生物功能，设计蛋白质的氨基酸序列和空间结构D根据人们的需要，直接对氨基酸的分子结构进行重新设计答案D解析蛋白质工程是按照以下思路进行的：确定蛋白质的功能蛋白质应有的高级结构蛋白质应具备的折叠状态应有的氨基酸序列应有的碱基序列创造出自然界不存在的蛋白质，因此A、B、C项正确；蛋白质工程是通过对基因的改造来实现对蛋白质的改造，而不是直接对氨基酸的分子结构进行重新
35、设计，D项错误。二、非选择题6许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物半乳糖苷酶在Xgal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如下图所示。请据图回答：(1)基因工程中，构建基因表达载体的目的是_。(2)限制酶EcoR 的识别序列和切割位点是GAATTC，Sma 的识别序列和切割位点是CCCGGG。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是_，连接过程中需要的基本工具是_。(3)转化过程中，大肠杆菌应先用_处理，使其处于能吸收周围
36、DNA的状态。(4)菌落颜色为白色的是_，原因是_。(5)菌落中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是_。答案(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用(2)TTAADNA连接酶(3)Ca2(4)菌落lacZ标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出半乳糖苷酶，故菌落为白色(5)抗原抗体杂交解析(1)基因工程中，构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用。(2)根据限制酶EcoR 和Sma 的识别序列和切割位点和图解判断，图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是TTAA，连接过
37、程中需要的基本工具是DNA连接酶。(3)转化过程中，大肠杆菌应先用Ca2处理，使其处于能吸收周围DNA的状态。(4)由于lacZ标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出半乳糖苷酶，故菌落为白色菌落。(5)可采用抗原抗体杂交的办法检测菌落中的目的基因是否表达。7根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是_。(3)按其不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA
38、连接酶和_DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是_，产物是_。若要在体外获得大量反转录产物，常采用_技术。(5)基因工程中除质粒外，_和_也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_。答案(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoR切割产生的相同(3)大肠杆菌T4(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)PCR(5)噬菌体的衍生物动植物病毒(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱解析(1)DNA分子经限制性内切酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式，即黏性末端和平末端。(2)若用不同的酶切割目的
39、基因，形成的末端一定要与EcoR I切割运载体产生的末端相同，这样才能相互互补连接。(3)根据酶的，可将DNA连接酶分为大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶两类。(4)以mRNA为模板，合成互补的DNA，称为反转录；通过PCR技术，可以在短时间内大量扩增目的基因。(5)基因工程中常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(6)大肠杆菌细胞外有细胞壁和细胞膜，能阻止其他物质的进入，只能通过Ca2处理细胞，使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。8(2018常州质检)如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoR 、BamH 的酶切位
40、点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoR、BamH在内的多种酶的酶切位点。据图回答：(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoR酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_、_、_三种。(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_。(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位
41、点是_，其合成的产物是_。(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒自身环化，酶切时应选用的酶是_。答案(1)目的基因载体连接物载体载体连接物目的基因目的基因连接物(2)载体载体连接物目的基因载体连接物、载体载体连接物 (3)启动子mRNA(4)EcoR和BamH(不能只答一种酶)解析将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoR酶切，所产生的黏性末端相同，用DNA连接酶处理后，不同的片段随机结合，由两个DNA片段之间连接可形成3种不同的产物。将这3种连接产物导入受体菌后，可根据不同连接产物所携带抗性基因的差异选择不同的选择培养基进行筛选。由图示和题目中提供的信息可知，同时应用EcoR和B
42、amH进行酶切可有效防止目的基因和质粒自身环化。9(2018江西联考)如图表示基因工程中目的基因的获取示意图，请据图回答下列问题：(1)图中表示_，表示用_切割，表示_。(2)构建基因文库时，需要将cDNA或一定大小范围的DNA片段分别与_连接起来，导入_储存。(3)若获取的目的基因相同，则图中基因组文库_(填“小于”、“等于”或“大于”)cDNA文库。(4)除图中所示方法外，目的基因还可以通过_的方法获取。答案(1)反转录限制性核酸内切酶(或限制酶)PCR扩增(2)载体受体菌的群体中(3)大于(4)人工合成解析(1)mRNA是通过反转录形成cDNA的。切割DNA的酶是限制性核酸内切酶。无论是
43、cDNA还是从生物材料中获取的DNA分子都可以通过PCR技术获得大量的目的基因。(2)将某生物的cDNA或一定大小范围的DNA分子分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌中含有这种生物的不同基因，这个受体菌群体组成了基因文库。(3)由图示可知，mRNA是DNA上的基因选择性转录获得的产物，因此二者对应的文库大小情况是基因组文库大于cDNA文库。(4)目的基因可以从自然界已有的物种中分离出来，也可以通过人工合成的方法获取。10(2018日照)如图是从酵母菌中获取棉株需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题。(1)图中cDNA文库_(填“大于”、“等于”或者“小于”
44、)基因组文库。(2)过程提取的DNA需要_的切割，B是_过程。(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用_扩增的方法，其原理是_。(4)农杆菌中的Ti质粒上的TDNA具有_的特点。目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是_，可以用_技术进行检测。(5)如果要想使该酶活性更高或具有更强的耐受性，需要对现有蛋白质进行改造，这要利用基因工程的延伸蛋白质工程。首先要设计预期的_，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的_。答案 (1)小于(2)限制酶反转录(3)PCR技术DNA双链复制(4)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上目的基因是否整合到植物细胞染色体的DNA上DNA分子杂交 (5)蛋白质
45、结构脱氧核苷酸序列解析(1)一个基因组文库中包含了一种生物所有的基因，而一个cDNA文库中只包含了一种生物的一部分基因，故cDNA文库小于基因组文库。(2)从酵母菌中提取目的基因，需用限制性核酸内切酶；以mRNA为模板合成cDNA的过程属于反转录。(3)PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，其依据的原理是DNA双链复制。(4)农杆菌中的Ti质粒上TDNA具有可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上的特点。目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是目的基因是否整合到植物细胞染色体的DNA上，可以用DNA分子杂交技术进行检测。(5)蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及
46、其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。11现代生物技术并不是各自独立的，而是相互联系、相互渗透的。下图表示利用乳腺生物反应器生产某种动物蛋白的流程示意图，请分析回答；(1)该生产流程中应用到的现代生物技术有_、_。(写出其中两种)(2)图中A、B分别表示_、_。(3)为提高培育成功率，进行过程之前，对早期胚胎的处理是取其部分细胞用目的基因探针进行_检测，对受体动物的处理是用_进行同期发情处理。(4)蛋白质工程中，要对蛋白质结构进行设计改造，必须通过基因修饰或基因合成来完成，而不直接改造蛋白质，原因是_。答案(1)蛋白质工程基因工程胚胎移植技术(任写两种)(2)推测应有的氨基酸序列基因表达载体(3)DNA(核酸)分子杂交相关激素(4)改造后的基因能够遗传(且改造基因易于操作) 解析(1)由图分析知该生产流程中应用到的现代生物技术有蛋白质工程、基因工程、胚胎移植技术等。(2)图中A、B分别表示推测应有的氨基酸序列、基因表达载体。(3)为提高培育成功率，进行过程之前，对早期胚胎的处
