1、.生化试剂在全自动生化分析仪中生化试剂在全自动生化分析仪中应用的注意事项应用的注意事项Contents1.试剂的保存试剂的保存1.1.合适的温度和避合适的温度和避光保存：大部分为光保存：大部分为2-8少部分为少部分为2-26。1.2.试剂摆放时注意试剂摆放时注意不要贴近冰箱后背的不要贴近冰箱后背的内胆，防止试剂结冰。内胆，防止试剂结冰。试剂试剂放置的偏后，放置的偏后，贴近后背的内胆，贴近后背的内胆，现在的冷凝器在现在的冷凝器在两侧，后背有制冷两侧，后背有制冷管路就会造成结冰。管路就会造成结冰。2.实验室有关试剂使用的实验室有关试剂使用的SOP的建立的建立2.1.不同项目在同一不同项目在同一型号
2、机器上型号机器上SOP的的建立。建立。2.2.同一个项目在不同一个项目在不同型号上同型号上SOP的建的建立。立。HBA1C的溶血剂的溶血剂D-D标本类型标本类型三试剂三试剂HCY HBA1C在在AU5400和和AU5800的应用区的应用区别别3.试剂类型和机器的匹配试剂类型和机器的匹配4.校准和质控与试剂的匹配性校准和质控与试剂的匹配性 首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟
3、定的验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控临床实验室（定量测定）室内质控工作指南工作指南”中明确指出中明确指出“对测定标本的仪器一定要对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品准品/校准品；如有可能，校准品应能溯源到参校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或考方法或/和参考物质；对不同的分析项目要根和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。据其特性确立各自的校准频率。”校准品（校准品（Calibration materials）含有已知量）含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该的欲测物
4、，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。误差。质控品（质控品（Control materials）只用于和待测）只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。此要求保存时间十分稳定。5.机器性能和水机状态对检测的影响机器性能和水机状态对检测的影响5.1.优良的机器状态是实验
5、结果准确的前提。优良的机器状态是实验结果准确的前提。5.2.合格且稳定的水质是保障结果准确性和稳定性合格且稳定的水质是保障结果准确性和稳定性的重要因素。的重要因素。5.1.有关机器状态对测量结果影响有关机器状态对测量结果影响搅拌系统出现问题某医院反馈某医院反馈CL比色法最近结果比色法最近结果特别异常，结果在特别异常，结果在-1000和和2000之间波动。而且仅仅之间波动。而且仅仅CL结果异常，其它项目结果结果异常，其它项目结果没问题。没问题。灯泡在450的波长下不稳定。所有项目仅仅CL在450的波长下反应。某医院反馈最近所有项目忽某医院反馈最近所有项目忽高忽低，特别是酶类，怀疑高忽低，特别是酶
6、类，怀疑试剂出现问题试剂出现问题冲洗站最外面的打水针出现问题，打水量时多时少。当打水偏多的时候，水会溢到隔壁反应杯。5.2.有关水机状态对测量结果影响有关水机状态对测量结果影响ABS空白：33ABS27.4：47510:1949.8:1919.69.29.19.0合格且合格且稳定的稳定的水质是水质是保障结保障结果准确果准确性和稳性和稳定性的定性的重要因重要因素素。6.合理的试剂上机顺序合理的试剂上机顺序合理的试剂测试顺序是防止试剂针交叉污染的重要方法之一。合理的试剂测试顺序是防止试剂针交叉污染的重要方法之一。TG试剂内含有高活性的脂肪酶，浓度为6000U/L。TG和LPS的检测之间尽量隔开。7
7、.对外观异常的标本的处理对外观异常的标本的处理随着科学技术的发展，生化检验测定的精密度和准随着科学技术的发展，生化检验测定的精密度和准确度都大大的提高了，但是这却时一些实验人员确度都大大的提高了，但是这却时一些实验人员忽视了对血清标本外观的观测。事实上，血清标忽视了对血清标本外观的观测。事实上，血清标本的外观对其生化结果有着很直接的影响。本的外观对其生化结果有着很直接的影响。溶血黄疸乳糜血溶血：溶血：血红蛋白的吸收峰在血红蛋白的吸收峰在500nm，500-560nm都有影响。又因为血红蛋白本身是氧化都有影响。又因为血红蛋白本身是氧化还原剂，可以与试剂中的过氧化物发生反应，致还原剂，可以与试剂中
8、的过氧化物发生反应，致使检测结果受到影响。使检测结果受到影响。黄疸：严重的黄疸对比色有影响，例如黄疸：严重的黄疸对比色有影响，例如ALT，Crea，GGT等项目受影响更为明显。等项目受影响更为明显。脂血：造成散射，波长越短越明显，对任何测定都脂血：造成散射，波长越短越明显，对任何测定都有影响。有影响。建议：对于外观异常的标本采取其它的检测手段进行分析。建议：对于外观异常的标本采取其它的检测手段进行分析。8.对特殊项目进行特殊的处理对特殊项目进行特殊的处理HbA1C：溶血剂处理半个小时以上。：溶血剂处理半个小时以上。CO2：试剂盒不能长期敞开盖子，标本尽快处理防：试剂盒不能长期敞开盖子，标本尽快
9、处理防止挥发。止挥发。NH3：含氨的抗凝剂、未去氨材质做的试管、分析：含氨的抗凝剂、未去氨材质做的试管、分析过程中受到氨的污染。标本放置会导致氨的逸出。过程中受到氨的污染。标本放置会导致氨的逸出。CU：不能使用肝素抗凝的采血管。：不能使用肝素抗凝的采血管。9.对异常结果标本的处理对异常结果标本的处理对于异常结果的标本不仅要结合临床情况进行分析，对于异常结果的标本不仅要结合临床情况进行分析，而且也要结合反应曲线进行全面分析。而且也要结合反应曲线进行全面分析。前白蛋白结果为前白蛋白结果为“0”TBA大批量做偶尔大批量做偶尔出现负值，单独没出现负值，单独没有问题有问题肝脏的损伤程度肝脏的损伤程度机器
10、交叉污染的机器交叉污染的情况情况Hot spot:有关双试剂有关双试剂R1剩余的问题剩余的问题在生化分析仪器的长期使用过程中，出现双试剂的R1剩余很多，R2已经用完。其原因是仪器在设计过程中，为了避免试剂污染，试剂探针在加入设定量的同时多加一些试剂（模拟量），设定量加入反应杯，模拟量被弃去，其模拟量随设定量不同而不同，由于R2设定试剂量小,其相对模拟量大，造成R2短缺。R1体积：80mlR2体积：40mlR1：R2=200:100R1：R2=100：50实际测试数：347，R1剩余量2.6ml实际测试数：634，R1剩余量7.1mlHot spot:有关交叉污染的分析有关交叉污染的分析1.部件
11、间化学污染的来源部件间化学污染的来源2.试剂间化学污染的类型试剂间化学污染的类型3.试剂间化学污染的判别试剂间化学污染的判别4.消除试剂间化学污染的方法消除试剂间化学污染的方法1.部件间化学污染的来源部件间化学污染的来源全自动生化分析仪发展迅速，具有多项目、多样本全自动生化分析仪发展迅速，具有多项目、多样本的处理能力，检测速度不断的提高，但由于共用的处理能力，检测速度不断的提高，但由于共用吸样针、试剂针、搅拌棒以及比色杯，当生化仪吸样针、试剂针、搅拌棒以及比色杯，当生化仪长期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起长期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化仪内污垢的积聚、测试顺序
12、安吸附力增加、生化仪内污垢的积聚、测试顺序安排不当，且常规清洗不能有效消排不当，且常规清洗不能有效消 除交叉污染时，除交叉污染时，就会增加试剂间化学污染的可能性，引起测定结就会增加试剂间化学污染的可能性，引起测定结果不准确。果不准确。1.1.试剂针污染：当试剂针在清洗不完全，或黏附试剂针污染：当试剂针在清洗不完全，或黏附力增加时，力增加时，残留试剂残留试剂可能会对下一相临检测结果可能会对下一相临检测结果造成影响。造成影响。1.2.搅拌棒污染：搅拌绑若清洗不完全，或黏附力搅拌棒污染：搅拌绑若清洗不完全，或黏附力增加时，增加时，残留试剂残留试剂可能会对下一相临检测结果造可能会对下一相临检测结果造成
13、影响。成影响。1.3.比色杯污染：当某个比色杯清洗不完全时，吸比色杯污染：当某个比色杯清洗不完全时，吸附在比色杯上的上一个项目的附在比色杯上的上一个项目的残留试剂残留试剂，可能会，可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响。造成影响。2.试剂间化学污染的类型试剂间化学污染的类型2.1.试剂成分的直接污染试剂成分的直接污染2.2.试剂成分参与反映试剂成分参与反映2.3.反应进程相同反应进程相同2.4.影响反映条件影响反映条件2.1.试剂成分的直接污染：上一测定试剂中含有下试剂成分的直接污染：上一测定试剂中含有下一测定所需要测定的物质，直接干
14、扰下一检测的一测定所需要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如：测定结果。如：AMY试剂中含有较高浓度的试剂中含有较高浓度的Ca2+；ALP（IFCC法）、法）、CK（NAC法）、法）、CK-MB（NAC法）、法）、CO2（PEPC法）、法）、AMY（EPS法）、法）、TG等试剂中含有等试剂中含有Mg2+。2.2.试剂成分参与反映：上一个试剂中含有的某种试剂成分参与反映：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如：（而干扰下一反应的测定结果。如：（1）镁测定）镁测定试剂的络合剂亦能与铁结合，影响铁有
15、铁络合剂试剂的络合剂亦能与铁结合，影响铁有铁络合剂的结合（的结合（2）CHOL试剂中含有胆固醇酯酶，可试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇测定的干扰。固醇测定的干扰。2.3.反应进程相同：上一试剂所引导的反应对下一反应进程相同：上一试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：当上一个反应产物为当上一个反应产物为H2O2时则对以时则对以Trinders反应产生颜色的测定结果
16、引起干扰。如反应产生颜色的测定结果引起干扰。如UA对对CHOL结果的影响；结果的影响；CHOL对对CREA（酶法）测（酶法）测定结果的影响；定结果的影响；GLU（氧化酶法）对（氧化酶法）对CREA测定测定结果的影响。结果的影响。2.4影响反映条件：影响下一项目的反应条件如影响反映条件：影响下一项目的反应条件如pH等，从而改变反应速率。如：（等，从而改变反应速率。如：（1）直接胆红素）直接胆红素（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干活性，对测定结果有负干扰。（扰。（2）CREA（苦味酸速率法
17、）反应条件为（苦味酸速率法）反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。到污染后反应速率会减慢。3.试剂间化学污染的判别试剂间化学污染的判别 3.1.一份样本分成两份，一份加生理盐水或其他适一份样本分成两份，一份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的某试剂，同时测定，当的稀释液，另一份加等量的某试剂，同时测定，观察结果的变化，进而确定发生试剂交叉污染时观察结果的变化，进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。造成直接干扰的项目。3.2.1.假设有假设有3个项目个项目 A，B，C，以一混合血清作，以一混合血清作为
18、标本，按以下顺序测试：为标本，按以下顺序测试：A，A，A，A，A，B，A，C，A，B，B，B，B，B，C，B，C，C，C，C，C。得到的结果分别为：。得到的结果分别为：A1，A2，A3，A4，A5，BA-B，AB-A，CA-C，AC-A，B1，B2，B3，B4，B5，CB-C，BC-B，C1，C2，C3，C4，C5。（AB-A：表示：表示B项目对项目对A项目污染时项目污染时A项目的测定项目的测定值，其余表示类同）。以值，其余表示类同）。以A2A5、B2B5、C2C5的的4次测定平均值分别作为次测定平均值分别作为A、B、C项目项目无污染时的测定值。若（无污染时的测定值。若（AB-A/A100%）
19、105%则强烈支持则强烈支持B试剂对试剂对A有交叉有交叉污染。污染。3.1.2.若上述初试验结果若上述初试验结果B对对A有污染，则可进行有污染，则可进行以下试验进行确认，测定顺序为：以下试验进行确认，测定顺序为：B,A,A,A,结果结果为：为：B，A1，A2，A3。若（。若（A1/A3100%）105%，则强烈支持，则强烈支持B对对A有交叉污有交叉污染。染。A1A3的结果可观察受的结果可观察受B污染的程度是否逐污染的程度是否逐渐减轻。渐减轻。4.消除试剂间化学污染的方法消除试剂间化学污染的方法 4.1.要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如
20、指掌，对试剂交叉污染的各种可能定原理要了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑，合理设计程序。更换试剂时应性加以考虑，合理设计程序。更换试剂时应 仔细仔细研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污染。染。4.2.合理安排检测项目的顺序，在有交叉污染的检合理安排检测项目的顺序，在有交叉污染的检测项目中间插入一个或两个非污染项目。最彻底测项目中间插入一个或两个非污染项目。最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前，以的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能。消除干扰发生的可能。4.3.当合理设置测试顺序无法消除交叉污染时，可当合理
21、设置测试顺序无法消除交叉污染时，可使用生化仪的试剂针、比色杯清晰程序，对试剂使用生化仪的试剂针、比色杯清晰程序，对试剂针、比色杯进行针、比色杯进行2次或多次清洗。用碱性清洗掖次或多次清洗。用碱性清洗掖及酸性清洗掖冲洗试剂针可以有效地避免携带污及酸性清洗掖冲洗试剂针可以有效地避免携带污染。染。4.4.选用具有抗交叉污染的试剂盒：如在游离胆固选用具有抗交叉污染的试剂盒：如在游离胆固醇试剂中添加胆固醇酯酶抑制剂，以减少胆固醇醇试剂中添加胆固醇酯酶抑制剂，以减少胆固醇酯酶水解胆固醇酯而引起对游离胆固醇测定的污酯酶水解胆固醇酯而引起对游离胆固醇测定的污染。染。Hot spot:不同型号生化仪器工作注意事项不同型号生化仪器工作注意事项贝克曼库尔特：贝克曼库尔特：CX,LX/DXC,旧旧AU,新新AU西门子：西门子：ADVIA1200/1650/1800/2400,DIMENSION日立：日立：7020/7060,7080/7100/7180/7180,7600,008/003罗氏：罗氏：P800,C311/C501/C502,C701/C702雅培：雅培：Areset,C4000/C8000/C16000东芝：东芝：TBA40,TBA120,TBA2000其他其他.
