1、：仪器设备性能验证所有仪器和设备在安装后以及重要维护保养服务后应进行性能验证，以确保其可以按照预期运行。：.维修或更换仪器，或者更换仪器关键部件后必须进行性能验证：:新的鉴定系统使用前，应查阅已发表的完整、科学的系统评估文献作为性能验证 的初级证据，再按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其它已知菌株对商业鉴定 系统（包括自动、半自动、手工）每种板（条卡管）的鉴定药敏结果的符合性进行 验证。：如果设备故障影响了方法学性能，在设备修复、校准后，实验室可通过检测质控 菌株或已知结果的样品的方式进行性能验证。：临床微生物检验程序验证指南，在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行
2、独立验证。实验室应从制造商或方法开发者获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。微生物检验程序包括：显微镜检查、分离培养和鉴定、药物敏感试验，血清学检查，抗原检查等各项检验活动，实验室应根据分析类型和用途进行验证程序的设计、验证结果的统计学分析、建立新检验程序的可接受性能标准。验证结果应证明该检验程序可用于检测或准确分析待测物的特点，通常验证计划和可接受标准应在验证开始前确定。验证计划和可接受标 准应与该分析物相关的国家行业标准权威出版物等保持一致。定义可接受标准的方法之一是根据医学和临床要求确定总允许误差，但通常应用于定量检测。定性检测的可接受标准可以用一致性（符合率）表达。检验程序验证所使用
3、的标本应为合格的临床标本或从回顾性前瞻性临床标本中分离的菌株。标本的采集应符合国家、地区法规要求。已通过一种或多种方式确定性能的标准菌株或质控品（如国家或地方临床检验中心使用过的质控菌株）也适用。涂片制备染色镜检 染色方法包括手工染片和自动化仪器染片结果报告应在检验项目开展前进行性能验证，并由有经验的实验人员操作所有样品及容器应当作具有传染性的物质，应按照实验室生物安全要求进行操作。包括能力验证实验室间比对，实验室内人员比对,实验室如果开展手工染片和自动化染片，应该对两种方法进行实验室内比对。样品数量.每项检查至少份样本.需覆盖全部样本类型.无菌样本类型应包含阳性和阴性结果.应优先选择使用已知
4、结果的留样 样本，不可获取时采用模拟样本 按照临床标本常用检验方式处理，由工作人员进行操作进行手工染片和自动化仪器染片时涂片需同时制备两份进行实验室间比对和能力验证时，需由当日在岗人员进行涂片，染色，镜检，结果报告进行实验室内人员比对时，由本岗位人员负责制片，染色，所有从事显微镜检查的人员 进行镜检，结果报告，由专人进行结果统计。结果报告 根据实验室程序文件规定进行结果报告。抗酸染色按照要求进行分级报告。可接受标准每项检查结果符合率。菌株或标本手工染色结果机染结果试验符合情况标准菌株大肠埃希菌红色红色符合流感嗜血杆菌 红色红色符合金黄色葡萄球菌紫色紫色符合肺炎链球菌 紫色紫色符合白色念珠菌紫色
5、紫色符合混合菌明显区分明显区分符合临床菌株粪肠球菌紫色紫色符合屎肠球菌紫色紫色符合金黄色葡萄球菌紫色紫色符合表皮葡萄球菌紫色紫色符合无乳链球菌紫色紫色符合阴沟肠杆菌红色红色符合鲍曼不动杆菌红色红色符合肺炎克雷伯菌红色红色符合铜绿假单胞菌红色红色符合嗜麦芽窄食单胞菌红色红色符合光滑念珠菌紫色紫色符合近平滑念珠菌紫色紫色符合热带念珠菌紫色紫色符合新型隐球菌紫色紫色符合白色念珠菌紫色紫色符合临床标本痰明显区分明显区分符合痰明显区分明显区分符合痰明显区分明显区分符合痰明显区分明显区分符合痰明显区分明显区分符合血及无菌体液明显区分明显区分符合血及无菌体液明显区分明显区分符合血及无菌体液明显区分明显区分符
6、合血及无菌体液明显区分明显区分符合血及无菌体液明显区分明显区分符合分泌物明显区分明显区分符合分泌物明显区分明显区分符合分泌物明显区分明显区分符合分泌物明显区分明显区分符合分泌物明显区分明显区分符合粪便明显区分明显区分符合粪便明显区分明显区分符合粪便明显区分明显区分符合粪便明显区分明显区分符合粪便明显区分明显区分符合 一般培养包括各类标本的细菌、真菌、支原体的培养。标本类型包括痰液、尿液、粪便、分泌物、组织等细菌包括厌氧菌和分枝杆菌等培养程序包括标本处理、接种、培养基选择、培养条件选择等 每项检查，每种样本至少份标本无论商品化培养基还是自配培养基，都需要在使用前对培养基性能进行验证，验证菌株可选
7、择质控菌株或临床菌株。标准菌株、能力验证室间质评活动使用的菌株、从临床病人标本分离的具有稳定表型的菌株均可用做验证菌株，实验室对其生化特征及鉴定结果应做好相关记录。直接接种法按照实验室细菌分离培养的，将待测标本接种到相应的培养基上，观察菌落生长情况。注意：在直接接种法验证不合格的情况下要采用标准化菌悬液进行验证。标准化菌悬液法.菌悬液制备）直接菌落法：挑取培养的菌落，在生理盐水中制备成的菌悬液）生长法：从培养的培养物中挑取个菌落至无菌肉汤中，孵育数小时使其达到 标准化菌悬液法.接种）验证非选择培养基 用无菌肉汤或生理盐水将配置好的菌悬液进行稀释，每个平板接种，均匀涂布接种。如生长过密则进行稀释
8、）验证选择性培养基 用无菌肉汤或生理盐水将配置好的菌悬液进行稀释，每个平板接种，均匀涂布接种。如生长过密则进行稀释）验证培养管 用未经稀释的菌悬液进行接种。在选择性培养基上验证菌株长势良好、菌落大小与预期相符、菌落形态典 型，并且能够抑制特定微生物的生长，可判定性能符合要求，验证合格。在非选择性培养基上验证菌株长势良好、菌落大小与预期相符、菌落形态典 型，血培养基上的溶血类型符合，可判定非选择性培养基验证合格。临床微生物室血培养系统验证的目的是评估系统使用的培养基能否用于培养临床常见微生物，以及仪器是否能及时检测出血液中大部分的微生物。血培养性能验证常用留样验证和血培养系统平行比对两种方法。本
9、实验室采用的是留样验证的方法，操作过程参照细菌室检验项目性能验证 验证应覆盖临床常见微生物需氧成人儿童血培养瓶验证菌株应包括:需氧兼性 厌氧革兰阳性菌、需氧兼性厌氧革兰阴性菌、苛养菌（如：流感嗜血杆菌、肺炎链球 菌等）和真菌，厌氧血培养瓶验证菌株应包括兼性厌氧革兰阳性菌、兼性厌氧革兰阴 性菌、专性厌氧菌，其他特殊用途血培养瓶参照厂家要求选择合适类型菌株进行验 证。每种类型至少株，总体不少于 株。应尽可能使用真实患者的临床分离菌株（性能验证用临床留样菌株宜经质谱或 序列分析确认）。对于特殊、苛养菌可使 用标准菌株或质控菌株。某些特殊菌株需要在培养瓶中加入无菌、未使用抗生素的厂 家推荐血液标本，如
10、不加可能不生长，如流感嗜血杆菌。模拟临床血流感染患者的细菌含量。若苛养菌需添加适量的新鲜无菌血液（成人瓶，儿童瓶）后置于血培养系统上进行培养、检测。挑取培养的新鲜培养物，在生理盐水中调整为麦氏浊度的菌悬液，然后倍比稀释。如图所示 从号试管里取菌悬液注入血培养瓶内，同时取菌悬液在平板上进行涂布接种，确认接种数量。将接种好的血培养瓶放入仪器进行监测，待阳性报警后移种平板，涂片染色，确认是否为接种菌在厂家说明书规定时间内检测出所有菌株则该方法通过验证。天时间应足以 检测出至少 的临床相关细菌，须具备苛养菌、真菌、厌氧菌等的检出能力。若未能 检出应使用相同菌株进行重复试验来验证。若仍不能检测，实验室和
11、或制造商应在临 床使用该系统前采取纠正措施。如果血培养仪升级，原系统和新系统的差别不大，使用的培养瓶也没有改变，那么由供应商技术代表核查仪器性能即可，无需再次验证。功能核 查将对孵育系统和光学系统以及软件是否按照制造商规定运行进行评价。菌株 时间差需氧培养瓶批号需氧培养瓶批号培养瓶条形码报阳时间培养瓶条形码报阳时间白色念珠菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌肺炎链球菌甲型副伤寒沙门菌金黄色葡萄球菌流感嗜血杆菌屎肠球菌表皮葡萄球菌肺炎克雷伯菌鲍曼不动杆菌咽峡炎链球菌脑膜炎奈瑟菌嗜麦芽窄食单胞菌新型隐球菌阴性对照 按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其它已知菌株，试验应覆盖实验室使 用的全部卡片种类和或方法
12、。菌株种类的选择：首先参照厂商说明书，覆盖革兰阳性和革兰阴性非苛养菌、苛养菌、厌氧菌、念珠菌、隐球菌等。包括临床留样菌株和标准质控菌株。每种类型应至少 株，总体不少于 株。参照实验室规定对验证菌株进行检测，一 般要求鉴定至种水平。对于特殊类型的微生物（如棒状杆菌、厌氧菌，芽孢杆菌），可将鉴定到属的水平作为可以接受的性能标准。标准质控菌株符合率应为，临床菌株的符合率应在 以上。本实验室采用了连续天检测待测菌株的方法进行了鉴定仪的性能验证试验。一共选取了株细菌和真菌，参照标准操作规程 标准操作规程连续测试天。、：如果失控的生化鉴定项目个，可认为性能好可接受；如果质控检测结果和目标反应结果出现误差大
13、于个，必须立即进行查误步骤，如误差无法解决，则联系生物梅里埃委托代理的技术代表。细菌名金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌鹑鸡肠球菌肺炎链球菌群链球菌粪肠球菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌阴沟肠杆菌嗜麦芽窄食单胞菌肺炎克雷伯菌福氏志贺菌肠炎沙门菌鲍曼不动杆菌洋葱伯克霍尔德菌粘质沙雷菌脑膜炎败血性黄杆菌弗氏柠檬酸杆菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌光滑念珠菌葡萄牙假丝酵母都柏林白色念珠菌都柏林都柏林都柏林都柏林热带念珠菌白色念珠菌流感嗜血杆菌卡片种类实验次数错误次数符合率血清学鉴定试验包括沙门菌志贺菌致病大肠杆菌弧菌等的血清学分型。沙门菌至少包括伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌丙型副伤寒 沙门菌；志贺菌包括
14、福氏志贺菌、宋内志贺菌、痢疾志贺菌和鲍氏志贺菌四种；致病大肠杆菌弧菌等根据当地卫生行政管理和实验室情况进行选择。霍乱弧菌每年由杭州市疾控中心进行检测验证。优先选择标准菌株和 质控菌株，也可使用实验室确认过的留样临床分离株 参照实验室相关进行沙门菌属、志贺菌属检验群、群霍乱弧菌检验要求准确率。抗菌药物敏感性试验（药敏试验）可分为纸片法和最低抑菌浓度法（法）。药敏试验方法的评估宜既保证药敏试验的准确性，也要确保耐药菌株的检出灵敏性。药敏卡的选择应遵循生产厂家 说明书要求，不应超范围使用。药敏试验性能验证可使用药敏质控菌株。参考 细菌、真菌相关药敏试验操作及判断标准，选择药敏质控标准菌株和药 物。连
15、续检测 天，每一组药物细菌的抑菌圈直径或最低抑菌浓度（）超出 参考范围的频率应不超过（）或；也可采用替代质控方案，即连续 天，每天对每一组药物细菌重复测定 次，每次单独制备接种物，个数据中超出参考范 围（抑菌圈直径或）的结果应不超过（）个，若失控结果为 个，则如前述，再进行 天，每天 次重复试验，个数据失控结果应不超过（）个。连续法应计算基本符合率（，）：用于连续法，设备得到的结果与参考方法确定的结果（或已知确认结果）相差在正负一个倍比稀释度内的符合率。实验在已知参考的个倍比稀释度内的试验数测试总数 分类符合率（，）：用于非连续法和纸片法，验证的药敏试验方法与参考方法或已确认结果间判断的一致性
16、。药敏分类结果一致的试验数测试的总数在新的药敏试验系统应用于临床前，须满足上述质控要求，通过后在日常检测中 转为室内控制要求。应对较大和重大偏差进行分析，以确定特定细菌结果是否受影响 并要求限制该细菌和特定抗菌药物在该设备的使用。细菌名天数 粪肠球菌细菌名天数 金黄色葡萄球菌细菌名天数铜绿假单胞菌总实验数总实验数 卡片种类实验次数分类符合率基本符合率合计纸片法药敏试验 验证选择标准菌株，采用替代质控方案进行，即连续天，每天对每一组药物细菌重复测定次，每次单独制备接种物，个数据超出参考范围（抑菌圈直径或）的结果应不超过（）个，若失控结果为个，则如前述，再进行天，每天次重复试验，个数据失控结果应不超过（）个。细菌试验数失控数据分类符合率大肠埃希菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌总计C l i c k t o e d i t c o m p a n y s l o g a n
