1、白血病淋巴瘤免疫分型流式细胞术的基本概念流式细胞术的基本概念=流式细胞术（Flow Cytometry,简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选=研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等=研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量散射光信号和荧光信号散射光信号和荧光信号=前向角散射光（FSC,Forward Scatter）入射激光的前向散射光信号细胞相对大小及其表面积=侧向角散射光（SSC,Side Scatter）入射激光90角的散射光信号细胞粒度及细胞内相对复杂性=荧光素与特异抗体结合，荧
2、光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。CD45/SS示意图抗原分布 表面,胞浆,核内 是共同检测还是分别检测?CD3,CD4,CD8,tetramercytokinesDNACD3,4,8,tetramer+CytokinesCD3,4,8,tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8,tetramer+Cytokines+DNA设门08-03307设门全部 细胞门内细胞08-03307血液肿瘤分类进程白血病免疫分型的理论基础 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因
3、而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。细胞类型鉴定Borowitz et al(1993)AJCP 100:534-40.Steltzer et al(1993)Ann NY Acad Sci 667:265-280CD45/SS示意图正常骨髓细胞正常骨髓细胞 血液肿瘤细胞血液肿瘤细胞老化粒细胞、噬酸细胞 早幼成熟粒细胞 M3、CML单核细胞 M4、M5 LGL淋巴细胞 CLL、ALL、CLD正常前体细胞 M0、M1、M2、嗜碱性粒
4、细胞 M4、M5、ALL成熟红细胞、血小板 M6、M7、MM细胞碎片 Pre-B-ALL 非血液来源细胞B淋巴细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory MedicineT淋巴细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Medicine粒细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Medicine单核细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Med
5、icine非肿瘤T淋巴细胞表型非肿瘤B淋巴细胞表型非肿瘤粒细胞、单核细胞表型非肿瘤粒细胞、单核细胞表型白血病免疫分型 根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B初治急白分型Acute Leukemia Blasts Present 20%Myeloid LineageCD13+and/orCD117+and/orCD33+CD7+and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid,no or minimal maturationCD34+/-C
6、D117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-,CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-,CD14-CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic&Monocytic红系和巨核系的鉴定需要另外增加二线抗体。如:CD71、GPA、CD41、CD61AML-M4初治急淋分型Acute Leukemia Blasts Present 20%CD7+and/or CD2+CD19+T-LineageB-LineageCommonThymocyteMatureThymocyteCD2+CD5+Du
7、al CD4+/CD8+sCD3-CD2+CD5+CD4+or CD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8-TdT+CD10-clg-sig-Pre-BCD10+cig+TdT+sig-Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyteEarly B-PrecursorB-ALL 白血病免疫分型的价值n确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和 ALL的分化阶段。n鉴定AML的特征。n对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型。n诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、M0等。多发性骨髓瘤（MM）多
8、发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正常浆细胞为CD38+/CD45dim/-，使用 CD38/CD45双标记检测外周血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常使用CD38和CD45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤细胞进行分析。另外，正常浆细胞的表面标记为CD19+/CD56-，而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19-/CD56+。CD138目前认为是浆细胞最特异的指标。这样，使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义。MM流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势1、纤维化、硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析。2、细胞太多聚集或成团也可能没有足够
9、的分析细胞。3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。4、组织结构关系、形态关系丢失。5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势6、没有异常免疫表型的T细胞淋巴瘤也可能很难检测。7、异常的T细胞免疫表型不一定提示T细胞肿瘤，也可能是感染引起的单核细胞增多症、反应性皮肤病、炎症性疾病。8、取材不好或样品保存不当，可能导致假阴性的结果。9、HL的肿瘤细胞水平低，所以免疫表型检测或诊断HL不可靠。10、治疗或复发可能引起肿瘤细胞表面抗原改变。14、人生，最宝贵的莫过于光阴;人生，最璀璨的莫过于事业;人生，最快乐的莫过于奋斗。17)读过的书是不会白读的，只是在重量不重质的情况下
10、利用率和转化率都低了些，所以，需要这么一个顿悟，让自己明白，不能也不必要再这么的“傻”读下去，到一定程度之后我们就是应该少一点阅读。2、不要为往事伤心，要为现在打拼。4、磨练，使人难以忍受，使人步履维艰，但它能使强者站得更挺，走得更稳，产生更强的斗志。10.有一种人只做两件事：你成功了，他妒嫉你;你失败了，他笑话你。2.人在职场应该是一个扁豆，任何人怎么踩，结果还是一样，扁的。18、在逆境中要看到生活的美，在希望中别忘记不断奋斗。11、做事有始有终值得开始的事就值得完成。聪明人做事总是有始有终。8、这个世界不是因为你能做什么，而是你该做什么。16、人生最大的失败就是知道的太多会做的太少!20、山高不厌攀，水深不厌潜，学精不厌苦：追求!7、拼搏高考，今生无悔;越过高三，追求卓越!5、无志者常立志，有志者立常志，咬定一个目标的人最容易成功。2、总是站在时间里等待一个催促自己成长的力量。5、漂亮只能为别人提供眼福，却不一定换到幸福!11)昨晚多几分钟的准备，今天少几小时的麻烦。8、走千条路，只一条适合;遇万般人，得一人足够。10.要有多坚强，才敢念念不忘。给自己励志的话摘录3.人生没有十全十美，努力使每一天都开心而有意义，失败本身不可怕，可怕的是失败后推卸责任，而不是从本身寻找原因。还有，学无止境。要更新自己的知识观念生活技巧，懂得用知识来武装自己。
