1、选修选修3考纲导学 1基因工程的诞生。基因工程的诞生。2.基因工程的原理及技术。基因工程的原理及技术。3.基因工程的应基因工程的应用。用。4.蛋白质工程。蛋白质工程。专题专题1基因工程基因工程微知识小题练微知识小题练 微考点大讲堂微考点大讲堂 微考场大收获微考场大收获 微知识小题练微知识小题练 夯基固本基础自测夯基固本基础自测 微知识一基因工程的概念及工具1概念知识梳理知识梳理 目的基因目的基因体外体外分子分子基因重组基因重组受体受体远缘杂交不亲和远缘杂交不亲和性状性状原核生物原核生物特定核苷酸序列特定核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键黏性末端黏性末端平末端平末端DNA片段片段黏性末端黏性末端黏性
2、末端黏性末端平末端平末端质粒质粒自我复制自我复制限制酶切割位点限制酶切割位点标记基因标记基因基因基因基因文库基因文库PCR技术技术化学方法化学方法目的基因目的基因标记基因标记基因目的基因目的基因受体细胞受体细胞目的基因目的基因稳定和表达稳定和表达农杆菌转化法农杆菌转化法花粉管通道法花粉管通道法显微注射技术显微注射技术Ca2处理法处理法稳定和表达稳定和表达农杆菌转化法农杆菌转化法花粉管通道法花粉管通道法显微注射技术显微注射技术Ca2处理法处理法DNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交抗原抗体抗原抗体抗虫或抗病抗虫或抗病不一定完全符合不一定完全符合蛋白质的结构蛋白质的结构氨基酸氨基酸脱氧核苷酸脱氧核
3、苷酸1限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶。()2EcoliDNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。()3目的基因导入双子叶植物一般采用农杆菌转化法。()4为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体。()5检测目的基因是否导入受体细胞可用抗原抗体杂交技术。()6蛋白质工程的目的是改造或合成人类需要的蛋白质。()7蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构。()8由大肠杆菌工程菌获得人的干扰素后可直接应用。()基础自测基础自测 微考点大讲堂微考点大讲堂 考点例析对点微练考点例析对点微练 微考点一微考点一非细胞结构的
4、生物非细胞结构的生物病毒病毒 3载体具备的条件条件条件目的目的稳定并能复制稳定并能复制目的基因稳定存在且数量可扩大目的基因稳定存在且数量可扩大有一个至多个限制酶切割位点有一个至多个限制酶切割位点可携带多个或多种外源基因可携带多个或多种外源基因具有特殊的标记基因具有特殊的标记基因便于重组便于重组DNA的鉴定和选择的鉴定和选择 3载体具备的条件条件条件目的目的稳定并能复制稳定并能复制目的基因稳定存在且数量可扩大目的基因稳定存在且数量可扩大有一个至多个限制酶切割位点有一个至多个限制酶切割位点可携带多个或多种外源基因可携带多个或多种外源基因具有特殊的标记基因具有特殊的标记基因便于重组便于重组DNA的鉴
5、定和选择的鉴定和选择 4基因工程的理论基础【例1】下列有关限制性核酸内切酶的叙述中正确的是()A用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有2个 B限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 CCATG和GGATCC序列被限制酶切出的黏性末端碱基数不同 D只有用相同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒解析：解析：切割一个切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有磷酸二酯键有4个；个；CATG和和GGATCC序列被限制酶切出的黏序列被限制酶切出的黏性末
6、端碱基数相同，都为性末端碱基数相同，都为4个碱基；只要切割出来的黏性末端的碱基序个碱基；只要切割出来的黏性末端的碱基序列相同，都可以被列相同，都可以被DNA连接酶连接。连接酶连接。答案：答案：B 对点微练1限制性核酸内切酶Mun和限制性核酸内切酶EcoR的识别序列及切割位点分别是CAATTG和GAATTC。如图表示四种质粒和目的基因，其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是()解析：解析：由图可知，质粒由图可知，质粒B上无标记基因，不适合作为载体；质粒上无标记基因，不适合作为载体；质粒C和和D的标记基因上都有限制性核酸内切酶的识
7、别位点。只有质粒的标记基因上都有限制性核酸内切酶的识别位点。只有质粒A上既上既有标记基因，且有标记基因，且Mun的切割点不在标记基因上。的切割点不在标记基因上。答案：答案：A 对点微练2根据基因工程的有关知识，回答下列问题。(1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下：AATTCG GCTTAA 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是_。平末端平末端 黏性末端黏性末端 切割产生的切割产生的DNA片段末端与片段末端与EcoR切割产生的相同切割
8、产生的相同 (3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和_DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是_，产物是_。若要在体外获得大量反转录产物，常采用_技术。(5)基因工程中除质粒外，_和_也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 _。T4 Ecoli mRNA(或或RNA)cDNA(或或DNA)PCR(聚合酶链式反应聚合酶链式反应)动植物病毒动植物病毒 噬菌体噬菌体 未处理的大肠杆菌吸收质粒未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源外源DNA)的能力极弱的能力极弱 解析：此题考查基因工程应用的相关知识。(1)D
9、NA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有黏性末端和平末端两种类型。(2)为使运载体与目的基因相连，应使二者被切割后产生的末端相同，故用另一种限制酶切割产生的末端必须与EcoR切割产生的末端相同。(3)根据酶的来源不同，DNA连接酶分为EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶。(4)以RNA为模板，合成DNA的过程称为逆转录，若要体外获得大量DNA分子，可以使用PCR技术。(5)在基因工程中，通常利用质粒作为运载体，另外噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。(6)大肠杆菌作为受体细胞时，常用Ca2处理，使之成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞。1.目的基因的获取(1)直接分离：从自然界已
10、有的物种中分离，如从基因文库中获取。(2)人工合成目的基因的常用方法：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。微考点二微考点二 基因工程的操作过程基因工程的操作过程 1.目的基因的获取(1)直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。(2)人工合成目的基因的常用方法：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。微考点二微考点二 基因工程的操作过程基因工程的操作过程 2基因表达载体的构建(1)基因表达载体的组成及作用：(2)构建过程：3将
11、目的基因导入受体细胞生物种类生物种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞常用方法常用方法农杆菌转化法农杆菌转化法显微注射技术显微注射技术感受态细胞法感受态细胞法受体细胞受体细胞体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞原核细胞转化过程转化过程将目的基因插入到将目的基因插入到Ti质粒的质粒的TDNA上上农杆菌农杆菌导入导入植物细胞植物细胞整合到整合到受体细胞的染色体受体细胞的染色体DNA上上表达表达将含有目的基因的将含有目的基因的表达载体提纯表达载体提纯取取卵卵(受精卵受精卵)显微显微注射注射受精卵发育受精卵发育获得具有新性状获得具有新性状的动物的动物Ca2处理细胞处理细胞感感受态细胞受态
12、细胞重组表重组表达载体与感受态细达载体与感受态细胞混合胞混合感受态细感受态细胞吸收胞吸收DNA分子分子 4.目的基因的检测与鉴定 5蛋白质工程与基因工程的关系项目项目蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程区区别别过程过程从预期的蛋白质功能出发从预期的蛋白质功能出发设设计预期的蛋白质结构计预期的蛋白质结构推测应推测应有的氨基酸序列有的氨基酸序列找到相对应找到相对应的脱氧核苷酸序列的脱氧核苷酸序列(基因基因)目的基因的获取目的基因的获取基因表达载体的基因表达载体的构建构建将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定目的目的定向改造或生产人类所需的蛋定向改造或生
13、产人类所需的蛋白质白质定向改造生物的遗传特性，获得人定向改造生物的遗传特性，获得人类所需的生物类型或生物产品类所需的生物类型或生物产品结果结果可生产自然界没有的蛋白质可生产自然界没有的蛋白质原则上只能生产自然界已存在的蛋原则上只能生产自然界已存在的蛋白质白质联系联系(1)蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程；蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程；(2)基因工程能为蛋白质工程提供理论及技术支持，蛋白质工程可对基基因工程能为蛋白质工程提供理论及技术支持，蛋白质工程可对基因工程中所需的某些酶进行修饰、改造，使之更符合需要因工程中所需的某些酶进行修饰、改造，使之更符合需
14、要【例2】北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是()A过程获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序 B将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白 C过程构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选 D应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达解析：解析：过程中通过逆转录法获得的目的基因，可用于基因工过程中通过逆转录法获得的目的基因，可用于基因工程，但该目的基因不存在内含子和非编码序列，因此不能
15、用于比目鱼程，但该目的基因不存在内含子和非编码序列，因此不能用于比目鱼的基因组测序；将多个抗冻基因编码区相连形成的能表达的新基因可的基因组测序；将多个抗冻基因编码区相连形成的能表达的新基因可能不再是抗冻基因；利用农杆菌的目的是将重组质粒导入受体细胞，能不再是抗冻基因；利用农杆菌的目的是将重组质粒导入受体细胞，而不是筛选重组质粒；应用而不是筛选重组质粒；应用DNA探针技术，可以检测受体细胞中是否探针技术，可以检测受体细胞中是否成功导入了目的基因，但不能检测目的基因是否完全表达。成功导入了目的基因，但不能检测目的基因是否完全表达。答案：答案：B 对点微练3科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培
16、育成转基因抗盐烟草。下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答下列问题。耐热的耐热的DNA聚合聚合 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 Sma会破坏质粒的抗性基因和外源会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因中的目的基因 BamH和和Hind (3)图中依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的_、_过程。(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是_ _。脱分化脱分化 再分化再分化 抗盐基因抗盐基因(或目的基因或目的基因)将培育的烟草幼苗栽培于含有一定盐的土壤将
17、培育的烟草幼苗栽培于含有一定盐的土壤中，观察该烟草植株的生长状态中，观察该烟草植株的生长状态 解析：理解转基因技术的步骤、成果是解题的关键。(1)PCR技术所需的原料是合成DNA的四种脱氧核苷酸。根据PCR反应原理，每次循环可分为在95时进行变性，在55时进行复性，在72时延伸，该过程需要耐热的DNA聚合酶。(2)从图中信息可知，Sma酶的切割位点位于目的基因和M抗生素抗性基因上。分析抗盐基因的DNA片段，可知该DNA含四种限制酶切点，其中Sma位于目的基因上，不宜采用。EcoR位于目的基因两侧，若用EcoR切割，则目的基因会自身环化。BamH与Hind位于目的基因两端，且质粒中也有相应的合适
18、的切割位点，因此用BamH和Hind才能完整地切下该抗盐基因，同时保证目的基因与质粒连接方式的唯一性，防止自身环化。(3)转基因后的植物细胞，经脱分化产生愈伤组织，经再分化形成根、芽等，进而产生新的植株。对点微练4在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。如图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答：(1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、_、将目的基因导入受体细胞、_。(2)A过程需要的酶有_和_。基因表达载体的构建基因表达载体的构建 目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定 限制酶限制酶 DN
19、A连接酶连接酶 (3)要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用_处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为_态；然后将_在缓冲液中混合培养完成转化过程。(4)含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过C_和E_。如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入_。(5)目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是_。这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是_。Ca2 感受感受 重组质粒和感受态细胞重组质粒和感受态细胞 脱分化脱分化 再分化再分化 卡那霉素卡那霉素 目的基因是否插入受体细胞的目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上分子上 DNA分
20、子杂交技术分子杂交技术 解析：(1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。(2)基因表达载体构建过程中，需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使它们产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶把这两个DNA片段连接起来。(3)农杆菌转化法导入目的基因时，首先必须用Ca2处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。(4)植物组织培养过程的关键步骤是脱分化和再分化。因为只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长，故若要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的
21、培养基中加入卡那霉素。(5)目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上，检测采用的方法是DNA分子杂交技术。解析：(1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。(2)基因表达载体构建过程中，需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使它们产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶把这两个DNA片段连接起来。(3)农杆菌转化法导入目的基因时，首先必须用Ca2处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。(4)植物组织培养过程
22、的关键步骤是脱分化和再分化。因为只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长，故若要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入卡那霉素。(5)目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上，检测采用的方法是DNA分子杂交技术。微考场大收获微考场大收获 加固训练练透考点加固训练练透考点 1(解析：解析：过程过程是逆转录过程，需要逆转录酶催化；从过程是逆转录过程，需要逆转录酶催化；从过程cDNA中获取所需要的目的基因，根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基中获取所需要的目的基因，根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置或
23、基因翻译产物蛋白质等特性来获取，不需要用因在染色体上的位置或基因翻译产物蛋白质等特性来获取，不需要用解旋酶，也不需要解旋酶，也不需要PCR；过程；过程应用应用CaCl2溶液处理大肠杆菌，使其成溶液处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞；过程为感受态细胞；过程鉴别目的基因是否导入受体细胞可利用鉴别目的基因是否导入受体细胞可利用DNA分分子杂交技术。子杂交技术。答案：答案：AD 2(2015广东卷)如图为培育转基因山羊生产人酪蛋白的流程图。下列叙述正确的是(双选)()A过程所用的人酪蛋白基因可从人cDNA文库中获得 B过程可选用囊胚期或原肠胚期的胚胎进行移植 C过程可使用胚胎分割技术扩大转基因山羊群体
24、D过程人酪蛋白基因在细胞质内进行转录、翻译解析：解析：由图可知，由图可知，过程表示基因表达载体的构建，目的基因的过程表示基因表达载体的构建，目的基因的获得方法很多，从人获得方法很多，从人cDNA文库中获取就是其中之一，文库中获取就是其中之一，A正确；过程正确；过程表示胚胎移植，山羊的胚胎移植应在囊胚期以前，表示胚胎移植，山羊的胚胎移植应在囊胚期以前，B错误；胚胎分割可错误；胚胎分割可以得到多个遗传性状相同的个体，在以得到多个遗传性状相同的个体，在过程中可以应用，过程中可以应用，C正确；真核正确；真核生物基因表达的转录过程发生在细胞核，翻译过程发生在细胞质，生物基因表达的转录过程发生在细胞核，翻
25、译过程发生在细胞质，D错错误。误。答案：答案：AC3(解析：解析：稀释涂布平板法可以测定活菌数量，但如果菌种之间的距稀释涂布平板法可以测定活菌数量，但如果菌种之间的距离较小时会有多个活菌种共同形成一个菌落的现象，菌落数只能大约离较小时会有多个活菌种共同形成一个菌落的现象，菌落数只能大约推测出活菌数，不能准确计算活菌数，推测出活菌数，不能准确计算活菌数，A错误；外源错误；外源DNA作为一个完整作为一个完整的基因，自身含有启动子和终止子，的基因，自身含有启动子和终止子，B错误；所有错误；所有DNA分子都是脱氧核分子都是脱氧核糖和磷酸交替连接，是共性，不同的碱基序列才是糖和磷酸交替连接，是共性，不同
26、的碱基序列才是DNA分子的特异分子的特异性，性，DNA分子杂交原理是相应碱基序列的互补配对，分子杂交原理是相应碱基序列的互补配对，C错误；通过错误；通过DNA分子杂交鉴定含有某特定分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆。因为放射性标记的的细菌克隆。因为放射性标记的DNA探针能与相应的探针能与相应的DNA杂交产生放射自显影，而只有特定的杂交产生放射自显影，而只有特定的DNA才才与探针相结合，所以可以显示原培养皿中含有特定与探针相结合，所以可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位的细菌菌落位置，置，D正确。正确。答案：答案：D 4(解析：解析：该题目属于蛋白质工程，已经获得该目的基因片段，不需
27、该题目属于蛋白质工程，已经获得该目的基因片段，不需要合成编码目的肽的要合成编码目的肽的DNA片段，故片段，故A错误；是需要构建含目的肽错误；是需要构建含目的肽DNA片段的表达载体，但这不是第一步，故片段的表达载体，但这不是第一步，故B错误；蛋白质工程的第一步是错误；蛋白质工程的第一步是根据蛋白质的功能，设计根据蛋白质的功能，设计P1氨基酸序列，从而推出其基因序列，故氨基酸序列，从而推出其基因序列，故C正正确；该基因表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽确；该基因表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽P1，目前在，目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，而目的多肽是抗菌性的基础上
28、研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，而目的多肽是抗菌性强但溶血性弱，所以必需对其改造，保持其抗菌性强，抑制其溶血强但溶血性弱，所以必需对其改造，保持其抗菌性强，抑制其溶血性，故性，故D错误。错误。答案：答案：C 5(全部全部 部分部分 筛选筛选 乙乙 表达产物表达产物 耐旱性耐旱性 (4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3 1时，则可推测该耐旱基因整合到了_(填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。解析：(1)基因组文库中含有该生物的全部基因，而cDNA文库又称部分基因文库，含有该生物的部分基因。(2)基因组文库中含有该生物的全部基因，需要将目的
29、基因筛选出来。(3)利用农杆菌转化法将耐旱基因转移到不耐旱的植物乙的体细胞中，经植物组织培养技术得到再生植株。要确认耐旱基因是否表达，需要检测再生植株中有无该基因的表达产物，如果呈阳性，再在个体水平上检测该植株的耐旱性是否得到提高。(4)若耐旱性植株自交，后代中耐旱性不耐旱性31，则亲本为杂合子，可判断基因整合到了同源染色体的一条上。同源染色体的一条上同源染色体的一条上 6(细胞核细胞核 (2)步骤中，重组胚胎培养到_期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。(3)步骤中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的_设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind和Pst限制
30、酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_酶的酶切位点。(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。囊胚囊胚 核苷酸序列核苷酸序列 Hind和和Pst 蛋白质蛋白质 解析：(1)核移植过程中，体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核，若不去掉卵母细胞的细胞核，细胞里面就有两个细胞核，造成遗传物质不能稳定表达。(2)ES细胞是由早期胚胎(囊胚)的内细胞团分离出来的一类细胞。(3)步骤过程是将目的基因导入受体细胞(ES细胞)中，导入之前应构建基因表达载体。在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因，其条件是模板DNA、根据Rag2基因的核苷酸序列设计的引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等，另据题干可知，获得Rag2目的基因需要用Hind和Pst两种限制酶，所选择的载体上应具有Hind和Pst酶的酶切位点，以便目的基因和载体能够连接在一起。(4)检测目的基因是否翻译出相应蛋白质时，应采用抗原抗体杂交技术，即提取蛋白质，用相应的抗体进行抗体抗原杂交，看是否有杂交带。
