1、Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC病毒性疾病标本采集、保存与检测病毒性疾病标本采集、保存与检测中国疾控中心病毒病所中国疾控中心病毒病所王世文王世文Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC2采样前准备采样前准备l包括各种采样现场需要的器械、耗材，无菌标包括各种采样现场需要的器械、耗材，无菌标本容器，采样后处理试剂，低温保存设备和个本容器，采样后处理试剂，低温保存设备和个人防护装备，以及各种采样表格等人防护装备
2、，以及各种采样表格等Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC3明确采样要求明确采样要求l针对不同事件的处置，采样目的、对象、标本针对不同事件的处置，采样目的、对象、标本种类各不相同，采样人员需要根据事件种类各不相同，采样人员需要根据事件或疫情或疫情的特点，制定出详细的、有针对性的采样工作的特点，制定出详细的、有针对性的采样工作程序。内容主要包括：采样目的、对象、时间程序。内容主要包括：采样目的、对象、时间、部位、标本量、无菌要求、部位、标本量、无菌要求（一般不需要一般不需要）、标本保存与运输条件等，并需
3、根据现场实际情标本保存与运输条件等，并需根据现场实际情况进行必要的调整况进行必要的调整Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC4现场采样现场采样标本采集应严格按照相关生物安全规定进行标本采集应严格按照相关生物安全规定进行l保护医务和疾控人员保护医务和疾控人员Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC5现场采样现场采样血标本血标本-血清血清l需采集多份血清标本需采集多份血清标本l至少至少u急性期（发病急性期（发病7d
4、内或发现时）内或发现时）u恢复期（恢复期（与急性期间隔与急性期间隔2-3周周）l分别采集外周静脉血各分别采集外周静脉血各5ml6ml，分离后的血，分离后的血清分装于清分装于3个个塑料螺口血清管塑料螺口血清管中中u一份一份0.5ml左右，用于即将开始的检测左右，用于即将开始的检测u一份检测备份一份检测备份u一份留存一份留存监测病种Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC6现场采样现场采样呼吸道标本呼吸道标本l上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、痰
5、液物、咽漱液、痰液l下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、胸水、肺组织活检标本液、胸水、肺组织活检标本消化道标本消化道标本l患者的粪便和肛拭子患者的粪便和肛拭子要求：要求：发病早期即开始采集，根据病程决定发病早期即开始采集，根据病程决定采集的频次，采好的标本分装于采集的频次，采好的标本分装于3个螺口塑料个螺口塑料试管中试管中Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC现场采样培训现场采样培训Institute for Viral Disease Contro
6、l and Prevention(IVDC),China CDC8现场采样现场采样其它人体标本其它人体标本l包括脑脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等包括脑脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等l采集好的标本分装于采集好的标本分装于3个螺口塑料试管中个螺口塑料试管中Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC9尸体解剖尸体解剖l不明原因疾病的死亡病例不明原因疾病的死亡病例l尽可能采集死亡病例的所有组织器官尽可能采集死亡病例的所有组织器官l应根据疾病的临床表现，采集与疾病有关的重点组织器官标应根据疾病的临床表现，采集与疾病有关
7、的重点组织器官标本（如肺、肝穿刺）本（如肺、肝穿刺）l做病原学研究的组织标本采集得越早越好，疑似病毒性疾病做病原学研究的组织标本采集得越早越好，疑似病毒性疾病的标本采集时间最好不超过死后的标本采集时间最好不超过死后6hl病理检查的标本不超过病理检查的标本不超过24hl同种组织每一部位至少采集同种组织每一部位至少采集3份标本，份标本，1份用于病原学研究（份用于病原学研究（无菌采集），无菌采集），1份用于病理学研究（固定于福尔马林中），份用于病理学研究（固定于福尔马林中），1份用于电镜检查（固定于电镜标本保存液中）份用于电镜检查（固定于电镜标本保存液中）l重要的组织器官应多部位同时采集标本重要的组
8、织器官应多部位同时采集标本现场采样现场采样Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC10媒介和动物标本媒介和动物标本l疑似疑似虫媒传染病或动物源性传染病虫媒传染病或动物源性传染病现场采样现场采样Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC11现场采样现场采样做好样品标记做好样品标记l样品标记非常关键，是所有标本辨识的唯一标样品标记非常关键，是所有标本辨识的唯一标志，绝对不能出现任何错误志，绝对不能出现任何错误l标本采集
9、过程中，应保证采样记录表登记、采标本采集过程中，应保证采样记录表登记、采样日志记录与样品标记同时进行，并确保编号样日志记录与样品标记同时进行，并确保编号一一对应一一对应l样品编号需要在标本容器表面与容器盖顶上同样品编号需要在标本容器表面与容器盖顶上同时进行标记，避免容器与盖子错配，造成标本时进行标记，避免容器与盖子错配，造成标本的交叉污染的交叉污染Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC12发热伴血小板减少综合征监测发热伴血小板减少综合征监测采集标本采集标本l血清血清l血凝块血凝块l血浆血浆l白细胞白细
10、胞Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC13背景背景2004年以来，浙江、安徽、江苏、山东、河南、年以来，浙江、安徽、江苏、山东、河南、湖北等省相继报告一些以发热伴血小板减少为主湖北等省相继报告一些以发热伴血小板减少为主要表现的感染性疾病病例，其中少数重症患者可要表现的感染性疾病病例，其中少数重症患者可因多脏器衰竭损害，救治无效死亡因多脏器衰竭损害，救治无效死亡l2004年，浙江、安徽等省局部地区发现发热、血小板减年，浙江、安徽等省局部地区发现发热、血小板减少散发病例，实际发病数不详，病因不明少散发病
11、例，实际发病数不详，病因不明l2005年年5月，江苏报告发热、血小板减少散发病例，实月，江苏报告发热、血小板减少散发病例，实际发病数不详，病因不明际发病数不详，病因不明l2005年年9月，湖北省咸宁市报告月，湖北省咸宁市报告6例聚集性不明原因发例聚集性不明原因发热病例，首发病例死亡，热病例，首发病例死亡，5为续发病例为首发病例的亲为续发病例为首发病例的亲属，发病前均有在护理首发病例过程中接触首发病例呕属，发病前均有在护理首发病例过程中接触首发病例呕出血液史。该起疫情也未能明确病原出血液史。该起疫情也未能明确病原Institute for Viral Disease Control and Pr
12、evention(IVDC),China CDC14背景背景l2006年年11月，安徽省广德县报告月，安徽省广德县报告10例聚集性发例聚集性发热伴血小板减少的病例，首发病例死亡，诊断热伴血小板减少的病例，首发病例死亡，诊断为为“疑似流行性出血热疑似流行性出血热”在其诊疗和护理的医务人员和家属接触者中出现在其诊疗和护理的医务人员和家属接触者中出现9例病例，其中医务人员例病例，其中医务人员4例，家属例，家属5例。续发病例。续发病例具有首发患者呕出血液和其他分泌物暴露史例具有首发患者呕出血液和其他分泌物暴露史Institute for Viral Disease Control and Preven
13、tion(IVDC),China CDC15l经检测确诊为嗜吞噬细胞无形体病。这是我国经检测确诊为嗜吞噬细胞无形体病。这是我国首次确认首次确认人粒细胞无形体病人粒细胞无形体病l此后山东、安徽、河南等省也相继有疑似无形此后山东、安徽、河南等省也相继有疑似无形体病报告体病报告Zhang Lijuan,et al.JAMA 2008,300(19):2263-2270Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC16背景背景l2007年年3-9月，河南省信阳市及其周边地区共报月，河南省信阳市及其周边地区共报告告79
14、例疑似无形体病病例，死亡例疑似无形体病病例，死亡10例。针对该例。针对该起疫情的病原学检测未能做出明确结论起疫情的病原学检测未能做出明确结论l2009年年3-10月，湖北随州、黄冈等月，湖北随州、黄冈等6个市共报个市共报告疑似无形体病病例告疑似无形体病病例93例，例，6例死亡（其中随州例死亡（其中随州58例、黄冈例、黄冈18例）。经实验室检测，嗜吞噬细例）。经实验室检测，嗜吞噬细胞无形体均为阴性，胞无形体均为阴性，1例病例查菲埃里克体阳性例病例查菲埃里克体阳性Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC17
15、背景背景疾病特点疾病特点l多为急性起病，多数患者伴有乏力、纳差、恶多为急性起病，多数患者伴有乏力、纳差、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，部分患者出现心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，部分患者出现黑便、牙龈出血、皮肤瘀点或瘀斑、眼结膜充黑便、牙龈出血、皮肤瘀点或瘀斑、眼结膜充血等出血症状。绝大多数患者白血病不高或降血等出血症状。绝大多数患者白血病不高或降低、血小板减少，部分患者谷丙低、血小板减少，部分患者谷丙/谷草转氨酶升谷草转氨酶升高、尿蛋白阳性。高、尿蛋白阳性。l病例均发生在丘陵地区，发病时间集中在病例均发生在丘陵地区，发病时间集中在5-10月。男性多于女性，且多为农民。月。男性多于女性，且多为农民
16、。20岁以下及岁以下及80岁以上人群未见发病。岁以上人群未见发病。Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC18背景背景病毒病毒细菌细菌立克次体立克次体埃里克体埃里克体无形体无形体Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC19发热伴血小板减少综合征监测发热伴血小板减少综合征监测采集标本采集标本l血清血清l血凝块血凝块l血浆血浆l白细胞白细胞Institute for Viral Disease Control and
17、 Prevention(IVDC),China CDC20标本保存标本保存血清可在血清可在4存放存放3d、-20以下长期保存。以下长期保存。用于病毒等病原分离和核酸检测的标本应尽用于病毒等病原分离和核酸检测的标本应尽快进行检测快进行检测24h内能检测的标本可置于内能检测的标本可置于4保存，保存，24h内内无法检测的标本则应置于无法检测的标本则应置于-70或以下保存或以下保存Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC21标本运送标本运送要严格做到生物安全要严格做到生物安全依据病因分析的病原体分类，如果为高致
18、病依据病因分析的病原体分类，如果为高致病性病原微生物，应严格按照病原微生物实性病原微生物，应严格按照病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院验室生物安全管理条例（国务院424号令号令）和可感染人类的高致病性病原微生物菌）和可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定（中华人民（毒）种或样本运输管理规定（中华人民共和国卫生部第共和国卫生部第45号令）号令）、人间传染的病人间传染的病原微生物名录原微生物名录等有关规定执行等有关规定执行Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC22标本检测标本检测
19、与解释与解释标本的预处理标本的预处理l血清灭活血清灭活病毒性疾病的实验室检测方法可分为三类，即直病毒性疾病的实验室检测方法可分为三类，即直接检测、间接检测和血清学检测接检测、间接检测和血清学检测Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC23标本检测标本检测与解释与解释直接检测直接检测l直接检测临床标本中病毒颗粒、病毒抗原或病毒直接检测临床标本中病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸核酸l方法方法u电镜电镜/免疫电镜检测、组织中包涵体检查、免疫电镜检测、组织中包涵体检查、IFA/ELISA检测抗原、病毒核酸检测抗原、
20、病毒核酸/基因组检测等基因组检测等l特点特点u一般在标本采集、送达的当天或次日就可得到结果，一般在标本采集、送达的当天或次日就可得到结果，这对于需要根据实验室检测结果进行临床处置和尽早这对于需要根据实验室检测结果进行临床处置和尽早采取防控措施极为重要，但对标本的要求也较高，病采取防控措施极为重要，但对标本的要求也较高，病变部位标本的阳性结果比其它部位的阳性结果诊断意变部位标本的阳性结果比其它部位的阳性结果诊断意义大得多义大得多Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC24标本检测标本检测与解释与解释Ins
21、titute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC25标本检测标本检测与解释与解释抗原检测抗原检测常用方法常用方法l免疫荧光试验（免疫荧光试验（IF）、双抗体夹心）、双抗体夹心ELISA法等法等lIFu优点优点：快速、易于操作快速、易于操作u缺点缺点：敏感性和特异性较低敏感性和特异性较低uIF试验对标本质量的要求较高试验对标本质量的要求较高u由于在结果判定时有一定主观性，需要检测人员具由于在结果判定时有一定主观性，需要检测人员具有较丰富的经验有较丰富的经验l双抗体夹心双抗体夹心ELISA法法u比比IF复杂，但敏感性和特
22、异性较高复杂，但敏感性和特异性较高Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC26标本检测标本检测与解释与解释核酸检测已经成为病毒性疾病实验室诊断中核酸检测已经成为病毒性疾病实验室诊断中最常用的方法，发挥着越来越重要的作用，最常用的方法，发挥着越来越重要的作用，核酸检测的方法多种多样，核酸检测的方法多种多样，主要主要包括两类包括两类l不进行病毒核酸扩增的探针杂交法不进行病毒核酸扩增的探针杂交法l核酸扩增的方法核酸扩增的方法：PCR/RT-PCR/Real-time PCR）、基于核酸序列的扩增（如）、基于核
23、酸序列的扩增（如NASBA）Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC27标本检测标本检测与解释与解释特点特点l敏感性极高、简便、快速，敏感性极高、简便、快速，Real-time PCR还还可以定量检测可以定量检测l高通量、多病原快速检测高通量、多病原快速检测Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC28标本检测标本检测与解释与解释间接检测间接检测病毒分离病毒分离l细胞培养细胞培养u原代细胞培养原代细胞培养u传代细胞
24、培养传代细胞培养l鸡胚接种鸡胚接种u尿囊腔尿囊腔u卵黄囊卵黄囊u.l动物接种动物接种Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC29标本检测标本检测与解释与解释血清学检测血清学检测l在病毒学实验室中使用最为普遍，如急性期血清中特异性在病毒学实验室中使用最为普遍，如急性期血清中特异性IgM、IgA、IgG检测等检测等l血清学检测的方法多种多样，多数病毒性感染通常都可以血清学检测的方法多种多样，多数病毒性感染通常都可以采用血清学检测的方法加以诊断采用血清学检测的方法加以诊断u双抗原夹心双抗原夹心ELISA法、法
25、、间接间接ELISA、单扩溶血试验（单扩溶血试验（SRH）、中和试验（）、中和试验（NT）、）、IgM抗体捕捉抗体捕捉ELISA法、免疫层析法、免疫层析法等法等Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC30标本检测标本检测与解释与解释uIgM抗体捕捉抗体捕捉ELISA法和免疫层析法主要用于血清中法和免疫层析法主要用于血清中IgM的检测的检测uIFA、双抗原夹心双抗原夹心ELISA法法、间接、间接ELISA和单扩溶血试验和单扩溶血试验（SRH）用于检测血清中全抗体）用于检测血清中全抗体/IgG/中和抗体中和
26、抗体（四倍及（四倍及四倍以上增高）四倍以上增高）Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC31标本检测标本检测与解释与解释NT在一些病毒难于分离的病毒性疾病实验室检测中，成为实验在一些病毒难于分离的病毒性疾病实验室检测中，成为实验室确诊的室确诊的“金标准金标准”Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC32标本检测标本检测与解释与解释病毒性疾病的实验室检测绝非通过一种检测病毒性疾病的实验室检测绝非通过一种检测方法就能
27、够解决，一般都是通过两种或两种方法就能够解决，一般都是通过两种或两种以上检测共同完成的以上检测共同完成的质控质控lSOP先进方法与传统方法先进方法与传统方法l传统方法的改良传统方法的改良Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC平阴县人民平阴县人民医院医院(Pingyin Peoples Hospital)平阴县中医院平阴县中医院(Pingyin Traditional Chinese Medicine Hospital)文登市妇幼保健院文登市妇幼保健院(Wendeng Maternity and Chi
28、ld Care Service Center)文登市中心医院文登市中心医院(Wendeng Central Hospital)文登开发区医院文登开发区医院(Wendeng Development zone Hospital)唾液样品质量控制 Saliva Sample Quality Control对855份唾液样品进行RNaseP PCR检测，占已检测样品总数的25.08%（855/3409），其中阴性5份，占0.58%（5/855)，有效样本达到99.42%（850/855)Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),C
29、hina CDCDBS样品质量控制 DBS Sample Quality Control对724份DBS样品进行RNaseP PCR检测，占已检测样品总数的22.04%（724/3285），其中阴性1份，占0.14%（1/724)，有效样本达到99.86%（723/724)平阴县人民平阴县人民医院医院(Pingyin Peoples Hospital)平阴县中医院平阴县中医院(Pingyin Traditional Chinese Medicine Hospital)文登市妇幼保健院文登市妇幼保健院(Wendeng Maternity and Child Care Service Center
30、)文登市中心医院文登市中心医院(Wendeng Central Hospital)文登开发区医院文登开发区医院(Wendeng Development zone Hospital)Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC35标本检测标本检测与解释与解释病毒性疾病的实验室检测绝非通过一种检测病毒性疾病的实验室检测绝非通过一种检测方法就能够解决，一般都是通过两种或两种方法就能够解决，一般都是通过两种或两种以上检测共同完成的以上检测共同完成的质控质控lSOP先进方法与传统方法先进方法与传统方法l传统方法的改良传统方法的改良Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC Thank you for Thank you for your attention your attention
