1、第四章第四章 生药的安全性评价生药的安全性评价 药物的最基本要求：药物的最基本要求：安全安全。影响生药安全性的主要因素：影响生药安全性的主要因素：（1 1）生药含有的内源性次生代谢产物生药含有的内源性次生代谢产物 （2 2）外源性物质外源性物质：如重金属和有害元素、：如重金属和有害元素、农药残留、二氧化硫、黄曲霉素等。农药残留、二氧化硫、黄曲霉素等。本章内容本章内容生药中内源性有害物质的检测生药中内源性有害物质的检测1生药中重金属和有害元素的检测生药中重金属和有害元素的检测2生药中农药残留的检测生药中农药残留的检测3生药中其他有害物质的检测生药中其他有害物质的检测4第一节第一节 生药中内源性有
2、害物质的检测生药中内源性有害物质的检测 一、生药内源性有害物质（一、生药内源性有害物质（endogenous harmful substances）生药内源性有害物质主要包括生药内源性有害物质主要包括肝肝毒性毒性成分成分和和肾毒性成分肾毒性成分等。等。u 1、肝毒性成分肝毒性成分 吡咯里西啶生物碱吡咯里西啶生物碱(heptotoxic pyrro1izidine alkaloids，HPAs)是目前是目前已知的最重要的植物来源的肝毒性成分，已知的最重要的植物来源的肝毒性成分，其共同的结构特征是其共同的结构特征是1,2位具双键的不饱位具双键的不饱和和necine酯，如野酯，如野百合碱百合碱(mo
3、nocrotaline)和和千里光碱千里光碱(senecionine)。NOOH3CHOCH3OHH3COOHNHOOCH3OOCH3CH3HO千里光千里光碱碱野百合野百合碱碱 这类生物碱本身没有毒性，毒性来自这类生物碱本身没有毒性，毒性来自其在体内其在体内(主要是肝脏主要是肝脏)的代谢产物的代谢产物代谢代谢吡咯吡咯(metabo1ic pyrro1es)代谢吡咯代谢吡咯具很强的亲电性，能迅速地具很强的亲电性，能迅速地同有关的酶、蛋白、同有关的酶、蛋白、DNA及及RNA结合，结合，引起各种毒性反应。引起各种毒性反应。由于由于吡咯里西啶生物碱（吡咯里西啶生物碱（HPAs）在在肝脏脱氢后形成的代谢
4、产物非常活泼，肝脏脱氢后形成的代谢产物非常活泼，故故肝脏肝脏既是既是代谢吡咯代谢吡咯的形成场所，又是的形成场所，又是其毒性的靶器官其毒性的靶器官 摄入摄入HPAs引起的主要病变是肝小静引起的主要病变是肝小静脉阻塞性疾病脉阻塞性疾病(HVOD)，表现为急性肝炎、，表现为急性肝炎、严重腹痛、呕吐、腹泻、腹水、肝肿大、严重腹痛、呕吐、腹泻、腹水、肝肿大、黄疸、水肿。慢性黄疸、水肿。慢性HVOD可表现为轻度可表现为轻度恶心、厌食、疲劳或肝肿大。如不治疗，恶心、厌食、疲劳或肝肿大。如不治疗，可发展为肝硬变和坏死。除了亚急性可发展为肝硬变和坏死。除了亚急性HVOD外，其余情况下总是表现为血清外，其余情况下
5、总是表现为血清肝酶水平升高。肝酶水平升高。流行病学调查显示：在南非、阿富汗、流行病学调查显示：在南非、阿富汗、伊朗、牙买加、印度及前苏联等国家，伊朗、牙买加、印度及前苏联等国家，大量肝病的发生与食用含大量肝病的发生与食用含HPAs的谷物、的谷物、饮用含饮用含HPAs的饮料的饮料(牛奶、茶叶等牛奶、茶叶等)及服及服用含用含HPAs的草药有关。的草药有关。因服用含因服用含HPAs的草药而引起中毒死的草药而引起中毒死亡的现象时有报道，从而引起国际医药亡的现象时有报道，从而引起国际医药学界的关注。学界的关注。世界上约有世界上约有3%的有花植物（的有花植物（6000余种）含余种）含有有HPAs，其中，其
6、中95%以上集中于以下科属，即菊以上集中于以下科属，即菊科的科的千里光属、橐吾属、泽兰属、菊三七属和千里光属、橐吾属、泽兰属、菊三七属和蜂斗菜属，紫草科所有属，豆科猪屎豆属，兰蜂斗菜属，紫草科所有属，豆科猪屎豆属，兰科羊耳蒜属科羊耳蒜属。其它少量分布于厚壳科、玄参科、。其它少量分布于厚壳科、玄参科、夹竹桃科、毛茛科、百合科等。夹竹桃科、毛茛科、百合科等。初步统计显示含初步统计显示含HPAs的中草药共的中草药共38种种，其，其中临床常用或较常用的有中临床常用或较常用的有12种，如种，如农吉利、猪农吉利、猪屎豆、千里光、款冬、佩兰等。屎豆、千里光、款冬、佩兰等。此外，民间使用的一些山紫菀类药材，如
7、此外，民间使用的一些山紫菀类药材，如大黄橐吾、大黄橐吾、宽舌橐吾、齿叶橐吾等，其根及根宽舌橐吾、齿叶橐吾等，其根及根茎中茎中HPAs含量很高，毒性很大。含量很高，毒性很大。农农吉利吉利猪屎豆猪屎豆千里光千里光款冬款冬佩佩兰兰大黄橐吾大黄橐吾 u2、肾毒性成分肾毒性成分 马兜铃酸（马兜铃酸（aristolochic acid，AA）类化合）类化合物在结构上属于物在结构上属于3,4-次甲二氧基次甲二氧基-10-硝基硝基-1-菲酸菲酸衍生物，普遍存在于马兜铃科植物中，包括马衍生物，普遍存在于马兜铃科植物中，包括马兜铃酸兜铃酸、III、IV等。等。OORNO2COOHAristolochic acid
8、 I R=OCH3Aristolochic acid II R=H 含马兜铃酸的中草药可引起肾损害。含马兜铃酸的中草药可引起肾损害。1993年，比利时学者报道了一些长期服年，比利时学者报道了一些长期服用含广防己减肥药的年轻女性发生慢性用含广防己减肥药的年轻女性发生慢性肾衰竭，这种肾衰竭表现为肾脏进行性肾衰竭，这种肾衰竭表现为肾脏进行性快速纤维化并伴有肾萎缩，国外称为快速纤维化并伴有肾萎缩，国外称为“中草药肾病中草药肾病”（Chinese herbs nephropathy，CHN）。国内学者依据其）。国内学者依据其毒性成分为马兜铃酸，建议将其称为毒性成分为马兜铃酸，建议将其称为“马兜铃酸肾病马
9、兜铃酸肾病”（aristolochic acid nephropathy，ANN）。）。世界上大约有世界上大约有200200多种马兜铃属植物，其中作为药多种马兜铃属植物，其中作为药用的有用的有2020多种。我国应用较多的马兜铃属药材有马兜多种。我国应用较多的马兜铃属药材有马兜铃（北马兜铃或马兜铃的果实）、青木香（北马兜铃铃（北马兜铃或马兜铃的果实）、青木香（北马兜铃或马兜铃的根）、天仙藤（北马兜铃或马兜铃的地上或马兜铃的根）、天仙藤（北马兜铃或马兜铃的地上部分）、关木通（东北马兜铃的藤茎）、寻骨风（绵部分）、关木通（东北马兜铃的藤茎）、寻骨风（绵毛马兜铃的全草）、广防己（广防己的根）和朱砂莲毛
10、马兜铃的全草）、广防己（广防己的根）和朱砂莲（朱砂莲的根茎）等。（朱砂莲的根茎）等。马马兜兜铃铃青青木香木香关关木通木通寻寻骨骨风风广防己广防己u3、生药中的其他毒性成分生药中的其他毒性成分 生药中内源性有毒成分还包括一些其他的生药中内源性有毒成分还包括一些其他的结构类型。如毛茛科乌头属植物所含乌头碱对结构类型。如毛茛科乌头属植物所含乌头碱对中枢神经表现出先兴奋后抑制作用，可致呼吸中枢神经表现出先兴奋后抑制作用，可致呼吸中枢麻痹及中枢性血压下降，对心脏的损害则中枢麻痹及中枢性血压下降，对心脏的损害则表现为心悸、胸闷、血压下降、心律失常、心表现为心悸、胸闷、血压下降、心律失常、心率减慢或过速，甚
11、至可能发生心跳骤停、急性率减慢或过速，甚至可能发生心跳骤停、急性心源性脑缺血综合征等。心源性脑缺血综合征等。乌头乌头 夹竹桃科、萝藦科植物所含强心苷类成分夹竹桃科、萝藦科植物所含强心苷类成分则较易产生心脏毒性；则较易产生心脏毒性；茄科植物所含莨宕烷类生物碱为茄科植物所含莨宕烷类生物碱为M-胆碱受胆碱受体阻滞剂，中毒时可抑制呼吸中枢；体阻滞剂，中毒时可抑制呼吸中枢；夹夹竹桃竹桃颠颠茄茄 马钱子所含吲哚类生物碱如士的宁对中枢马钱子所含吲哚类生物碱如士的宁对中枢神经表现出先兴奋后抑制作用；苦杏仁、桃仁神经表现出先兴奋后抑制作用；苦杏仁、桃仁等所含苦杏仁苷经酶解后可释放出剧毒的氢氰等所含苦杏仁苷经酶解
12、后可释放出剧毒的氢氰酸；苍耳子、蓖麻子所含毒蛋白可致严重的肝、酸；苍耳子、蓖麻子所含毒蛋白可致严重的肝、肾损害等。肾损害等。马钱马钱子子苍苍耳耳 二、二、生药中主要的内源性有害物质的检测生药中主要的内源性有害物质的检测 方法举例方法举例 生药中吡咯里西啶生物碱和马兜铃酸生药中吡咯里西啶生物碱和马兜铃酸常用的检测方法是常用的检测方法是高效液相色谱法、高高效液相色谱法、高效毛细管电泳及其与质谱的联用技术效毛细管电泳及其与质谱的联用技术。色谱色谱-质谱条件：色谱柱：质谱条件：色谱柱：Waters XBridgeTM C18 色谱柱色谱柱(2.1100mm，3.5m)；流动相：；流动相：乙腈乙腈-0.
13、5%甲酸（甲酸（7 93）；流速：）；流速：0.3mL/min；柱温：柱温：30；进样量；进样量2 l；质谱检测器，；质谱检测器，ESI正离子正离子模式下选择模式下选择m/z 366.4离子进行检测；毛细管电压：离子进行检测；毛细管电压：3.0 kV；锥孔电压：；锥孔电压：55V；离子源温度：；离子源温度：120；脱；脱溶剂温度：溶剂温度：400；锥孔气流速：；锥孔气流速：50L/h；脱溶剂气；脱溶剂气流速：流速：400 L/h。千里光中阿多尼弗林碱高效液相色谱千里光中阿多尼弗林碱高效液相色谱-质谱分析质谱分析12A-1A-2B-1B-212A.对对照品；照品；B.样样品；品；1.野百合野百合
14、碱碱；2.阿多尼弗林阿多尼弗林碱碱三、生药中主要的内源性有害物质限量三、生药中主要的内源性有害物质限量 生药中的内源性有害物质可分为两种情况：生药中的内源性有害物质可分为两种情况：（1）仅是有毒成分但不是有效成分）仅是有毒成分但不是有效成分，如苍耳子，如苍耳子中的苍术苷、千里光中的吡咯里西啶类生物碱中的苍术苷、千里光中的吡咯里西啶类生物碱等；等；（2）既是有毒成分又是有效成分）既是有毒成分又是有效成分，即以其毒性，即以其毒性来治疗疾病，如附子中的乌头碱，马钱子中的来治疗疾病，如附子中的乌头碱，马钱子中的士的宁等。士的宁等。为了保证临床用药安全有效，需要对生药中为了保证临床用药安全有效，需要对生
15、药中内源性有害物质规定限量。内源性有害物质规定限量。对于第一种情况，需要规定含量限量或服用限量（上限）对于第一种情况，需要规定含量限量或服用限量（上限）WHO专门制订了关于专门制订了关于HPAs的健康及安全指南，认为的健康及安全指南，认为致肝小静脉闭塞病的每日最高摄入量为致肝小静脉闭塞病的每日最高摄入量为0.015mg/kg，即相当于即相当于70 kg体重成人每天最高摄入量不得超过体重成人每天最高摄入量不得超过1mg；德国卫生部德国卫生部规定，内服含规定，内服含HPAs的植物药制剂，每天摄的植物药制剂，每天摄取量不得超过取量不得超过1 g，外用时每天用量不得超过，外用时每天用量不得超过100
16、g。中国药典中国药典（2010年版）年版）规定千里光含阿多尼弗林碱规定千里光含阿多尼弗林碱（adonifoline）不得超过）不得超过0.004%，药材的每天最大用量不，药材的每天最大用量不得超过得超过30g。对于第二种情况，则应规定含量幅度（上、对于第二种情况，则应规定含量幅度（上、下限）下限）中国药典中国药典（2010年版）年版）规定川乌含乌头规定川乌含乌头碱、次 乌 头 碱 和 新 乌 头 碱 的 总 量 应 为碱、次 乌 头 碱 和 新 乌 头 碱 的 总 量 应 为0.050%0.17%，马钱子含士的宁应为，马钱子含士的宁应为1.20%2.20%。第二节第二节 生药中重金属和有害元素
17、的检测生药中重金属和有害元素的检测 生药中一类重要的外源性有害物质（生药中一类重要的外源性有害物质（exogenous harmful substances）就是重金属及有害元素。常见）就是重金属及有害元素。常见对人体有害的元素和重金属元素主要有对人体有害的元素和重金属元素主要有砷、汞、铅、砷、汞、铅、镉、铜、铝等。镉、铜、铝等。来源：来源：（1）与植物生长的环境条件如土壤、大气、与植物生长的环境条件如土壤、大气、水、化肥、农药的施用等有关水、化肥、农药的施用等有关 （2）与植物本身的遗传特性和对该类元素）与植物本身的遗传特性和对该类元素的富集能力等有关。的富集能力等有关。1.生药中重金属和有
18、害元素的检测方法生药中重金属和有害元素的检测方法 重金属总量常用重金属总量常用硫代乙酰胺或硫化钠显色硫代乙酰胺或硫化钠显色反应比色法测定反应比色法测定。有害元素砷常用有害元素砷常用古蔡法或二乙基二硫代氨基古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸银法测定。甲酸银法测定。单个重金属和有害元素测定方法有单个重金属和有害元素测定方法有原子吸原子吸收光谱法和电感耦合等离子体质谱法收光谱法和电感耦合等离子体质谱法。中国药典中国药典（2010年版）附录已对这些年版）附录已对这些测定方法进行了规范。测定方法进行了规范。原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法(atomic absorption spectrophotomet
19、ry,AAS)的测定对象是呈原子状态的金的测定对象是呈原子状态的金属元素和部分非金属元素，如铅、镉、砷、汞、铜等，属元素和部分非金属元素，如铅、镉、砷、汞、铜等，系由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品经原子化系由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品经原子化产生原子蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸产生原子蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，通过测定辐射光强度减弱的程度，求出供试品中收，通过测定辐射光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量。待测元素的含量。原子吸收一般遵循分光光度法的吸收定律，通常通原子吸收一般遵循分光光度法的吸收定律，通常通过比较标准品溶液和供试品溶液的吸光度，求得
20、供试过比较标准品溶液和供试品溶液的吸光度，求得供试品中待测元素的含量。品中待测元素的含量。电感耦合等离子体质谱法电感耦合等离子体质谱法(inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS)是将被测物质用电是将被测物质用电感耦合等离子体离子化后，按离子的质荷比分离，测感耦合等离子体离子化后，按离子的质荷比分离，测量各种离子谱峰的强度的一种分析方法。量各种离子谱峰的强度的一种分析方法。等离子体是由自由电子、离子和中性原子或分子等离子体是由自由电子、离子和中性原子或分子组成，总体上成电中性的气体，其内部温度高达几千组成，总体上成电中性的气体，其内部
21、温度高达几千度至一万度。度至一万度。样品由雾化器雾化后由载气携带从等离子体焰炬中样品由雾化器雾化后由载气携带从等离子体焰炬中央穿过，迅速被蒸发电离并通过离子引出接口或采样央穿过，迅速被蒸发电离并通过离子引出接口或采样锥导入到质量分析器，样品在极高温度下完全蒸发和锥导入到质量分析器，样品在极高温度下完全蒸发和解离，电离的百分比高，因此解离，电离的百分比高，因此几乎对所有元素均有较几乎对所有元素均有较高的检测灵敏度。高的检测灵敏度。2.生药中常见重金属和有害元素的限量生药中常见重金属和有害元素的限量 中国药典中国药典（2010年版）年版）共对共对18种药材、种药材、18种植物油脂和提取物提出重金属
22、或有害物质种植物油脂和提取物提出重金属或有害物质的限量要求。的限量要求。中国商务部于中国商务部于2005年发布了年发布了药用植物及药用植物及制剂进出口绿色行业标准制剂进出口绿色行业标准（WM/T2-2004），），规定药用植物及制剂的绿色品质标准，包括药规定药用植物及制剂的绿色品质标准，包括药用植物原料、饮片、提取物及其制剂等的重金用植物原料、饮片、提取物及其制剂等的重金属及砷盐限量：重金属总量属及砷盐限量：重金属总量20.0 mg/kg，铅，铅5.0 mg/kg，镉，镉0.3 mg/kg，汞，汞0.2 mg/kg，铜铜20.0 mg/kg，砷，砷2.0 mg/kg。中药材中药材重金属总量重金
23、属总量铅铅镉镉砷砷汞汞铜铜山楂山楂50.320.220丹参丹参50.320.220甘草甘草50.320.220白芍白芍50.320.220白矾白矾20玄明粉玄明粉2020地龙地龙30芒硝芒硝1010西瓜霜西瓜霜1010西洋参西洋参50.320.220冰片冰片52龟甲胶龟甲胶30阿胶阿胶50.320.220金银花金银花50.320.220枸杞子枸杞子50.320.220黄芪黄芪50.320.220鹿角胶鹿角胶302滑石粉滑石粉402中中国药国药典典（2010年版）中年版）中药药材重金材重金属属或有害元素的限量（或有害元素的限量（ppm）中国药典中国药典（2010年版）植物油脂和提取物重金属或有害
24、元素的限量年版）植物油脂和提取物重金属或有害元素的限量（ppm）植物油脂和提取物植物油脂和提取物重金属总量重金属总量铅铅镉镉砷砷汞汞铜铜丁香罗勒油丁香罗勒油10八角茴香油八角茴香油5人参茎叶总皂苷人参茎叶总皂苷20.220.220人参总皂苷人参总皂苷30.220.220三七三醇皂苷三七三醇皂苷20三七总皂苷三七总皂苷50.320.220丹参总酚酸提取物丹参总酚酸提取物10丹参酮提取物丹参酮提取物10灯盏花素灯盏花素50.320.2连翘提取物连翘提取物202牡荆油牡荆油10茵陈提取物茵陈提取物50.320.220莪术油莪术油102桉油桉油10积雪草总苷积雪草总苷50.320.220黄芩提取物黄芩
25、提取物20银杏叶提取物银杏叶提取物20薄荷脑薄荷脑50.320.220）组织、国家或地区组织、国家或地区适用对象适用对象重金属总量重金属总量铅铅汞汞砷砷镉镉铜铜铬铬WHO草药产品草药产品100.3美国美国膳食补充剂（膳食补充剂（mg/day）0.0060.02加拿大加拿大草药材草药材100.250.32草药产品（草药产品（mg/day）0.020.020.010.0060.02膳食补充剂原料膳食补充剂原料1050.30.2德国德国草药草药50.10.2日本日本药材药材502韩国韩国草药草药3050.230.3泰国泰国草药材和成品草药材和成品1040.3马来西亚马来西亚草药成品草药成品100.5
26、5新加坡新加坡中成药中成药200.55150中国台湾中国台湾中药材中药材3022中国香港中国香港中药材（中药材（8种）种）50.220.3中国澳门中国澳门外用中药外用中药200.55150国际组织、国家或地区对中草药及其制品重金属或有害元素的限量（国际组织、国家或地区对中草药及其制品重金属或有害元素的限量（ppm第三节第三节 生药中农药残留的检测生药中农药残留的检测 生药中另一类重要的外源性有害物质就是生药中另一类重要的外源性有害物质就是农药残留农药残留(pesticide residues)。生药中常见的农药残留包括有机氯化合物、生药中常见的农药残留包括有机氯化合物、有机磷化合物和拟除虫菊酯
27、类等。有机磷化合物和拟除虫菊酯类等。生药的种植、采收、包装运输、贮藏等各个生药的种植、采收、包装运输、贮藏等各个环节都有可能和农药接触，被其污染。环节都有可能和农药接触，被其污染。1.生药中农药残留的检测方法生药中农药残留的检测方法 农药残留的检测方法主要是农药残留的检测方法主要是气相色谱法气相色谱法。中国药典中国药典（2010年版）年版）规范了农药残规范了农药残留量的气相色谱测定法，包括有机氯类农药残留量的气相色谱测定法，包括有机氯类农药残留量测定、有机磷农药残留量测定和拟除虫菊留量测定、有机磷农药残留量测定和拟除虫菊酯类农药残留量测定。酯类农药残留量测定。此外，生药中农药残留量的测定还有气
28、相色此外，生药中农药残留量的测定还有气相色谱谱-质谱联用法、柱后衍生高效液相色谱法、质谱联用法、柱后衍生高效液相色谱法、高效液相色谱高效液相色谱-质谱联用法等方法。质谱联用法等方法。有机氯农药残留的测定有机氯农药残留的测定毛细管气相色谱法测定菊花中毛细管气相色谱法测定菊花中1818种有机氯类种有机氯类农药残留量农药残留量：色 谱 条 件：色 谱 条 件：D B-1 7 0 1 石 英 毛 细 管 柱石 英 毛 细 管 柱（30m0.32mm，0.25 m）；载气为高纯氮；进）；载气为高纯氮；进样量样量1ml；进样口温度；进样口温度210；程序升温：初始温度；程序升温：初始温度120，保持，保持
29、2分钟，以每分钟分钟，以每分钟8升至升至180，保持，保持4分钟，再以每分钟分钟，再以每分钟8升至升至225，以每分钟，以每分钟10升至升至270，保持，保持10分钟；分钟；63Ni-ECD电子捕获检测电子捕获检测器；检测器温度器；检测器温度300。对照品：四氯硝基苯（对照品：四氯硝基苯（1）、六氯苯（）、六氯苯（2）、）、-BHC（3），），-BHC（9），），-BHC（5），），-BHC（10）、五氯硝基苯（）、五氯硝基苯（4）、七氯（）、七氯（6）、艾）、艾氏剂（氏剂（7）、甲基五氯苯基硫醚（）、甲基五氯苯基硫醚（8）、环氧七氯）、环氧七氯（11）、）、-硫丹（硫丹（12）、反式氯丹（）
30、、反式氯丹（13）、顺式）、顺式氯丹（氯丹（14）、）、p,p-DDE（15），），o,p-DDT（16）,p,p-DDD（17）,p,p-DDT（18）。）。t/minAt/minB2A.对对照品照品;B.样样品品有机磷农药残留测定有机磷农药残留测定中药材中中药材中2525种有机磷类农药的定性及定量分析种有机磷类农药的定性及定量分析：GC-FPD定量分析：定量分析：DB-5毛细管柱（毛细管柱（30m0.32mm，0.25 m）；火焰光度检测器）；火焰光度检测器FPD；载气为高纯氦气，流；载气为高纯氦气，流速速1mL/min；进样量；进样量2mL，分流进样，分流比，分流进样，分流比5 1；进样
31、；进样口温度口温度290；程序升温：初始温度；程序升温：初始温度100，以每分钟，以每分钟10升至升至190，保持，保持5分钟，再以每分钟分钟，再以每分钟2升至升至220，保持，保持5分钟，以每分钟分钟，以每分钟20升至升至300，保持，保持5分钟；检测器温分钟；检测器温度度300；氢气流量；氢气流量80 mL/min；空气流量；空气流量120 mL/min。对照品：久效磷（对照品：久效磷（1 1）、乐果（）、乐果（2 2）、特丁磷）、特丁磷（3 3）、二嗪磷（）、二嗪磷（4 4）、乙拌磷（）、乙拌磷（5 5）、异稻瘟净）、异稻瘟净（6 6）、除线磷（）、除线磷（7 7）、皮蝇磷（）、皮蝇磷（
32、8 8）、杀螟硫磷）、杀螟硫磷（9 9）、倍硫磷（）、倍硫磷（1010）、对硫磷（）、对硫磷（1111）、毒壤磷）、毒壤磷（1212）、溴硫磷（）、溴硫磷（1313）、嘧啶磷（）、嘧啶磷（1414）、甲基异）、甲基异柳磷（柳磷（1515）、异柳磷（）、异柳磷（1616）、稻丰散（）、稻丰散（1717）、杀）、杀扑磷（扑磷（1818）、灭菌磷（）、灭菌磷（1919）、丙溴磷（）、丙溴磷（2020）、三）、三唑磷（唑磷（2121）、敌瘟磷（）、敌瘟磷（2222）、达嗪硫磷（）、达嗪硫磷（2323）、）、溴苯磷（溴苯磷（2424）、蝇毒磷（）、蝇毒磷（2525）。拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类 固相萃取气
33、相色谱内标法测定桔梗中拟除虫菊酯类农药残固相萃取气相色谱内标法测定桔梗中拟除虫菊酯类农药残留量留量：色谱条件：色谱条件：SE-54毛细管柱（毛细管柱（30m0.32mm，0.25 m）；载气为高纯氮，流速）；载气为高纯氮，流速1mL/min；不分流进样，；不分流进样，进样量进样量1mL；进样口温度；进样口温度200；程序升温：初始温度；程序升温：初始温度150，以每分钟，以每分钟7升至升至270，保持，保持20分钟；分钟；63Ni-ECD电子捕获检测器，检测器温度电子捕获检测器，检测器温度300。对照品：对照品：6-羟基羟基-7-甲氧基香豆素（内标物，甲氧基香豆素（内标物，1）、联）、联苯菊酯
34、（苯菊酯（2）、甲氰菊酯（）、甲氰菊酯（3）、氯氟氰菊酯（）、氯氟氰菊酯（4）、氯菊）、氯菊酯（酯（5,6）、氰戊菊酯（）、氰戊菊酯（7,8）、溴氰菊酯（）、溴氰菊酯（9）。）。BAA.对对照品照品;B.样样品加品加标标2.生药中农药残留的限量生药中农药残留的限量 （1）国内生药中农药残留的限量标准：）国内生药中农药残留的限量标准：中国药典中国药典（2010年版）年版）中对甘草、黄芪、人中对甘草、黄芪、人参茎叶总皂苷、人参总皂苷提出了农药残留限量参茎叶总皂苷、人参总皂苷提出了农药残留限量的要求。的要求。甘草甘草黄黄芪芪人人参参药材药材六六六（总六六六（总BHC）滴滴涕滴滴涕(总总DDT)五氯硝
35、基苯五氯硝基苯（PCNB）甘草甘草221黄芪黄芪221人参茎叶总皂苷人参茎叶总皂苷1101人参总皂苷人参总皂苷1101中中国药国药典典（2010年版）年版）对对中中药药材及提取物中材及提取物中有机有机氯农药残氯农药残留的限量留的限量（mg/kg）中国商务部于中国商务部于2005年发布了年发布了药用植物及制药用植物及制剂进出口绿色行业标准剂进出口绿色行业标准（WM/T2-2004）规定药用植物及制剂的绿色品质标准，包括规定药用植物及制剂的绿色品质标准，包括药用植物原料、饮片、提取物及其制剂等的农药药用植物原料、饮片、提取物及其制剂等的农药残留量为：残留量为：六六六六六六(BHC)0.1 mg/k
36、g，滴滴涕，滴滴涕（DDT）0.1 mg/kg，五氯硝基苯，五氯硝基苯(PCNB)0.1 mg/kg，艾氏剂，艾氏剂(aldrin)0.02 mg/kg。（2）国外生药中残留农药的限量标准）国外生药中残留农药的限量标准:许多国家的药典中都有对生药农药残留限度许多国家的药典中都有对生药农药残留限度的规定，如的规定，如英国药典英国药典（2002年版）规定的植年版）规定的植物药农药残留限量（物药农药残留限量（mg/kg）。）。英国药典英国药典2002年版规定的植物药农药残留限量年版规定的植物药农药残留限量 （mg/kg）农药种类农药种类限量限量农药种类农药种类限量限量甲草胺甲草胺(alachlor)
37、0.02杀螟松杀螟松(fenitrothion)0.5艾氏剂艾氏剂(aldrin)和狄氏剂和狄氏剂(dieldrin)总量总量0.05氰戊菊酸氰戊菊酸(fenvalerate)1.5甲基谷硫磷甲基谷硫磷(azinphos-methyl)1.0地虫磷地虫磷(fonofos)0.05溴螨酯溴螨酯(bromopropylate)3.0七氯七氯(heptachlor)(七氯和环氧七氯的总量七氯和环氧七氯的总量)0.05氯丹氯丹(chlordane)（顺式和反式异构体（顺式和反式异构体及氧氯丹的总量）及氧氯丹的总量）0.05六氯苯六氯苯(hexachlorobenzene)0.1毒虫畏毒虫畏(chlor
38、fenvinphos)0.5六六六六六六(hexachlorocyclohexane)(异构体异构体(除除体之体之外外)0.3毒死蜱毒死蜱(chlorpyrifos)0.2林丹林丹(lindane)(六六六六六六)0.6甲基毒死蜱甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)0.1马拉硫磷马拉硫磷(malathion)1.0氯氰菊酯氯氰菊酯(cypermethrin)(及异构体及异构体)1.0杀扑磷杀扑磷(methidathion)0.2滴滴涕滴滴涕(DDT)(p,pDDT、o,pDDT、p,pDDE及及p,pTDE的总量的总量)1.0对硫磷对硫磷(parathion)0.5溴氰菊酸溴氰
39、菊酸(deltamethrin)0.5甲基对硫磷甲基对硫磷(parathion-methyl)0.2二嗪农二嗪农(diazinon)0.5苄氯菊酯苄氯菊酯(permethrin)1.0敌敌畏敌敌畏(dichlorcvos)1.0伏杀磷伏杀磷(phosalone)0.1第四节第四节 生药中其他有害物质的检测生药中其他有害物质的检测生药中常见的其他有害物质生药中常见的其他有害物质 ：黄曲霉素黄曲霉素与与二氧化硫二氧化硫。1.1.黄曲霉素：黄曲霉素：黄曲霉素（黄曲霉素（Aflatoxin，AF）是由黄曲霉）是由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（）和寄生曲霉（A.parasit
40、icus）产生的一类代谢产物。产生的一类代谢产物。目前已分离鉴定出目前已分离鉴定出12种以上，分为种以上，分为AFB1与与AFG1两大类，其基本结构都是二呋喃香豆素衍两大类，其基本结构都是二呋喃香豆素衍生物。生物。在天然污染的食品中以在天然污染的食品中以AFB1最为多见，且毒最为多见，且毒性和致癌性也最强。故在食品监测中常以性和致癌性也最强。故在食品监测中常以AFB1作为污染指标。作为污染指标。中药材污染黄曲霉素主要与药材品种、产地中药材污染黄曲霉素主要与药材品种、产地有关，如薏米、益智仁、柏子仁等含油性大、易有关，如薏米、益智仁、柏子仁等含油性大、易霉变的药材容易受到污染，食品中以花生、玉米
41、、霉变的药材容易受到污染，食品中以花生、玉米、大米、棉籽最容易受到污染；大米、棉籽最容易受到污染；其次与工艺剂型有关，如豆豉、曲类需发酵，其次与工艺剂型有关，如豆豉、曲类需发酵，极易发生霉变；极易发生霉变；再次，由于对药材未进行及时处理，没有及时再次，由于对药材未进行及时处理，没有及时晒干或者贮存不当，而产生霉变，尤其是在炎热晒干或者贮存不当，而产生霉变，尤其是在炎热潮湿的地区。潮湿的地区。黄曲霉素（黄曲霉素（AF）易溶于三氯甲烷和甲醇而不易溶于三氯甲烷和甲醇而不溶于正己烷、石油醚与乙醚。溶于正己烷、石油醚与乙醚。在长波紫外光下，在长波紫外光下，AFB1和和AFB2产生产生蓝紫色蓝紫色荧光荧光
42、；AFG1和和AFG2产生产生黄绿色荧光黄绿色荧光。AF纯品为无色结晶，耐高温，纯品为无色结晶，耐高温，AFB1的分解的分解温度为温度为268。如在带水条件下加温可破坏部分。如在带水条件下加温可破坏部分毒素。毒素。OOOOCH3OOHHOOOOCH3OOHHAFB1AFB2OOOOOCH3OOHHOOOOOCH3OOHHAFG1AFG2黄曲霉素检测方法：黄曲霉素检测方法：黄曲霉素最容易存在于花生、玉米、大米、植黄曲霉素最容易存在于花生、玉米、大米、植物油脂等常见的食品中，是这些农产品的常规检物油脂等常见的食品中，是这些农产品的常规检测项目，在实际检验工作中我国颁布了一系列黄测项目，在实际检验工
43、作中我国颁布了一系列黄曲霉素检测方法的国家标准。曲霉素检测方法的国家标准。如：采用如：采用薄层色谱法或间接竞争性酶联免疫吸附薄层色谱法或间接竞争性酶联免疫吸附法法（enzyme-linked immunosorbent assay,enzyme-linked immunosorbent assay,ELISAELISA）测定食品中黄曲霉素）测定食品中黄曲霉素B1B1（GB/T GB/T 5009.22-20035009.22-2003），），采用采用免疫亲和层析净化免疫亲和层析净化-高效液相色谱法高效液相色谱法和和免疫亲或层析净化免疫亲或层析净化-荧光光度法荧光光度法测定食品中黄测定食品中黄曲
44、霉毒（曲霉毒（GB/T 18979-2003 GB/T 18979-2003）。）。中国药典中国药典（20102010年版）规范了药材、饮年版）规范了药材、饮片及制剂中黄曲霉素的片及制剂中黄曲霉素的高效液相色谱测定法高效液相色谱测定法。实例实例高效液相色谱法测定酸枣仁中黄曲霉素含量高效液相色谱法测定酸枣仁中黄曲霉素含量 ：色谱条件色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇醇-乙腈乙腈-水（水（2727：1818：5555）为流动相，流速）为流动相，流速0.8ml/min0.8ml/min；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0
45、.05%0.05%的碘溶液（取碘的碘溶液（取碘0.5g0.5g，加入甲醇，加入甲醇100ml100ml使溶解，用水稀释至使溶解，用水稀释至1000ml1000ml制成），制成），衍生化泵流速衍生化泵流速0.3 ml/min0.3 ml/min，衍生化反应温度，衍生化反应温度7070；以荧光；以荧光检测器检测，激发波长检测器检测，激发波长lex=360nmlex=360nm，发射波长，发射波长lem=lem=450nm450nm。混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉素：精密量取黄曲霉素混合标准品（黄曲霉素混合标准品（黄曲霉素B1B1、黄曲霉素、黄曲霉素B2B2、黄曲霉、黄曲霉
46、素素G1G1、黄曲霉素、黄曲霉素G2G2标示浓度分别为标示浓度分别为1.01.0 g/mlg/ml、1.01.0 g/mlg/ml、0.30.3 g/mlg/ml、1.01.0 g/mlg/ml、0.30.3 g/mlg/ml）0.5ml0.5ml，置，置10ml10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液为储备液。精密量取储备液1ml1ml，置，置25ml25ml量瓶中，量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。用甲醇稀释至刻度，即得。供试品溶液的制备供试品溶液的制备：取供试品粉末约：取供试品粉末约15g15g（过（过二号筛），精密称定，加入氯化钠二号筛），
47、精密称定，加入氯化钠3g3g，置于均质，置于均质瓶中，精密加入瓶中，精密加入70%70%甲醇溶液甲醇溶液75ml75ml，高速搅拌，高速搅拌2 2分分钟（搅拌速度大于钟（搅拌速度大于1100011000转转/分钟），离心分钟），离心5 5分钟分钟（离心速度（离心速度25002500转转/分钟），精密量取上清液分钟），精密量取上清液15ml15ml，置，置50ml50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（用微孔滤膜（0.45mm0.45mm）滤过，量取续滤液）滤过，量取续滤液20.0ml20.0ml，通过免疫亲和柱（通过免疫亲和柱（AflaTestPAfla
48、TestP），流速），流速3ml/min3ml/min，用水用水20ml20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置置2ml2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。得。A.对照品对照品;B.样品；样品；1.黄曲霉素黄曲霉素G2;2.黄曲霉素黄曲霉素G1;3.黄曲霉素黄曲霉素B2;4.黄曲霉素黄曲霉素B1 ABmAUmAU黄曲霉素的限量：黄曲霉素的限量：中国药典中国药典（20102010年版）年版）中对陈皮、胖大海、中对陈皮、胖大海、
49、桃仁、酸枣仁、僵蚕提出了黄曲霉素限量的要求：桃仁、酸枣仁、僵蚕提出了黄曲霉素限量的要求：每每1000kg1000kg药材含黄曲霉素药材含黄曲霉素B1B1不得过不得过5mg5mg，含黄曲，含黄曲霉素霉素G2G2、黄曲霉素、黄曲霉素G1G1、黄曲霉素、黄曲霉素B2B2和黄曲霉素和黄曲霉素B1B1的总量不得过的总量不得过10 mg10 mg。2.2.二氧化硫二氧化硫:有些中药材在产地加工时，会用硫磺熏蒸作为处有些中药材在产地加工时，会用硫磺熏蒸作为处理程序之一，以达到漂白药材及杀菌防腐的目的，理程序之一，以达到漂白药材及杀菌防腐的目的，常用此法加工的中药材主要有常用此法加工的中药材主要有白芷、百合、
50、菊花、白芷、百合、菊花、金银花、白芍、半夏、贝母、山药、天麻金银花、白芍、半夏、贝母、山药、天麻等等。白芷菊花金银花白芍半夏贝母山药天麻研究发现，硫磺熏蒸除了可能破坏中药材中研究发现，硫磺熏蒸除了可能破坏中药材中的有效成分外，更大的弊端在于：的有效成分外，更大的弊端在于：经硫磺熏蒸过的中药材中残留的二氧化硫会经硫磺熏蒸过的中药材中残留的二氧化硫会破坏消化道和呼吸道系统，对肝、肾脏等器官也破坏消化道和呼吸道系统，对肝、肾脏等器官也有严重损害；有严重损害；尤其是当熏蒸药材的硫磺质量较差而含有较尤其是当熏蒸药材的硫磺质量较差而含有较大量的铅、汞、砷等重金属和有害元素时，会导大量的铅、汞、砷等重金属和
