菌种的管理和保藏课件.pptx

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1、 试验过程中,生物样本可能是最敏感的,因 为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和 贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应 标准化,使尽可能减少菌种污染和生长特性的 改变。按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结 果一致性的重要保证。药品微生物检验用的试验菌应来自认药品微生物检验用的试验菌应来自认可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株,可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株,或使用与标准菌株所有相关特性等效的商或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。业派生菌株。工作菌株不可代替标准菌株,标准菌株的商业工作菌株不可代替标准菌株,标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。衍生物仅可用作工作菌株。二

2、、菌种的传代和使用二、菌种的传代和使用 工作菌种的传代次数应严格控制,工作菌种的传代次数应严格控制,不得超过不得超过5代,(从菌种保藏中心获代,(从菌种保藏中心获得的标准菌株为第得的标准菌株为第0代)防止过度的代)防止过度的传代造成菌种变异。传代造成菌种变异。细菌的接种、分离和培养细菌的接种、分离和培养三、菌种的检查与复壮三、菌种的检查与复壮实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理制度制度建立菌种建立菌种建立菌种建立菌种。菌悬液的制备方法与保存菌悬液的制备方法与保存 采用经验证的方法制备菌悬液,除另有规定外,微生采用经验证的方法制备菌悬液,除另有

3、规定外,微生物限度试验用菌悬液的制备如下:物限度试验用菌悬液的制备如下:1、接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中,的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中,培养培养1824小时小时.2、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中,培养改良马丁琼脂培养基中,培养2448小时。小时。上述培养物用上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数含菌数为为10100cfu的菌悬液。的菌悬液。3、接种黑曲霉的

4、新鲜培养物至改良马丁琼脂接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,培养斜面培养基中,培养57天。天。加入加入35ml 含含0.05(v/v)聚山梨酯)聚山梨酯80的的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,用无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05(v/v)聚山梨酯)聚山梨酯80的的0.9%无菌氯化钠无菌氯化钠溶液制成每溶液制成每1ml含孢子数含孢子数50100cfu的孢子悬的孢子悬液。液。4、菌悬液制备后应在菌悬液制备后应在2小时内使用,若保存在小时内使用,若保存在28的菌悬液可以在的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉小时内使用。黑曲霉也可制成稳定的孢子悬液保存在也可制成稳定的孢子悬液保存在28,在验证,在验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。

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