1、细胞免疫治疗细胞治疗是指采用经体外操作过的自体、异体或者异种的细胞用于疾病或损伤的治疗、预防。用于肿瘤、艾滋病、肝炎、糖尿病、器官移植、心血管疾病、脊髓损伤、帕金森病等领域l 肿瘤的继承性免疫治疗l 治疗性细胞疫苗l 腺体细胞移植l 神经细胞及心血管细胞移植为基础的细胞治疗技术l 以镇痛和抗衰老的牛肾上腺细胞和羊胎细胞的异种细胞治疗技术 体细胞治疗已经成为多种疾病的有效治疗方式细胞免疫治疗v细胞免疫治疗是指采用经体外操作过的自体、异体或者异种的免疫细胞用于疾病或损伤的治疗、预防。v包括包括淋巴细胞、树突状细胞、淋巴细胞、树突状细胞、NK细胞、细胞毒性细胞、细胞毒性T淋巴细胞淋巴细胞以及其他以及
2、其他免疫相关细胞免疫相关细胞v用于免疫相关性疾病的治疗或预防，包括用于免疫相关性疾病的治疗或预防，包括肿瘤、感染性疾病以及自身肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病免疫性疾病的细胞免疫治疗。的细胞免疫治疗。肿瘤的免疫治疗/生物治疗抗体肿瘤疫苗树突状细胞疫苗过继细胞治疗细胞因子2013年六大值得关注的科学领域之一：肿瘤免疫治年六大值得关注的科学领域之一：肿瘤免疫治疗疗One book has closed,and a new one has opened.2014年年1月月2013年度十大科技突破之一：肿瘤免疫治疗年度十大科技突破之一：肿瘤免疫治疗7肿瘤免疫治疗方兴未艾Cancer immunoth
3、erapy holds considerable promise以树突状细胞为基础的治疗性肿瘤疫苗使肿瘤个性化治疗成为可能Dendritic-Cell-Based Therapeutic Cancer Vaccines might enable the development of next-generation curative therapies for individuals with cancer在研的多种治疗性疫苗将能够启动新的T细胞，并诱导慢性活化的非保护性的CD8+T细胞成为健康CD8+T细胞，进而形成CTL发挥抗肿瘤效应，还可以产生长寿记忆性CD8+T细胞从而能够快速产生新的效
4、应T细胞，分泌细胞毒分子，从而防止肿瘤复发。Palucka K et al.Immunity.2013;39(1):38-48多肽重组蛋白肿瘤细胞病毒载体核酸细菌9过继性T细胞回输是肿瘤免疫治疗的又一个新兴领域Adoptive T Cell Transfer for Cancer Immunotherapy in the Era of Synthetic Biology免疫耐受一直是限制免疫治疗发展的一个瓶颈。工程T淋巴细胞能够表达高亲和力抗原受体，有望克服免疫耐受。目前面临的主要挑战是工程T细胞对肿瘤的特异性识别能力的增强和大规模细胞培养体系的建立。Kalos M et al.Immunit
5、y.2013;39(1):49-60 美国美国Dendreon公司进行了树突状细胞疫公司进行了树突状细胞疫苗苗(PROVENGE)治疗雄性激素非依赖的晚期治疗雄性激素非依赖的晚期前列腺癌患者的前列腺癌患者的期临床试验（期临床试验（2009.4.28），），结果显示：结果显示：1.PROVENGE治疗组的患者中位生存时间治疗组的患者中位生存时间高于安慰剂组患者高于安慰剂组患者4.1个月个月（25.8个月个月 vs 21.7个月）个月）2.PROVENGE治疗组的患者三年生存率比治疗组的患者三年生存率比安慰剂组高出安慰剂组高出38%（31.7%vs 23%）3.IMPACT study的结果的结果
6、p=0.032，高于预期，高于预期的的p=0.043，治疗组死亡风险比对照组降低了，治疗组死亡风险比对照组降低了22.5%（HR=0.775）4.PROVENGE的安全性良好，显著延长患的安全性良好，显著延长患者的中位生存时间，提高三年生存率。者的中位生存时间，提高三年生存率。Nat Rev Drug Discov.2011;10(8):591-600.肿瘤免疫治疗历史沿革Enthusiasm phaseSkepticism phaseRenaissance phaseExplosion phase肿瘤过继性细胞免疫治疗已成为肿瘤的第四种治疗模式 特异性特异性T细胞免疫治疗细胞免疫治疗 可实现
7、晚期恶性黑色素瘤的50%以上的CR+PR Science,2002 NEJM,2008 可显著提高晚期恶性黑色素瘤患者的生存期 PNAS,2002 T细胞特异性基因修饰细胞特异性基因修饰 TCR转基因可实现晚期恶性黑色素瘤患者的PR Science,2006 白血病患者的CR Sci Transl Med,2011 非特异性细胞免疫治疗非特异性细胞免疫治疗 T细胞可显著延长术后患者的无复发生存期nThe Lancet,2000n韩国KFDA IV期临床证实 可显著延长患者的生存期n美国II期临床(NK-92)n日本III期临床(T细胞)n韩国III期临床(T细胞)国际上批准临床应用的过继性细胞
8、治疗产品n日本：厚生省日本：厚生省n医疗技术：医疗技术：nT细胞细胞nNK细胞细胞nNKT细胞细胞n韩国：韩国：FDAn产品：产品：Immuncell-LC（T细胞）细胞）限制肿瘤免疫应答的因素细胞免疫治疗分类v主动性细胞免疫治疗（细胞治疗性疫苗）主动性细胞免疫治疗（细胞治疗性疫苗）v被动性细胞免疫治疗被动性细胞免疫治疗（过继性细胞治疗）（过继性细胞治疗）1985Cellular Immunotherapy,where have we beenLAK,TIL,CD3AK,CIK,NK,NKT,T,CTL,Tumor cell vaccine,Dendritic Cell vaccine.Ado
9、ptive Cellular Immunotherapy2008Cell Based Tumour Vaccinev淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine activated killer cells,LAK)v肿瘤浸润性淋巴细胞肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocytes,TIL)vCD3 单克隆抗体激活的肿瘤杀伤细胞单克隆抗体激活的肿瘤杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells,CD3AK)v细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine i
10、nduced killer ceils，CIK)v自然杀伤细胞自然杀伤细胞(Natural killer cells,NK)v细胞毒性细胞毒性T淋巴细胞淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)v树突状细胞树突状细胞(Dendritic cells,DC)、免疫平免疫平衡状态衡状态细胞毒性T细胞杀伤T辅助细胞的活性树突状细胞抗原提呈NK细胞的活性其他效应细胞正相调控正相调控负相调控负相调控ENHANCERREGULATORSUPPEREESOR调节性T细胞肿瘤相关巨噬细胞抑制性树突状细胞髓系抑制性细胞负向免疫分子其他免疫平免疫平衡状态衡状态细胞毒性T细胞杀伤T辅助细胞的
11、活性树突状细胞抗原提呈NK细胞的活性其他效应细胞正相调控正相调控负相调控负相调控ENHANCERREGULATORSUPPEREESOR调节性T细胞肿瘤相关巨噬细胞抑制性树突状细胞髓系抑制性细胞负向免疫分子其他过继性免疫治疗(Adoptive immunotherapy)体外分离细胞体外分离细胞抗原提呈细胞（巨噬细胞、树突状细胞）抗原提呈细胞（巨噬细胞、树突状细胞）T淋巴细胞淋巴细胞自然杀伤（自然杀伤（NK）细胞）细胞离体扩增、培养、活化离体扩增、培养、活化细胞因子刺激细胞因子刺激抗原冲击抗原冲击基因修饰基因修饰自体回输自体回输诱发机体特异性抗肿瘤免疫诱发机体特异性抗肿瘤免疫淋巴因子激活的杀伤
12、细胞Lymphokine-activated killer cells,LAKLAK的发现的发现1980年，美国癌症研究所的年，美国癌症研究所的Rosenberg实验室首次报道了实验室首次报道了荷瘤小鼠的脾脏淋巴细胞或肿瘤患者的外周血淋巴细胞在荷瘤小鼠的脾脏淋巴细胞或肿瘤患者的外周血淋巴细胞在含有含有IL-2的培养液中短期培养可以诱导出一种非特异性的的培养液中短期培养可以诱导出一种非特异性的杀伤细胞，能杀伤新鲜分离的实体瘤细胞和多种肿瘤细胞杀伤细胞，能杀伤新鲜分离的实体瘤细胞和多种肿瘤细胞株。其中很多是对株。其中很多是对CTL和和NK不敏感的肿瘤细胞。不敏感的肿瘤细胞。目前尚未发现目前尚未发现
13、LAK细胞特有的表面标志，许多实验表明，细胞特有的表面标志，许多实验表明，LAK细胞的前体细胞是细胞的前体细胞是NK细胞和细胞和T细胞细胞。LAK的临床应用的临床应用o 1984年年11月月Rosenberg研究组经美国研究组经美国FDA批准，首次应用批准，首次应用IL-2与与LAK协同治疗协同治疗25例肾细胞癌、黑素瘤、肺癌、结肠癌等例肾细胞癌、黑素瘤、肺癌、结肠癌等肿瘤患者。肿瘤患者。o 治疗用治疗用LAK细胞数量在细胞数量在0.618.41010，IL-2用量用量2.8105-3.32106 U/kg。其中。其中11例肿瘤缩小超过例肿瘤缩小超过50，1例黑素瘤完例黑素瘤完全消退。全消退。
14、o 1988年该研究组总结了年该研究组总结了IL-2与与LAK细胞协同治疗细胞协同治疗222例肿瘤例肿瘤患者，其中患者，其中16例患者肿瘤转移灶完全消退，例患者肿瘤转移灶完全消退，26例患者肿瘤消例患者肿瘤消退退50以上，该疗法对转移性肾细胞癌、黑素瘤、结肠癌和以上，该疗法对转移性肾细胞癌、黑素瘤、结肠癌和非何杰金氏淋巴瘤患者的疗效较显著。有报道乳腺癌、膀胱非何杰金氏淋巴瘤患者的疗效较显著。有报道乳腺癌、膀胱癌局部联用癌局部联用IL-2进行治疗也获得明显疗效。进行治疗也获得明显疗效。由于由于IL-2用量大，在治疗过程中可出现毒副反应，最常见和用量大，在治疗过程中可出现毒副反应，最常见和最严重的
15、毒副作用是出现毛细血管渗漏综合征最严重的毒副作用是出现毛细血管渗漏综合征(CLS)，主要表，主要表现为全身性水肿和多器官功能失调，可引起胸腹腔积液、肺现为全身性水肿和多器官功能失调，可引起胸腹腔积液、肺间质水肿和充血性心力衰竭。引起间质水肿和充血性心力衰竭。引起CLS的机理可能与内皮细的机理可能与内皮细胞损伤和产生血管活性物质有关。胞损伤和产生血管活性物质有关。肿瘤浸润淋巴细胞Tumor infiltrating lymphocyte,TIL 1986年年Rosenberg研究组首先报道了研究组首先报道了TIL。TIL细胞表型具有异质性：细胞表型具有异质性：一般来说绝大多数：一般来说绝大多数：
16、CD3阳性细胞阳性细胞不同肿瘤来源：不同肿瘤来源：CD4+/CD8+T细胞比例有差异细胞比例有差异 多数情况下以多数情况下以CD8+T细胞为主细胞为主随着体外加随着体外加IL-2培养时间的延长，培养时间的延长，CD25+细胞百分率由低细胞百分率由低逐渐升高。逐渐升高。NK细胞的标记细胞的标记(CD16，CD56)在在TIL体外加体外加IL-2培养过程培养过程中有先增高后降低的趋势。中有先增高后降低的趋势。用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞，加入高剂量巴细胞，加入高剂量IL-2体外培养，残存的肿瘤细胞体外培养，残存的肿瘤
17、细胞7-13天天全部死亡。全部死亡。与来自与来自PBMC的的LAK细胞比较，其特点是细胞比较，其特点是:(1)杀伤活性强杀伤活性强 50-100 倍，因此在治疗中可以减少效应细胞倍，因此在治疗中可以减少效应细胞和和IL-2的用量，而且对的用量，而且对LAK治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治疗效果；疗效果；(2)主要由主要由CD8阳性细胞诱导而来阳性细胞诱导而来,在动物实验中发现在动物实验中发现TIL杀伤杀伤肿瘤作用具有特异性；肿瘤作用具有特异性；(3)宿主的抑制状态有利于宿主的抑制状态有利于TIL的杀伤作用的杀伤作用,因此治疗时加因此治疗时加用环磷酰胺用环磷酰胺(Cy)1
18、00mg/kg可明显提高疗效，可能与免疫抑可明显提高疗效，可能与免疫抑制药能消除抑制性细胞或因子，增强过继免疫治疗作用有制药能消除抑制性细胞或因子，增强过继免疫治疗作用有关，因而可减少关，因而可减少IL-2的用量，降低毒副反应；的用量，降低毒副反应；(4)可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中获得淋巴细胞，经加水中获得淋巴细胞，经加IL-2培养后，其生长、扩增能力培养后，其生长、扩增能力强于强于LAK细胞。已有报道应用细胞。已有报道应用TIL治疗治疗14例转移性肺癌等例转移性肺癌等晚期肿瘤患者晚期肿瘤患者,其中其中4例肿瘤缩小例肿瘤缩小
19、50以上，副作用明显低以上，副作用明显低于于IL-2/LAK疗法。疗法。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗转移性黑色素瘤2002.ScienceTIL治疗后转移性黑色素瘤患者腋窝（上）、骨盆（中）及治疗后转移性黑色素瘤患者腋窝（上）、骨盆（中）及腹腔内（下）巨大转移灶的消退腹腔内（下）巨大转移灶的消退TIL治疗后转移性黑色素瘤患者肝脏巨大转移灶的消退治疗后转移性黑色素瘤患者肝脏巨大转移灶的消退左：治疗前；右：治疗后左：治疗前；右：治疗后应用应用LAK或或TIL细胞治疗肿瘤今后发展的方向是细胞治疗肿瘤今后发展的方向是:提高提高LAK细胞的纯度，应用活化细胞的纯度，应用活化LAK细胞贴壁的特性，细胞贴
20、壁的特性，纯化粘附纯化粘附LAK(adherent-LAK,A-LAK)细胞，在细胞，在IL-2诱诱导下数量可增加导下数量可增加100倍，而且抗肿瘤转移的作用比倍，而且抗肿瘤转移的作用比LAK强强20-50倍。倍。改变过继回输细胞在体内的分布，如改变注射细胞途改变过继回输细胞在体内的分布，如改变注射细胞途径和方法，达到局部径和方法，达到局部/区域继承免疫疗法的目的。区域继承免疫疗法的目的。与其它细胞因子如与其它细胞因子如IL-12、IFN、TNF-和和CSF联合治疗，联合治疗，增强增强LAK的杀伤活性。的杀伤活性。将某些细胞因子将某些细胞因子(如如IL-2、TNF等等)cDNA转染转染LAK或
21、或TIL，用于基因治疗。，用于基因治疗。CD3抗体激活的杀伤细胞CD3 McAb activated killer cells,CD3AK 抗抗CD3单抗与单抗与IL-2协同，能显著提高协同，能显著提高LAK细胞的数量和细胞的数量和杀伤活性。抗体含量在杀伤活性。抗体含量在1020 ng/ml即可达到刺激杀伤活即可达到刺激杀伤活性的高峰，体外培养数天后即可出现明显的杀伤活性。性的高峰，体外培养数天后即可出现明显的杀伤活性。CD3AK激活需要单核细胞存在，其增殖速度和细胞毒活激活需要单核细胞存在，其增殖速度和细胞毒活性均高于性均高于LAK。所有的。所有的CD3+CD8+T细胞和细胞和1-6CD3+
22、CD4+T细胞可诱导出细胞可诱导出CD3AK。CD3AK已开始应用已开始应用于临床。于临床。细胞因子诱导的杀伤细胞cytokine-induced killer cell,CIK1991年斯坦福大学医学院骨髓移植中心首先报道了这种具年斯坦福大学医学院骨髓移植中心首先报道了这种具有高增殖力和高细胞毒性的细胞因子激活的杀伤细胞；有高增殖力和高细胞毒性的细胞因子激活的杀伤细胞；1994年年Schmidt-wolf报道了体外大量增殖报道了体外大量增殖CIK细胞的方法。细胞的方法。增殖后的增殖后的CIK细胞主要为细胞主要为CD3+CD56+(50%以上以上)，在正常，在正常人外周血中极其罕见人外周血中极
23、其罕见(1-5%)。绝大多数细胞共表达绝大多数细胞共表达CD2、TCR/、CD5和和CD8与与LAK比较：不需比较：不需NK细胞活化细胞活化 不需持续给以大量不需持续给以大量IL-2 增殖活性和细胞毒性更高增殖活性和细胞毒性更高由由IFN-、CD3单抗、单抗、IL-1、IL-2等细胞因子在体等细胞因子在体外诱导并大量扩增的具有杀伤肿瘤活性的细胞，是外诱导并大量扩增的具有杀伤肿瘤活性的细胞，是目前国际上广泛应用的肿瘤免疫治疗手段。目前国际上广泛应用的肿瘤免疫治疗手段。特点：特点：1）高增殖活性）高增殖活性 加入细胞因子后迅速增殖，在培养第加入细胞因子后迅速增殖，在培养第22天增殖曲线达顶峰；天增
24、殖曲线达顶峰；CD3+CD56+细胞增加细胞增加1000-6000倍；倍；28-30天达平台期，细胞毒活性亦达峰值；天达平台期，细胞毒活性亦达峰值；2）高细胞毒力）高细胞毒力 CIK细胞对肿瘤细胞的抑制指数为细胞对肿瘤细胞的抑制指数为1.5-3.5，LAK细胞为细胞为0.5-1.5；3）杀瘤作用谱广泛，非）杀瘤作用谱广泛，非MHC限制性限制性4）细胞来源丰富）细胞来源丰富 正常或患者（正常或患者（CML、MM、ALL、AML、淋巴瘤、结、淋巴瘤、结肠癌、乳腺癌、肾癌）的骨髓单个核细胞或外周学单个核肠癌、乳腺癌、肾癌）的骨髓单个核细胞或外周学单个核细胞、干细胞均可诱导获得细胞、干细胞均可诱导获得
25、CIK细胞；细胞；5）对多耐药性肿瘤细胞同样敏感）对多耐药性肿瘤细胞同样敏感 阿霉素、常春藤新碱等阿霉素、常春藤新碱等6）不受免疫抑制剂）不受免疫抑制剂CSA、FK506影响影响7）抵抗肿瘤细胞诱发的效应细胞）抵抗肿瘤细胞诱发的效应细胞Fas-FasL凋亡凋亡 细胞内表达抗凋亡基因和保护基因细胞内表达抗凋亡基因和保护基因8）对正常骨髓前体细胞毒性很小）对正常骨髓前体细胞毒性很小CIK细胞不仅对白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统细胞不仅对白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统肿瘤治疗有效，对肾癌、乳腺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、肿瘤治疗有效，对肾癌、乳腺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、卵巢癌等细胞系均有
26、极强的杀伤活性（卵巢癌等细胞系均有极强的杀伤活性（6090）。将）。将CIK细胞与树突状细胞和肿瘤细胞系抗原联合应用，能够进细胞与树突状细胞和肿瘤细胞系抗原联合应用，能够进一步提高对肿瘤的杀伤活性。一步提高对肿瘤的杀伤活性。最适合放、化疗后、手术后或骨髓移植后的患者。最适合放、化疗后、手术后或骨髓移植后的患者。毒副作用：轻度发热、畏寒、疲乏等，较轻且可自行缓解毒副作用：轻度发热、畏寒、疲乏等，较轻且可自行缓解分分2-3次静脉回输体内次静脉回输体内采集病人外周血单个核细胞采集病人外周血单个核细胞加入多种细胞因子培养加入多种细胞因子培养扩增、活化、诱导成为扩增、活化、诱导成为CIK细胞细胞发挥抗肿
27、瘤作用发挥抗肿瘤作用到达病变部位直接清除残存肿瘤细胞到达病变部位直接清除残存肿瘤细胞调节和增强全身免疫机能调节和增强全身免疫机能防止肿瘤复发及转移防止肿瘤复发及转移 CIK的临床应用经经IL-2基因转染的基因转染的CIK治疗肺、肝、淋巴结转移性肾癌治疗肺、肝、淋巴结转移性肾癌(1)、直肠癌直肠癌(7)、淋巴瘤、淋巴瘤(2)的的I期临床试验期临床试验结果：结果：10例经例经CIK治疗后，患者血清治疗后，患者血清-IFN、GM-CSF和和TGF-水平均升高，外周血水平均升高，外周血CD3+T细胞均显著增加，外周细胞均显著增加，外周血淋巴细胞杀伤活力均升高。血淋巴细胞杀伤活力均升高。1例完全缓解，例
28、完全缓解，3例病情得到稳例病情得到稳定。定。国内对国内对87例急性白血病患者进行了例急性白血病患者进行了CIK细胞治疗，其中细胞治疗，其中84例血液学缓解期接受例血液学缓解期接受CIK治疗的持续完全缓解治疗的持续完全缓解(CCR)率为率为75%，中位，中位CCR期为期为26月；月；2例（例（2/3）脾脏肿大明显缩小，）脾脏肿大明显缩小，均均CCR至今（至今（12及及16月）。月）。CIK后持续完全缓解（后持续完全缓解（CCR）概率）概率0 00.20.20.40.40.60.60.80.81 11.21.20 03 36 69 916162020292932324040434347477171
29、79799191103103CIK治疗后时间(月)治疗后时间(月)%CR1(n=84)CR1(n=84)CR2(n=10)CR2(n=10)HR但有肿块(n=6)HR但有肿块(n=6)NR(n=10)NR(n=10)CIK治疗后不同型患者的治疗后不同型患者的CCR概率（概率（CR期）期）0 00.20.20.40.40.60.60.80.81 11.21.20 02 24 46 6141423232929313134344040424244444747717182829191CIK治疗后时间(月)治疗后时间(月)%B-ALL(n=50)B-ALL(n=50)M2+3(31)M2+3(31)M4
30、+5(10)M4+5(10)CIK治疗后治疗后CR期患者追踪期患者追踪CIK治疗后骨髓残留异常染色体和治疗后骨髓残留异常染色体和/或或白血病标志消失白血病标志消失 IgH/TCR 14/14转阴转阴t(15;17)和和/或或PML/RARa 3/3转阴转阴t(8;21)和和/或或AML1/ETO 2/2转阴转阴有微小残留白血病的有微小残留白血病的ALL儿童在停化疗后用儿童在停化疗后用CIK的疗效的疗效化疗化疗12月后仍残留月后仍残留IgH和和/或或TCR（+）者，自愿选择）者，自愿选择CIK或单纯化疗或单纯化疗 CIK组：组：14/14 IgH和和/或或TCR转阴转阴 中位随访中位随访18月，
31、均月，均CCR 单纯化疗：单纯化疗：6/14 IgH和和/或或TCR转阴转阴 8/14 复发复发国内国内1999-2001年对年对256例各种中晚期肿瘤患者（包括乳腺癌、例各种中晚期肿瘤患者（包括乳腺癌、肺癌、肠癌、胃癌、淋巴瘤等）进行了肺癌、肠癌、胃癌、淋巴瘤等）进行了1-4疗程疗程CIK治疗治疗治疗后部分缓解和轻度缓解为治疗后部分缓解和轻度缓解为207例（例（80.86%）随访随访 1年生存期为年生存期为96.06%2年生存期为年生存期为92.96%3年生存期为年生存期为88.38%生存质量卡氏评分提高率为生存质量卡氏评分提高率为88.28%经治疗后对心、肝、肾功能均未引起不良反应，仅数例
32、有经治疗后对心、肝、肾功能均未引起不良反应，仅数例有一过性发热，一过性发热，24小时即正常。小时即正常。国内对国内对13例原发性肝癌进行例原发性肝癌进行CIK治疗，肝癌患者血清平均治疗，肝癌患者血清平均病毒载量由治疗前病毒载量由治疗前1.85 106 HBV DNA拷贝拷贝/ml降低为治疗降低为治疗后后1个月个月8.75 105，2个月个月1.44 105，3个月个月1.41 105 淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗原特异性T细胞受体修饰的T淋巴细胞(TCRT)嵌合抗原受体T细胞(CART)
33、非特异性特异性如何建立高效的、稳定的、记忆的、特异的过继性细胞免疫治疗？TCR engineering of lymphocytesfor use in ACT治疗方法原理优点缺点已开展的临床试验TIL提取患者的手术标本或者转移的淋巴结中抗肿瘤活性强的，亲和能力好的T淋巴细胞，体外增殖和活化后回输到患者体内1.高效、特异、副作用小；2.TIL抗肿瘤效果明显；1.并不适合所有肿瘤患者，如丧失手术机会或无法取到肿瘤标本；2.在体内的有效T细胞数量少，活力较低；3.T细胞体内存活时间不够长。1.转移性恶性黑色素瘤，1988；2.转移性恶性黑色素瘤，2009，Rosenberg。TCRT比较常用的是通
34、过基因转移技术构建肿瘤抗原特异性TCR，通过病毒载体等方法将其转入T淋巴细胞，大量扩增后回输患者。1.特异性更高，副作用更小；2.肿瘤适用范围更广；3.体内存活时间更长；4.体内细胞数量更多。1.MHC限制性；2.内外源性和链的错配；3.安全性相对较差;4.TIL来源有限1.HLA-A2阳性的转移性恶性黑色素瘤(MART-1)，2006，Morgan；2.黑色素瘤患者和滑膜瘤(NY-ESO-1)，2011,JCO；2015,Clin Cancer Res治疗方法原理优点缺点已开展的临床试验TCRT比较常用的是通过基因转移技术构建肿 瘤 抗 原 特 异 性TCR，通过病毒载体等方法将其转入T淋巴
35、细胞，大量扩增后回输患者。1.特异性更高，副作用更小；2.肿瘤适用范围更广；3.体内存活时间更长；4.体内细胞数量更多。1.MHC限制性；2.内外源性和链的错配；3.安全性相对较差;4.TIL来源有限1.HLA-A2阳性的转移性恶性黑色素瘤(MART-1),2006,Morgan；2.黑色素瘤患者和滑膜瘤(NY-ESO-1)，2011,JCO;2015,Clin Cancer ResCART将识别肿瘤相关抗原的单链抗体(通常是scFv)和T细胞的活化基序(ITAM,常为CD3，FcRI)相结合，通过基因转导赋予T细胞肿瘤靶向性、更强的杀伤活性和持久的生命力。1.特异性高；2.肿瘤抗原类型多,肿
36、瘤适用范围广；3.非MHC限制性；4.体内存活时间长。1.毒副作用较大，如脱靶效应、细胞因子风暴等；2.T细胞在体内的活性无法检测。1.霍奇金淋巴瘤(CD20-CART)，2008，Till；2.慢性淋巴细胞白血病(CD19-CART)，2011，June；3.难治性B细胞淋巴瘤，2012，Rosenberg。49将CAR克隆入病毒载体患者表达CAR的人T细胞-CART体外扩增C Chimeric himeric A Antigen ntigen R Receptor eceptor T T cell cell(CAR-TCAR-T)跨膜区 Transmambrane domain抗原结合区E
37、pitope binding site铰链区 Hinge胞内信号区(第1、2、3、4代)Signaling domain单克隆抗体MAbTCR50First-Generation(prototype)CARThe introduction of CARs recognizing tumor antigens through single-chain variable fragments(scFvs)isolated from antigen-specific monoclonal antibodies(mAbs)linked to intracellular signaling domains
38、scFv structure50Second-and Third-Generation CARNewer Generation CARs Constructs(The fourth-generation CAR)TRUCKs:T cells Redirected for Universal Cytokine Killing CAR redirected T cells which constitutively produce a transgenic protein(payload)and release the protein upon CAR engagement of target.a
39、nuclear factor of the activated T cell(NFAT)-responsive expression cassette for the inducible expression of a transgenic cytokine,for example,IL-12.TRUCK cells with inducible release of IL-12 attract and activate innate immune cells to the targeted tumor lesion which in turn eliminate cancer cells n
40、ot recognized by CAR T cells.5354用于嵌合型抗原受体改造的靶点用于嵌合型抗原受体改造的靶点CAR-T研究进展双特异性抗体56Immunol Rev.2014.257:107-26.CAR-T细胞治疗恶性血液病临床研究靶标靶标肿瘤肿瘤载体载体CAR信号域信号域研究进度（期）研究进度（期）研制机构研制机构CD19儿童B细胞白血病和淋巴瘤慢病毒4-1BB-CD3I宾夕法尼亚大学CD19CD19+肿瘤慢病毒4-1BB-CD3I宾夕法尼亚大学CD19急性淋巴细胞白血病慢病毒4-1BB-CD3I宾夕法尼亚大学CD19慢性淋巴细胞白血病慢病毒4-1BB-CD3II宾夕法尼亚大
41、学CD19慢性淋巴细胞白血病慢病毒CD28-CD3,4-1BB-CD3I宾夕法尼亚大学CD19复发或新诊断的急性淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病慢病毒，逆转录病毒CD28-CD3I斯隆-凯特琳癌症纪念医院CD19儿童复发性B细胞白血病逆转录病毒CD28-CD3I斯隆-凯特琳癌症纪念医院CD19非霍奇金淋巴瘤，慢性淋巴细胞白血病逆转录病毒CD28-4-1BB-CD3/CD28-CD3I贝勒医学院CD19急性淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，非霍奇金淋巴瘤逆转录病毒CD28-CD3I贝勒医学院CD19慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤转座子CD28-CD3I安德森肿瘤中心CD19B细胞白血病转座子CD
42、28-CD3I安德森肿瘤中心CD19儿童白血病和淋巴瘤，慢性淋巴细胞、小淋巴细胞性淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，大细胞性淋巴瘤、B-细胞白血病 逆转录病毒CD28-CD3I国立癌症研究院 CAR-T的挑战与风险不良反应可能原因应对措施细胞因子风暴与CAR结构、肿瘤负荷及类型、患者基因多态性等相关1、设计安全的CARs；2、剂量爬坡；3、自杀基因；4、调节CAR亲和性肿瘤溶解综合征输注CAR-T细胞的体内增殖以及体内细胞因子释放有关1、剂量爬坡2、严密监控脱靶效应TAA特异性不高寻找肿瘤特异性抗原插入突变插入外源基因优化载体类型和转染方式挑战：寻找新靶标、研发新技术58树突状细胞与 肿瘤免疫治疗 加工处
43、理和提呈抗原的过程抗原可分为内源性抗原(病毒、细胞内感染细菌、肿瘤抗原)与外源性抗原(绝大多数细菌或其它病原、异物)。抗原提呈抗原提呈+融合融合裂解裂解酸提酸提合成合成提取提取mRNA抗原肽抗原肽抗原肽抗原肽裂解物裂解物vectorcDNA转染转染肿瘤细胞肿瘤细胞树突状细胞的抗原致敏抗原提呈抗原提呈 肿瘤细胞肿瘤细胞DC恶性黑色素瘤、前列腺癌、恶性淋巴瘤、白血病、其他实体瘤恶性黑色素瘤、前列腺癌、恶性淋巴瘤、白血病、其他实体瘤（结直肠癌、（结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝胰管壶腹癌、胃癌、食管乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝胰管壶腹癌、胃癌、食管癌、转移性肾癌癌、转移性肾癌、儿童青少年好发的间叶
44、组织来源的肉瘤）的免疫治、儿童青少年好发的间叶组织来源的肉瘤）的免疫治疗。疗。树突状细胞瘤苗的临床应用研究机构产品名称描述肿瘤类型研究状态NeoStem,Inc.(美国)DC-TC采用辐照后凋亡的肿瘤细胞激活自体DC转移性黑色素瘤期(NCT01875653)University Hospital Erlangen(德国)DC自体DC负载自体肿瘤mRNA黑色素瘤期(NCT00045968)Northwest Biotherapeutics(美国)DCVax(R)-L肿瘤细胞裂解物激活自体DC多发性骨髓瘤期(NCT01983748)Argos Therapeutics(美国)AGS-003肿瘤抗原
45、多肽激活自体DC肾细胞癌期(NCT01582672)NCCR(美国)DC肿瘤激活自体DC非霍奇金淋巴瘤完成期(NCT00006434)CreaGene(韩国)CreaVaxRCC自体单核细胞在GM-CSF和IL-4作用下诱导成未成熟DC，采用肿瘤提取物刺激活化转移性肾细胞癌韩国获批上市Genoa Biotechnologia(巴西)Hybricell自体单核细胞经过细胞因子诱导成DC后于患者的肿瘤细胞融合多种肿瘤巴西获批上市Dendreon(美国)Provenge前列腺癌抗原肽PAP-GM-CSF融合蛋白激活自体DC前列腺癌美国获批上市获批上市或III期临床在研的树突状细胞疫苗已报道的树突状细
46、胞治疗黑色素瘤患者生存期统计Lancet Oncol 2014;15:e25767Last update:Nov 14,2013.已报道的树突状细胞治疗脑肿瘤及肾癌患者生存期统计66Ralph Steinman Ralph,however,pursued his studies of DCs relentlessly.He used to tell his laboratory members and colleagues：“just do the experiment”！67抗原致敏的人树突状细胞III期临床试验2002.5获得获得SFDA I 期临床试验批文期临床试验批文2004.2完成完
47、成I期临床研究，上报期临床研究，上报SFDA，申请申请II期临床研究期临床研究2004.11获得获得SFDA II期临床研究批文期临床研究批文（2004L03745）2008.12完成统计分析、资料总结、临完成统计分析、资料总结、临床药理基地现场核查，上报床药理基地现场核查，上报SFDA申请申请III期临床研究期临床研究2009.1SFDA受理（受理（CXSB090001）2009.7药审咨询会药审咨询会2012.7获得获得SFDA III期临床研究批文期临床研究批文(2012L01632)主要用于转移性大肠癌的免疫治疗主要用于转移性大肠癌的免疫治疗APDC联合化疗治疗转移性大肠癌疗效微囊化人
48、工细胞人工抗原递呈细胞亚细胞成分的细胞疫苗细胞治疗技术不断创新 v个体化细胞治疗产品临床级规模化制备技术个体化细胞治疗产品临床级规模化制备技术v基于磁性粒子的细胞分离纯化技术基于磁性粒子的细胞分离纯化技术v细胞治疗产品的体外诱导分化技术细胞治疗产品的体外诱导分化技术v细胞治疗产品的修饰技术细胞治疗产品的修饰技术v细胞治疗产品的药效学评价技术细胞治疗产品的药效学评价技术v细胞治疗产品的质量控制关键技术细胞治疗产品的质量控制关键技术肿瘤对免疫的贡献好像要肿瘤对免疫的贡献好像要比免疫对肿瘤的贡献大比免疫对肿瘤的贡献大ImmunologistDoctor我有办法了！我有办法了！VaccineACTGene modifierMcAbImmunologistDoctorCao X.Nature Immunology.2008;9:339InhibitorResponseEscapeAnti-tumor ImmunityEnhancerEnhance the“Enhancer”Suppress the“Suppressor”
