1、设备清洗分析方法验证王昭琼2013.06问题：l设备清洁分析方法验证主要用到的用具、溶剂、仪器？l为保证结果准确，这些需不需要验证？l最先应该从哪开始验证？l总论：设备清洁验证过程中使用的仪器、试剂、检验方法必须是经过验证或确认，并符合要求。清洁分析方法回收率验证设备清洗分析方法回收率验证主要包括两大类l取样方法验证 l检验方法验证 取样方法验证 l设备清洗剂的选择原则：l1.清洗剂应能有效溶解残留物，不腐蚀设备且本身易清除。l2.应考虑安全无毒害，能用低毒溶解的绝不用高毒或剧毒（如，可以用醇溶解的残留，在清洗剂的选择上，一般首选乙醇，不能首选甲醇或其他醇类溶剂）l3.在考虑环境安全的基础上，
2、应选择对环境无污染或易被无害处理的清洗剂。l4.选择的清洗剂的成分应明确，单一。（家用清洗剂一般不要用，因七成分复杂，未知成分太多）l4.满足以上要求的前提下应尽量廉价。取样方法验证l棉签取样方法验证l1.首先是确定取样棉签、溶解用溶剂、取样员操作。l2.以上情况确定后，制定一定的取样操作方法进行回收率试验，以证明用指定品牌的棉签和溶剂按规定的擦拭方法进行取样回收率验证，符合要求。棉签的品牌和产地应在验证方案中明确，溶剂应根据需清洗的残留成分而定，（如，在酸碱中能溶解的残留，一般可以采用用水或酸碱作为擦拭溶剂）取样方法验证l3.棉签取样回收率验证步骤l第一步：先做溶剂溶解待测组分的回收率（待测
3、组分的浓度应参照与待测主成分相同的对照溶液的浓度确定）l第二部：做棉签吸附回收率的验证（将已知浓度的对照溶液的一定体积（100ul）滴定至待选择的棉签上的，干燥后，将棉签放置于含一定体积（5ml）的试剂中，超声以加速溶出，然后取该溶液进行化验，计算棉签的吸附回收率试验。）l备注：这里的取一定体积的标准溶液，溶解到一定体积的溶液中，这个参数的确定应在满足分析方法的线性范围内。取样方法验证l第三部：擦拭次数的验证（去经验证符合要求的棉签用选定的擦拭溶剂润湿擦拭棉签，按擦试图进行擦拭，次数可定为1次、2次、3次。每个擦拭次数一个样品）【准备一个与设备表面材质相同的板材；在板材上划出100mm100m
4、m的区域；将5倍限度量的待检测物溶液，定量装入经校验的微量注射器中（一般选用经校验经校验的气相进样针）；将其尽量均匀地涂布在100mm100mm的区域内；自然干燥或用电吹风吹干板材；用选定的擦拭溶剂湿润擦拭棉签按擦拭图进行擦拭次数取样。重复上述操作1次、2次、3次；将擦拭棉签分别放入棉签管中，加入预定溶剂5ml，超声溶解；用经验证或确认的检验方法检验，计算回收率和回收率的RSD】l4.接受标准：总回收率一般不低于70%（企业可以根据实际情况确定），多次取样回收率的标准偏差应不大于20%取样方法验证取样方法验证l淋洗取样方法验证l1.首先确定淋洗溶剂或淋洗水、淋洗速度：淋洗溶剂的溶解度：选取淋洗
5、溶剂时，保证最大程度的能使待测组分全部溶解到淋洗溶剂中。淋洗溶剂不与设备表面发生相溶，而且易于清除；淋洗速度的确认：主要以生产长期积累经验而定。l2.以上情况确定后，制定一定的取样操作方法进行回收率试验，以证明用指定淋洗溶剂会淋洗水按规定的淋洗方法进行取样回收率验证，符合要求。l3.样品一般是浓缩后按分析方法处理后测定。但要注意待测组分的热敏感性。取样方法验证l4.最终淋洗法取样回收率验证步骤l第一步：选择同生产设备材质相同，形态相似的管道。l第二步：在管道内表面涂抹一定量（涂抹量取决于分析方法测量范围的标准化合物，待干燥后，使用一定体积的淋洗溶剂采用一定的速度冲洗管路。l第三步：在管道的下游
6、末端出口处置一干净的体积足够大的容器，收集最后一次的全部淋洗液，待冲洗完成后，吸取一定体积的均匀的淋洗液样品测试，并计算回收率。l5.接受标准：l5.1回收率通常应不低于95%。l5.2外观检查即清洗后的淋洗溶液样品同淋洗前的淋洗溶液做视觉比较检查，确定是否有颜色差异和异物存在；如果有上述现象发生，可直接判定样品不合格。检验方法验证l限度方法验证l定量方法验证在清洗分析方法验证中一并开展 清洁分析方法的验证l分析方法：是为完成某一检测项目而设定和建立的测试方法，一般包括分析仪器及仪器参数、试剂、系统适用性试验、供试品溶液制备、对照品溶液制备、测定、计算及测试结果的报告等。l分析放验证的前提条件
7、：仪器、人员、物料、方法、环境。分析方法的验证内容：根据不同的分析方法，主要包括以下内容。l1.专属性：因活性成分在样品中含量很低，在进行专属性验证时，无需考虑正常样品中的杂质、降解产物的影响，只需考虑辅料及空白溶剂的影响。l1.1专属性检查需要注意的问题：l1.1.41波长的选择l1.1.2每次试验时必须运行空白样品l1.1.3试剂、玻璃容器、流动相和过滤介质可能会影响方法的专属性。l1.1.4HPLC进样顺序l空白溶剂辅料混合物标准溶液l空白溶剂标准溶液进样系统清洗辅料混合物l1.2接受标准l1.2.1潜在的干扰成分不会对方法的性能产生负作用。对于色谱检测方法，杂志之间、杂质与主峰之间的分
8、离度1.0l1.2.2空白对照应无干扰。l2线性：系指在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度直接呈线性关系的程度。线性是定量测定基础，所以定量分析方法需要进行线性验证而定性清洗分析方法无需做线性验证。l2.1线性验证一般制备5个浓度的溶液（通常选取限度的50%、80%、100%、120%和150%5个浓度，每个浓度制备三个样品）l2.2线性的接受标准：线性的相关系数不低于0.98.l3.范围：系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法使用的高低限浓度或量的区间；l3.1范围一般采用线性等试验的数据结果进行统计分析计算。l3.2 范围的接受标准：通常定量清洗分析方法范围为测试浓度
9、的50%-150%。l4.精密度：系指在规定的条件下，从同一均匀样品中，经多次取样测定所的结果之间的接近程度。一般用偏差（d）、标准偏差（SD）、相对标准偏差（RSD）。l4.1精密度一般用重复性、中间精密度和重现性表示精密度l4.1.1重复性：系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔（当天之内），由同一分析人员测定所得结果的接近程度。在方法规定的线性范围内至少做3个浓度9个样品（80%、100%和120%）或在100%的试验浓度，至少测试6次。l4.1.2 中间精密度：系指同一实验室不同日期、不同仪器、不同人员对同一样品、采用同一方法处理样品所得结果之间的接近程度。（同一批样品每位分析员准备6
10、份进行测量，计算两人之间平均值的差异）精密度l4.1.3重现性：（清洁验证试验采取的方法不做，因此方法一般不作为法定分析方法收载。l4.2精密度接受标准l4.2.1重复性：定量清洗分析方法验证时，活性成分的RSD10%。l4.2.2 中间精密度：定量清洗分析方法验证时，平均六份样品的RSD10%。两人之间的平均值之差的相对值10%。l5.检测限和定量限l5.1检测限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被检测出的最小量；定量限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。l5.2杂质限度检查是应验证其方法的检测限；杂质定量检查时应验证其方法的定量限。l2.5.3检测限和定量限用信噪比表示。信噪比的测定时通过比较含已知低浓度被分析物的样品与空白样品的测试信号，确定被分析物可被确切地检测的最小浓度，典型的信噪比为3:1；对于定量限典型的信噪比为10:1.l6.样品溶液的稳定性：通常样品室温或5冰箱冷藏放置24-72小时，测定结果应不低于初始值的90%l6.1试验方法：l6.1.1按照待验证的清洗分析方法中规定的标准品溶液制备方法，平行制备六份，进样分析其含量。l6.1.2室温或冰箱冷藏一定时间后，重新配置两份标准品溶液，将放置一段时间的标准品当作样品进行分析，以确定其降解度。
