1、第一节、典型药物的分类与性质第一节、典型药物的分类与性质第二节、鉴别试验第二节、鉴别试验第三节、特殊杂质检查第三节、特殊杂质检查第四节、含量测定第四节、含量测定 内内 容容第一节第一节 典型药物的分类与性质典型药物的分类与性质一、苯甲酸类一、苯甲酸类 1.1.典型药物典型药物（苯甲酸）（苯甲酸）COOH(Na)COOHNHCH3CH3（甲芬那酸）（甲芬那酸）（丙磺舒）（丙磺舒）COOHSO2（CH3CH2CH2)2N2.2.主要性质主要性质羧酸与苯环直接相连，具有较强酸性（用于含羧酸与苯环直接相连，具有较强酸性（用于含量测定）；量测定）；药物结构中的苯环及其取代基具有特征的紫外药物结构中的苯环
2、及其取代基具有特征的紫外和红外吸收光谱（用于鉴别和含量测定）；和红外吸收光谱（用于鉴别和含量测定）；苯甲酸及其钠盐的中性溶液与苯甲酸及其钠盐的中性溶液与FeClFeCl3 3试剂反应，试剂反应，生成赭色沉淀；生成赭色沉淀；含硫的丙磺舒受热可分解成亚硫酸盐。含硫的丙磺舒受热可分解成亚硫酸盐。二、水杨酸类二、水杨酸类 1.1.典型药物典型药物COOHOH水杨酸水杨酸COOHOCOCH3阿司匹林阿司匹林COONaOHNH2对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠双水杨酯双水杨酯COOHOOOH贝诺酯贝诺酯OCOCH3COONHCOCH3OHCOOHFF二氟尼柳二氟尼柳2.2.主要性质主要性质本类药物的基本结构为
3、邻羟基苯甲酸，能形成本类药物的基本结构为邻羟基苯甲酸，能形成分子内氢键，使酸性增强（水杨酸的酸性比苯分子内氢键，使酸性增强（水杨酸的酸性比苯甲酸强），可用酸碱滴定法测定含量；甲酸强），可用酸碱滴定法测定含量；邻位羟基的存在使得本类药物在弱酸性溶液中邻位羟基的存在使得本类药物在弱酸性溶液中可与三价铁离子生成紫色配合物；可与三价铁离子生成紫色配合物；水杨酸酯类结构易水解成游离水杨酸，游离水水杨酸酯类结构易水解成游离水杨酸，游离水杨酸类受热易脱羧降解成酚类，故本类药物应杨酸类受热易脱羧降解成酚类，故本类药物应检查游离水杨酸与酚类杂质。检查游离水杨酸与酚类杂质。OHOHO三、其他芳酸类三、其他芳酸类
4、1.1.典型药物典型药物氯贝丁酯氯贝丁酯ClO CCH3CH3COOC2H5CHCH2CHCOOHCH3H3CH3C布洛芬布洛芬2.2.主要性质主要性质与苯甲酸和水杨酸类比较，布洛芬（苯乙酸衍与苯甲酸和水杨酸类比较，布洛芬（苯乙酸衍生物）的酸性较弱，溶于中性乙醇后，可用氢生物）的酸性较弱，溶于中性乙醇后，可用氢氧化钠直接滴定。氧化钠直接滴定。氯贝丁酯（苯氧基丙酸酯衍生物）遇光不稳定，氯贝丁酯（苯氧基丙酸酯衍生物）遇光不稳定，易水解，可用两步滴定法测定含量。易水解，可用两步滴定法测定含量。布洛芬和氯贝丁酯均具有特征的紫外和红外吸布洛芬和氯贝丁酯均具有特征的紫外和红外吸收光谱，可用于鉴别。收光谱，
5、可用于鉴别。芳酸类药物的芳酸类药物的结构与性质比较结构与性质比较1.1.结构结构共同点：苯环、羧基共同点：苯环、羧基 不同点：取代基不同（如酚羟基、芳伯氨基等）不同点：取代基不同（如酚羟基、芳伯氨基等）2.物理性质物理性质 大多数为固体，具有一定的熔点；大多数为固体，具有一定的熔点；游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂；有机溶剂；芳酸类药物的芳酸类药物的结构与性质比较（续）结构与性质比较（续）3.化学性质化学性质 芳酸具游离羧基，呈酸性，其芳酸具游离羧基，呈酸性，
6、其pKapKa在在3 36 6之间，之间，属中等强度的酸或弱酸；属中等强度的酸或弱酸；l-X-X、-NO-NO2 2、-OH-OH等吸电子取代基使酸性增强；等吸电子取代基使酸性增强；l-CH-CH3 3、-NH-NH2 2等斥电子取代基使酸性减弱；等斥电子取代基使酸性减弱；l邻位取代邻位取代 间位、对位取代，尤其是邻位取间位、对位取代，尤其是邻位取代酚羟基，形成分子内氢健，酸性大为增强。代酚羟基，形成分子内氢健，酸性大为增强。芳酸类药物的芳酸类药物的结构与性质比较（续）结构与性质比较（续）3.化学性质（续）化学性质（续）芳酸酯可水解芳酸酯可水解l利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用其水解
7、得到酸和醇的性质可进行鉴别；l利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；量；l芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。杂质。芳酸类药物的芳酸类药物的结构与性质比较（续）结构与性质比较（续）3.化学性质（续）化学性质（续）芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈弱碱性，芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈弱碱性，可用双相滴定法或非水碱量法测定其含量。可用双相滴定法或非水碱量法测定其含量。取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴取代芳酸类药物可利用其取
8、代基的性质进行鉴别和含量测定。别和含量测定。l具有酚羟基的药物可用具有酚羟基的药物可用FeClFeCl3 3反应鉴别。反应鉴别。l具芳伯氨基的药物可用重氮化具芳伯氨基的药物可用重氮化-偶合反应鉴偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。别、亚硝酸钠滴定法测定含量。第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 一、与铁盐的反应一、与铁盐的反应 1.1.水杨酸及其盐类水杨酸及其盐类COOHOH6+4FeCl3COOO2Fe-3Fe+12HCl紫色紫色pH=46具酚羟基或水解后产生酚羟基的药物有此反应具酚羟基或水解后产生酚羟基的药物有此反应补充说明补充说明 1.1.阿斯匹林加水煮沸使水解后与阿斯匹林加水煮沸使水解后与
9、FeClFeCl3 3试液反应，呈试液反应，呈紫堇色；紫堇色；2.2.二氟尼柳加乙醇溶解后与二氟尼柳加乙醇溶解后与FeClFeCl3 3反应，呈深紫色；反应，呈深紫色；3.3.对氨基水杨酸钠加稀盐酸后与对氨基水杨酸钠加稀盐酸后与FeClFeCl3 3试液试液反应，呈反应，呈紫红色；紫红色；4.4.双水杨酯的稀溶液与双水杨酯的稀溶液与FeClFeCl3 3反应，呈紫色；反应，呈紫色；5.5.贝诺酯加氢氧化钠试液煮沸水解后，加盐酸至微贝诺酯加氢氧化钠试液煮沸水解后，加盐酸至微酸性后与酸性后与FeClFeCl3 3反应，呈紫堇色。反应，呈紫堇色。强酸性溶液中配位化合物分解强酸性溶液中配位化合物分解2
10、.2.苯甲酸盐苯甲酸盐COONa7+3FeCl3+2OH-COO6Fe3(OH)2+7NaCl+2Cl-OOC赭色沉淀赭色沉淀3.3.丙磺舒丙磺舒加少量加少量NaOHNaOH试液使成钠盐溶解后（试液使成钠盐溶解后（pH=5.0pH=5.06.06.0），与），与FeClFeCl3 3试液反应，生成米黄色沉淀。试液反应，生成米黄色沉淀。COOSO2（CH3CH2CH2)2N3Fe4.4.布洛芬布洛芬布洛芬的无水乙醇溶液，加高氯酸羟胺的无水布洛芬的无水乙醇溶液，加高氯酸羟胺的无水乙醇试液及乙醇试液及N,N-N,N-双环己基羧二亚胺（双环己基羧二亚胺（DCCDCC）的无水乙醇溶液，混合，在温水中加热
11、的无水乙醇溶液，混合，在温水中加热20min20min冷却后，加高氯酸铁的无水乙醇溶液，呈紫色。冷却后，加高氯酸铁的无水乙醇溶液，呈紫色。紫色紫色CONHFe/3OCHCH2CHCH3H3CH3C5.5.氯贝丁酯氯贝丁酯氯贝丁酯的乙醚溶液（氯贝丁酯的乙醚溶液（110110）数滴，加盐酸）数滴，加盐酸羟胺的乙醇饱和溶液与氢氧化钾的乙醇饱和溶羟胺的乙醇饱和溶液与氢氧化钾的乙醇饱和溶液各液各2 23 3滴，水浴加热滴，水浴加热2min2min，冷却，加稀盐酸，冷却，加稀盐酸使成酸性，加使成酸性，加1%FeCl1%FeCl3 3 溶液溶液1 12 2滴，显紫色。滴，显紫色。该反应用于羧酸及其酯类的鉴别
12、该反应用于羧酸及其酯类的鉴别CONHFe/3OClO CCH3CH3（异羟肟酸铁）（异羟肟酸铁）二、重氮化二、重氮化-偶合反应偶合反应 贝诺酯加酸水解后产生游离芳伯胺基结构，在贝诺酯加酸水解后产生游离芳伯胺基结构，在酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，再与碱性再与碱性-萘酚偶合生成橙红色沉淀。萘酚偶合生成橙红色沉淀。OCOCH3COONHCOCH3+3H2OOHCOOHNH2HCl+HO+2CH3COOHNH2+NaNO2+2HClHON2+Cl-+NaCl+2H2OHON2+Cl-HOOH+NaOHN=NHO+NaCl+H2OHO三、氧化反应三
13、、氧化反应 甲芬那酸的甲芬那酸的硫酸溶液硫酸溶液显黄色，并显黄色，并有绿色荧光有绿色荧光呈深蓝色，随呈深蓝色，随即变为棕绿色即变为棕绿色四、水解反应四、水解反应 醋酸臭气）水杨酸（白色醋酸钠水杨酸钠阿司匹林硫酸 CONa32（可溶于醋酸铵试液）（可溶于醋酸铵试液）可溶于醋酸铵（测定熔点），水杨酸白色双水杨酯稀盐酸NaOH五、分解产物的反应五、分解产物的反应1.苯甲酸盐苯甲酸盐 2.含硫的药物含硫的药物苯甲酸苯甲酸苯甲酸钠苯甲酸钠+4 42 2SOSOH H-+2 24 4HNOHNO3 32 2SOSOSOSONaNaNaOHNaOH3 3丙磺舒丙磺舒第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查 一
14、、阿司匹林中特殊杂质的检查一、阿司匹林中特殊杂质的检查 1.1.合成工艺合成工艺ONaONaCOONaCO2OHCOOHH+OHCOOH乙酰化乙酰化OCOCH3COOH+（CH3CO)2O+CH3COOH2.2.检查检查 溶液澄清度溶液澄清度未反应的酚类、及其他副反应生成的醋酸苯未反应的酚类、及其他副反应生成的醋酸苯酯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯均不溶于、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯均不溶于碳酸钠试液，而阿司匹林溶于碳酸钠试液。碳酸钠试液，而阿司匹林溶于碳酸钠试液。OHOCOCH3（CH3CO)2O（醋酸苯酯）（醋酸苯酯）COOHOHOH+COOOH（水杨酸苯酯水杨酸苯酯）COOHOCOCH3
15、OH+COOOCOCH3（乙酰水杨酸苯酯（乙酰水杨酸苯酯）水杨酸的检查水杨酸的检查水杨酸杂质来源：水杨酸杂质来源：l原料残存（生产过程中乙酰化不完全）原料残存（生产过程中乙酰化不完全）l水解产生（贮存过程中水解产生）水解产生（贮存过程中水解产生）检查原理：检查原理：l水杨酸在弱酸性溶液中与水杨酸在弱酸性溶液中与FeFe3+3+反应呈紫堇色反应呈紫堇色l阿司匹林结构中无游离酚羟基，无以上反应阿司匹林结构中无游离酚羟基，无以上反应限量限量:l原料：原料：0.1%0.1%l阿司匹林片：阿司匹林片：0.3%0.3%l阿司匹林肠溶片：阿司匹林肠溶片：1.5%1.5%易碳化物的检查易碳化物的检查检查易被硫
16、酸碳化呈色的低分子有机物质。检查易被硫酸碳化呈色的低分子有机物质。检查方法：检查方法：取供试品取供试品0.5mg置于含硫酸置于含硫酸（95.5%g/g）5ml的比色管的比色管振摇使溶解振摇使溶解静置静置15min观察颜色观察颜色对照液对照液（比色用氯化钴液（比色用氯化钴液0.25ml0.25ml，比，比色用重铬酸钾液色用重铬酸钾液0.25ml0.25ml，比色，比色用硫酸铜用硫酸铜0.40ml0.40ml，加水成，加水成5ml5ml）与对照液比较与对照液比较颜色不得更深颜色不得更深二、二、对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠中中间氨基酚间氨基酚的检查的检查 1.间氨基酚杂质来源间氨基酚杂质来源原料残存
17、（间氨基酚为原料）原料残存（间氨基酚为原料）对氨基水杨酸在潮湿空气中，露置日光或遇对氨基水杨酸在潮湿空气中，露置日光或遇热受潮时，易脱羧基，生成间氨基酚。热受潮时，易脱羧基，生成间氨基酚。COONaOHNH2-CO2H2OOHNH22.双相滴定法双相滴定法原理：原理：利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离；基酚溶于乙醚的性质，使二者分离；在乙醚提取液中加适量水和指示剂（甲在乙醚提取液中加适量水和指示剂（甲基橙），用盐酸滴定；基橙），用盐酸滴定；控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚限控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚限量；量；生成的盐酸盐在乙
18、醚中不溶，转溶于水生成的盐酸盐在乙醚中不溶，转溶于水相中。相中。3.3.离子对离子对HPLCHPLC法（内标法）法（内标法）色谱条件色谱条件填充剂：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相：流动相：磷酸二氢钠液磷酸二氢钠液(0.05mol/L)-(0.05mol/L)-磷酸氢二磷酸氢二钠钠(0.05mol/L)-(0.05mol/L)-甲醇甲醇(含氢氧化四丁含氢氧化四丁基铵基铵1.9g)(425:425:150)1.9g)(425:425:150)内标：内标：磺胺溶液（磺胺溶液（5 5g/mlg/ml）,用流动相配制。用流动相配制。流速：流速：1.5ml/min1.5ml/min
19、检测波长：检测波长：254nm254nm进样量：进样量：2020l离子对试剂和其他添加剂选用规则离子对试剂和其他添加剂选用规则 1.1.样品中含有样品中含有-COOH-COOH、-SO-SO3 3H H基团时，选用的离子对基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机胺盐，流动相通常使用试剂应是带正电荷的有机胺盐，流动相通常使用甲醇甲醇-水；水；2.2.除离子对试剂外，一般还需加入磷酸盐缓冲液，除离子对试剂外，一般还需加入磷酸盐缓冲液，以控制流动相的酸度。从而使这些酸性官能团获以控制流动相的酸度。从而使这些酸性官能团获得解离；得解离；3.3.样品中含有样品中含有-NH-NH2 2、-NH-NH-基
20、团时，选用的离子对试基团时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐；剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐；4.4.样品中同时含有样品中同时含有-NH-NH2 2、-COOH-COOH，-SO-SO3 3H H等不同性质等不同性质的基团时，则规则、或选用的离子对试剂的基团时，则规则、或选用的离子对试剂和添加剂均为合理。和添加剂均为合理。三、三、二氟尼柳中有关物质二氟尼柳中有关物质的检查的检查 二氟尼柳存在多条合成路线，产品中可二氟尼柳存在多条合成路线，产品中可能存在多种苯或联苯类合成中间体及副能存在多种苯或联苯类合成中间体及副产物，结构和性质相差较大；产物，结构和性质相差较大；使用单一的正相或反相色谱法难以
21、检出使用单一的正相或反相色谱法难以检出有关物质；有关物质；中国药典中国药典（20052005）分别采用）分别采用TLCTLC（正（正相）和反相相）和反相HPLCHPLC，以自身对照法检查有，以自身对照法检查有关物质关物质A A和和B B。1.1.有关物质有关物质A A的检查（自身高低浓度对比的检查（自身高低浓度对比法法 ）：）：吸取吸取5 5l l点样点样 精密量取适量精密量取适量加甲醇稀释成浓加甲醇稀释成浓度为度为50g/ml配制本品的甲醇溶液配制本品的甲醇溶液浓度约为浓度约为10mg/ml10mg/ml对对照照液液吸取吸取5 5l l点样点样同一硅胶同一硅胶CFCF254254薄层板薄层板
22、以正己烷以正己烷-二氧六环二氧六环-冰醋酸冰醋酸（85:10:585:10:5）为展开剂，展开后，）为展开剂，展开后，晾干，置于紫外灯晾干，置于紫外灯(254nm)(254nm)下检查下检查供供试试品品对对照照品品判断判断:控制杂质斑点个数，控控制杂质斑点个数，控制杂质种类；制杂质种类；供试品溶液所显杂质斑供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）。主斑点（或荧光强度）。优点：优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液；溶液；缺点
23、：缺点：不同物质，不同不同物质，不同R Rf f值比较，准确度较差、直观值比较，准确度较差、直观性较差。性较差。对照溶液一定量供试品溶液供试品溶液稀释溶剂溶解 S杂质对照品法杂质对照品法 判断：判断：供试品中所含杂质斑点不得供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。超过相应的杂质对照斑点。优点：优点：同一物质，同一同一物质，同一RfRf值比较，值比较，准确度高、直观性强。准确度高、直观性强。缺点：缺点：需要杂质对照品。需要杂质对照品。供供试试品品对对照照品品2.2.有关物质有关物质B B的检查的检查取有关物质取有关物质A A项下的供试品与对照液，照项下的供试品与对照液，照HPLCHPLC
24、法测定。法测定。填充剂：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相：流动相：水水-甲醇甲醇-乙腈乙腈-冰醋酸冰醋酸(55:23:30:2)(55:23:30:2)检测波长：检测波长：254nm254nm进样量：进样量：供试品和对照品各供试品和对照品各2020l l判断：判断：供试品溶液的色谱图中的各杂质峰面积供试品溶液的色谱图中的各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液的主峰面积。的和不得大于对照品溶液的主峰面积。四、四、甲芬那酸中特殊杂质甲芬那酸中特殊杂质的检查的检查 1.1.合成工艺合成工艺（邻氯苯甲酸（邻氯苯甲酸）CH3NH2H3CCOOHClCuCOOHNHCH3CH3+（2,3
25、-2,3-二甲苯胺）二甲苯胺）（甲芬那酸）（甲芬那酸）2.2.检查检查 中国药典中国药典（20052005）规定检查）规定检查“铜铜”和和“有有关物质关物质”。“铜铜”检查法检查法l 采用原子吸收分光光度法测定，铜含量的限采用原子吸收分光光度法测定，铜含量的限度：度：0.001%0.001%。a.a.供试品：供试品：加硫酸湿润加硫酸湿润炽灼至灰化完全炽灼至灰化完全取本品取本品1.0g1.0g置于石英坩埚置于石英坩埚加加0.1mol/L0.1mol/L硝酸溶液溶解，定量转硝酸溶液溶解，定量转移至移至25ml25ml容量瓶中，摇匀，即得容量瓶中，摇匀，即得加加0.1mol/L0.1mol/L硝酸溶
26、液稀硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得释至刻度，摇匀即得精密称取硫酸铜精密称取硫酸铜0.393g0.393g置于置于1000ml1000ml量瓶中量瓶中加加0.1mol/L0.1mol/L硝酸溶液溶解硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀并稀释至刻度，摇匀b.b.标准铜溶液：标准铜溶液：精密称取标准铜溶液精密称取标准铜溶液1.0ml1.0ml，置于，置于25ml25ml量瓶中量瓶中精密量取精密量取10ml10ml置于置于100ml100ml量量瓶中，加瓶中，加0.1mol/L0.1mol/L硝酸溶液硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得稀释至刻度，摇匀即得c.c.对照品溶液：对照品溶液：d.d.测定法：测定法：324
27、nm324nm处测定吸光度，处测定吸光度，A A供试品供试品A A对照品对照品 有关物质检查法有关物质检查法l 中国药典中国药典（20052005）采用高效液相色谱法）采用高效液相色谱法l填充剂：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶l流动相：流动相：l对照溶液：对照溶液：l供试液：供试液：用流动相配制成每用流动相配制成每1ml1ml中含中含1mg1mg本本品溶液品溶液用流动相配制成每用流动相配制成每1ml1ml中含中含5 5g g本品溶液本品溶液0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢铵溶液磷酸二氢铵溶液-乙腈乙腈-四氢呋喃（四氢呋喃（40:46:1440:46:14）l检测波
28、长：检测波长：254nm254nml进样量：进样量：1010l ll判断：判断：供试品中如有杂质峰，单个杂质峰面供试品中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的积不得大于对照液主峰面积的1/5;1/5;各杂质峰面积的总和不得大于对照溶各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积。液主峰面积。五、五、氯贝丁酯中特殊杂质氯贝丁酯中特殊杂质的检查的检查 1.1.合成工艺合成工艺ClOH缩合，水解缩合，水解CHCH3 3COCHCOCH3 3,CHCl,CHCl3 3,NaOH,NaOH（对氯苯酚）（对氯苯酚）（对氯苯氧异丁酸钠）（对氯苯氧异丁酸钠）ClO CCH3CH3COONa氯贝丁酯氯贝
29、丁酯ClO CCH3CH3COOC2H5ClO CCH3CH3COONa酸化酸化HClHClClO CCH3CH3COOH酯化酯化CHCH3 3CHCH5 5OH,HOH,H2 2SOSO4 4（对氯苯氧异丁酸）（对氯苯氧异丁酸）2.2.对氯酚的检查对氯酚的检查对氯酚为起始原料，且氯贝丁酯可分解产生对氯对氯酚为起始原料，且氯贝丁酯可分解产生对氯酚，其毒性大。酚，其毒性大。中国药典中国药典（20052005）采用气相）采用气相色谱法检查对氯酚。色谱法检查对氯酚。色谱柱：色谱柱：2m2m玻璃色谱柱；玻璃色谱柱；固定液：固定液：甲基硅橡胶（甲基硅橡胶（SE-30SE-30）；）；载气：载气：氮气氮气
30、 柱温：柱温：160160 检测器：检测器：氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器 对照品溶液：对照品溶液：0.0025%0.0025%对氯酚的三氯甲烷溶液对氯酚的三氯甲烷溶液 供试品溶液：供试品溶液：取本品取本品10.0g10.0g，加氢氧，加氢氧化钠试液化钠试液20ml20ml振摇提取振摇提取分取下层液，用水分取下层液，用水5ml5ml振摇洗涤，留振摇洗涤，留作挥发性物质检查作挥发性物质检查水洗液并入碱性提取液水洗液并入碱性提取液用三氯甲烷洗涤用三氯甲烷洗涤2 2次后次后加稀盐酸使成酸性加稀盐酸使成酸性 用三氯甲烷提取用三氯甲烷提取2 2次，每次，每次次5ml5ml，合并提取液，并，合并提取
31、液，并加三氯甲烷至加三氯甲烷至10ml10ml即得即得供试品中对氯酚峰面积不得大于对照品中对氯酚峰面积供试品中对氯酚峰面积不得大于对照品中对氯酚峰面积3.3.挥发性杂质的检查挥发性杂质的检查中国药典中国药典（20052005）采用气相色谱法检查在合）采用气相色谱法检查在合成过程中引入的脂类与其他挥发性物质及残留有成过程中引入的脂类与其他挥发性物质及残留有机溶剂。机溶剂。色谱条件：色谱条件：同对氯酚的检查同对氯酚的检查 供试品溶液：供试品溶液：预试溶液：预试溶液：取对氯酚项下经碱液洗涤后的本取对氯酚项下经碱液洗涤后的本品适量，经无水硫酸钠干燥即得。品适量，经无水硫酸钠干燥即得。称取供试品适量，用
32、三氯甲烷溶解称取供试品适量，用三氯甲烷溶解制成每制成每mlml约含约含10mg10mg的溶液，用于调的溶液，用于调节检测器灵敏度。节检测器灵敏度。供试品中各杂质峰面积的和，不得大于总峰面积的千分之五供试品中各杂质峰面积的和，不得大于总峰面积的千分之五第三节第三节 含量测定含量测定 一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法 1.1.直接滴定直接滴定本类药物中的游离羧基的酸性（本类药物中的游离羧基的酸性（p pK Ka3a36 6），），可用碱滴定液直接滴定。可用碱滴定液直接滴定。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（阿司匹林）（阿司匹林）阿司匹林阿司匹林 Ch.PCh.P（20052
33、005）取本品约取本品约0.4g0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）液显中性）20ml20ml，溶解后，加酚酞指示液，溶解后，加酚酞指示液3 3滴，用氢滴，用氢氧化钠滴定液（氧化钠滴定液（0.1mo1/L0.1mo1/L）滴定。每）滴定。每lmllml的氢氧化钠的氢氧化钠滴定液（滴定液（0.1mo1/L0.1mo1/L）相当于）相当于18.02mg18.02mg的的C C9 9H H8 8O O4 4。例例注：注：中性乙醇：溶解阿司匹林且防止酯键水解。中性乙醇：溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中中性性”是对中和法所用的指示剂而言；是对中和法所用的
34、指示剂而言；优点：简便、快速；优点：简便、快速；缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、酸性杂质干扰（如水杨酸）；酸性杂质干扰（如水杨酸）；适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定；只能用于合格原料药的含量测定；苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酸苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酸脂和布洛芬等的含量可采用直接滴定法测定；脂和布洛芬等的含量可采用直接滴定法测定；二氟尼柳：以甲醇二氟尼柳：以甲醇-水为溶剂，酚红为指示剂；水为溶剂，酚红为指示剂；甲芬那酸：以无水中性乙醇为
35、溶剂，以酚红为指甲芬那酸：以无水中性乙醇为溶剂，以酚红为指示剂。示剂。2.2.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法 利用阿司匹林酯类结构在碱性溶液中易于水解利用阿司匹林酯类结构在碱性溶液中易于水解的特点，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加的特点，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热水解，剩余的碱滴定液用硫酸滴定液回滴。热水解，剩余的碱滴定液用硫酸滴定液回滴。2NaOH（过量）（过量）H2SO4 Na2SO42H2OCOOHOCOCH3+2NaOHCOONaOH+CH3COONa（阿司匹林）（阿司匹林）阿司匹林阿司匹林 USPUSP（2929）取本品约取本品约1.5g1.5g，精密称定，精密称定,加入氢
36、氧化钠滴定液加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L0.5mo1/L）50.0m150.0m1，混合，缓缓煮沸，混合，缓缓煮沸10min10min，放冷，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L0.25mo1/L）滴定剩）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml1ml的氢氧化钠滴定液（的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l0.5mol/l）相当于）相当于45.04mg45.04mg的的C C9 9H H8 8O O4 4。例例注：注：优点：消除了酯键水解的干扰；优点：消除了酯键水解的干扰；缺点：酸性杂质
37、干扰缺点：酸性杂质干扰;碱受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐；当用酸回碱受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐；当用酸回滴定时，酸滴定液的消耗体积减少，致使结果偏滴定时，酸滴定液的消耗体积减少，致使结果偏高；需在相同条件下进行空白校正。高；需在相同条件下进行空白校正。阿司匹林与氢氧化钠反应的摩尔比为阿司匹林与氢氧化钠反应的摩尔比为1:21:2。氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（0.5mol/L0.5mol/L）相对于阿司匹林的）相对于阿司匹林的滴定度为：滴定度为：T=0.5T=0.51/21/2180.16=45.04(mg/ml)180.16=45.04(mg/ml)%100%0WTFVV）（）含量（W
38、W：阿司匹林样品称取量；：阿司匹林样品称取量；F F：硫酸滴定液浓度校正因素；：硫酸滴定液浓度校正因素；V V0 0、V V：分别为空白试验与样品消耗硫酸滴定液的体积（：分别为空白试验与样品消耗硫酸滴定液的体积（mlml）。）。3.3.两步滴定法两步滴定法 阿司匹林片阿司匹林片片剂中加有少量酒石酸或枸櫞酸做稳定剂，片剂中加有少量酒石酸或枸櫞酸做稳定剂，制剂工艺过程可能产生水杨酸与醋酸，不能制剂工艺过程可能产生水杨酸与醋酸，不能采用碱直接滴定法和水解后剩余滴定法，需采用碱直接滴定法和水解后剩余滴定法，需采用两步法。采用两步法。第一步第一步:中和中和酒石酸枸橼酸水杨酸醋酸+NaOH钠盐+H2OCO
39、OHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2OCOONaOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa(定量过量）?第二步第二步:水解后剩余滴定水解后剩余滴定 2NaOH（过量）（过量）H2SO4 Na2SO42H2O阿司匹林片阿司匹林片取本品取本品1010片，精密称定，研细，精密称取适量（约相片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林当于阿司匹林0.3g0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液加酚酞指示液3 3滴，滴加氢氧化钠滴定液滴，
40、滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L0.1mol/L)至 溶 液 显 粉 红 色，再 精 密 加 氢 氧 化 钠 滴 定 液至 溶 液 显 粉 红 色，再 精 密 加 氢 氧 化 钠 滴 定 液(0.1mol/L)40m1(0.1mol/L)40m1，置水浴上加热，置水浴上加热1515分钟并时时振摇，分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液迅速放冷至室温，用硫酸滴定液(0.05mol/L0.05mol/L)滴定，滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每并将滴定的结果用空白试验校正。每lmllml的氢氧化钠的氢氧化钠滴定液滴定液(0.1mo1/L)(0.1mo1/L)相当于相当于18.02mg
41、18.02mg的的C C9 9H H8 8O O4 4。例例注：注：消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰;阿司匹林肠溶片和氯贝丁酯采用同法测定阿司匹林肠溶片和氯贝丁酯采用同法测定;氯贝丁酯：消除供试品中共存的酸性杂质氯贝丁酯：消除供试品中共存的酸性杂质;氢氧化钠与阿司匹林反应摩尔比为氢氧化钠与阿司匹林反应摩尔比为1:11:1；故氢氧化；故氢氧化钠的滴定度为：钠的滴定度为：T=0.1T=0.11/11/1180.16=18.02180.16=18.02（mg/ml)mg/ml)片剂含量测定结果的计算片剂含量测定结果的计算%100%0标示量平均片重）
42、（标示量smFVVT二、二、亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法 具芳伯氨基的药物（如氨基水杨酸钠），具芳伯氨基的药物（如氨基水杨酸钠），能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量发生重能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐。可采用亚硝酸氮化反应，生成重氮盐。可采用亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠及其制剂钠滴定法测定对氨基水杨酸钠及其制剂的含量。的含量。+2HClAr NH2 +NaNO2+NaCl+2H2OArCl-+NN三、双相滴定法三、双相滴定法芳酸碱金属盐（如苯甲酸钠）易溶于水，芳酸碱金属盐（如苯甲酸钠）易溶于水，呈碱性，可用酸滴定液滴定；呈碱性，可用酸滴定液滴定；滴定过程中析出的游离苯甲酸
43、微溶于水，滴定过程中析出的游离苯甲酸微溶于水，具有一定的酸性，使溶液浑浊且形成缓具有一定的酸性，使溶液浑浊且形成缓冲体系，滴定终点冲体系，滴定终点pHpH突跃不明显；突跃不明显；苯甲酸溶于有机溶剂，在水相中加入不苯甲酸溶于有机溶剂，在水相中加入不相混溶的有机溶剂，可将滴定过程中产相混溶的有机溶剂，可将滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取出来，降低苯甲酸生的苯甲酸不断萃取出来，降低苯甲酸在水相的量，使终点易于判断。在水相的量，使终点易于判断。COONa+HClCOOH+NaCl水乙醚苯甲酸钠苯甲酸钠取本品取本品1.5g1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水，精密称定，置分液漏斗中，加水25m125m1
44、、乙醚乙醚50ml50ml及甲基指示液及甲基指示液2 2滴，用盐酸滴定液滴，用盐酸滴定液(0.5mo1/L)(0.5mo1/L)滴定，边滴滴定，边滴边边振摇，至水层显橙红色，分取水层，置振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml5ml洗涤，洗液并入锥形洗涤，洗液并入锥形瓶中瓶中,加乙醚加乙醚20m120m1，继续用盐酸滴定液滴定，至水层，继续用盐酸滴定液滴定，至水层显持续的橙红色。每显持续的橙红色。每1ml1ml的盐酸滴定液的盐酸滴定液(0.5mol/L)(0.5mol/L)相相当于当于72.06mg72.06mg的的C C7 7H H5 5NaO
45、NaO2 2。注：注：优点：消除了反应产物的干扰优点：消除了反应产物的干扰;乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底的中和反应进行到底;滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。点清晰。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法1.1.直接分光光度法直接分光光度法贝诺酯的取代苯结构在乙醇溶液中，在贝诺酯的取代苯结构在乙醇溶液中，在240nm240nm处有最大吸收，可用于含量测定。处有最大吸收，可用于含量测定
46、。2.2.离子交换离子交换-紫外分光光度法紫外分光光度法氯贝丁酯在氯贝丁酯在226nm226nm处有最大吸收，但对处有最大吸收，但对-氯酚等氯酚等亦有吸收，干扰测定。亦有吸收，干扰测定。氯贝丁酯不发生电离，而对氯贝丁酯不发生电离，而对-氯酚等可发生酸氯酚等可发生酸性解离，采用阴离子交换色谱分离后，再用紫性解离，采用阴离子交换色谱分离后，再用紫外外-可见分光光度法测定。可见分光光度法测定。3.柱分配色谱柱分配色谱紫外分光光度法紫外分光光度法经柱色谱分离后，经柱色谱分离后，可同时定量测定阿司匹林胶可同时定量测定阿司匹林胶囊中阿司匹林和水杨酸的含量囊中阿司匹林和水杨酸的含量 水杨酸的限量测定水杨酸的
47、限量测定固定相：固定相：洗脱液：洗脱液：冰醋酸冰醋酸-水饱和乙醚溶液水饱和乙醚溶液(110)(110)；测定波长：测定波长：306nm306nm上层为硅藻土上层为硅藻土3g3g和新制和新制FeClFeCl3 3-尿素尿素试剂试剂2ml2ml的混合物；下层为硅藻土的混合物；下层为硅藻土1g1g和磷酸液（和磷酸液（5mol/L5mol/L）0.5ml0.5ml的混的混合物。合物。注：注：水杨酸与三氯化铁水杨酸与三氯化铁-尿素生成紫色配位化合物，尿素生成紫色配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上保留于硅藻土色谱柱上;用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化合物移动较慢合
48、物移动较慢;以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷洗脱。离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷洗脱。注：注：在硅藻土在硅藻土-NaHCO-NaHCO3 3色谱柱中，阿司匹林及水杨酸成钠色谱柱中，阿司匹林及水杨酸成钠盐保留在柱上，先用三氯甲烷洗脱除去中性或碱性盐保留在柱上，先用三氯甲烷洗脱除去中性或碱性杂质。杂质。再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，继而被三氯甲烷再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，继而被三氯甲烷洗脱。洗脱。阿司匹林含量测定阿司匹林含量测定固定相：固定相：洗脱液：洗脱液：冰醋酸三氯甲烷冰醋酸三氯甲烷(110)(110)测定波
49、长：测定波长：280nm280nm硅藻土硅藻土3g3g和新制和新制NaHCONaHCO3 3(110)(110)试剂试剂2ml2ml的混合物；的混合物；五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法药物制剂中的杂质、辅料及稳定剂，常干扰主药物制剂中的杂质、辅料及稳定剂，常干扰主成分的含量测定。成分的含量测定。中国药典中国药典（20052005）采用）采用HPLCHPLC测定阿司匹林测定阿司匹林肠溶胶囊、栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、肠溶胶囊、栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、糖浆剂等的含量。糖浆剂等的含量。填充剂：填充剂：十八烷基硅烷键硅胶十八烷基硅烷键硅胶流动相：流动相：1%1%冰醋酸冰醋酸-甲醇（甲
50、醇（50:5050:50）测定波长：测定波长：280nm280nm1.1.鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是（）鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是（）A.A.碘化钾碘化钾 B.B.碘化汞钾碘化汞钾C.C.三氯化铁三氯化铁 D.D.硫酸亚铁硫酸亚铁E.E.亚铁氰化钾亚铁氰化钾 自测题自测题2.阿司匹林片阿司匹林片片剂可采用的测定方法为（）片剂可采用的测定方法为（）A.A.非水滴定法非水滴定法B.B.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法C.C.两步滴定法两步滴定法D.D.柱色谱法柱色谱法E.E.双相滴定法双相滴定法 3.3.两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml
