1、 薄层层析分离技术薄层层析分离技术 Thin-layer chromatography 1 Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography.The mobile(moving)phase is a liquid.The stationary phase is usually silica or alumina.This phase is very polar.The principle of operation is the same!2Th
2、in Layer ChromatographyThe surface of the plate consists of a very thin layer of silica on a plastic or aluminum backing.The silica is very polar.This is the stationary phase.Spot the material at the origin(bottom)of the TLC plate.Place the plate into a glass jar with a small amount of a solvent in
3、the glass jar.This solvent acts as the moving phase.Remove the plate from the bottle when the solvent is close to the top of the plate.Visualize the spots.Non-polar compounds will be less strongly attracted to the plate and will spend more time in the moving phase.This compound will move faster and
4、will appear closer to the top of the plate.Polar compounds will be more strongly attracted to the plate and will spend less time in the moving phase and appear lower on the plate.3OHSiOOHSiOOOOHSiOOOHSiOOOHSiOOOSiOOSiOOSiOOSiOOOSiOOSiOOSiOOOStationary Phase:Silica(SiO2)4Stationary Phase:AluminaOAlOO
5、AlOOHAlOOHAlOOHAlOHOAcidic:-Al-OHNeutral:-Al-OH +-Al-O-Basic:-Al-O-5H2CH2CH2CCH2CH2CH2CH2CONHCH2NHCOH2CH2CH2CCH2CH2COCOH2CNHH2COOH固 定 相流 动 相聚 酰 胺 吸 附 作 用 原 理 6Thin-Layer Chromatography:A Two-Component MixtureMore polar!Less polar!solvent frontoriginmixturesolvent frontcomponent Bcomponent Aoriginsol
6、vent frontcomponent Bcomponent AoriginIncreasing Development Time7Be sure to remove the TLC plate when it appears that the solvent front isnt moving!Reason:the solvent is evaporating as it moves up the plate.Results:If you dont remove the plate all of the spots will appear near the top of the plate!
7、This isnt a pretty sight and makes it difficult to get good Rf values!Important hint!8Visualization Method The previous slide shows colored spots.Most of the time,the spots wont show unless they are visualized!Vizualization is a method that is used to render the TLC spots visible.A visualization met
8、hod can be:Ultraviolet light Iodine vapors to stain spots Colored reagents to stain spots Reagents that selectively stain spots while leaving others unaffected.9Thin-Layer Chromatography:Determination of Rf Valuessolvent frontcomponent Bcomponent AorigindSdBdARf of component A =dA dSRf of component
9、B=dB dSThe Rf value is a decimal fraction,generally only reported to two decimal places10Thin-Layer Chromatography:Qualitative AnalysisA B unknown111、薄层色谱：薄层色谱法，是薄层色谱：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测
10、定的方法。别，杂质检查或含量测定的方法。122 仪器与材料：仪器与材料：2.1 玻板：除另有规定外，用玻板：除另有规定外，用5cm20cm，10cm20cm或或20cm20cm的规格，要求光滑的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾，平整、洗净后的不附水珠，晾干。干。132.2 固定相或载体：最常用的有硅胶固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶硅胶GF、硅胶硅胶H、硅胶硅胶HF254，其次有硅藻土、其次有硅藻土、硅藻土硅藻土G、氧化铝、氧化铝氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素、微晶纤维素微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求等。其颗粒大小，一般要求直径为直径为1040m。薄层涂布，
11、一般可分无薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用一定量的粘合剂，一般常用1015%煅石膏煅石膏（CaSO42H2O在在140烘烘4小时），混匀后小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.50.7%）适量调成糊状，均匀涂布于）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。层。142.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻涂布器：应能使
12、固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。层。2.4 点样器：常用具支架的微量注射器点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。中。2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。便于观察。15各种特制薄层各种特制薄层混合薄层混合薄层酸碱薄层和酸碱薄层和pH缓冲薄层缓冲薄层络合薄层络合薄层:用用AgNO3。等无机试剂的水溶液等无
13、机试剂的水溶液代替水调硅胶糊来铺制络合薄层代替水调硅胶糊来铺制络合薄层 涂布固定液的薄层涂布固定液的薄层 高效薄层高效薄层:它是由粒度十分均匀，直径最小为它是由粒度十分均匀，直径最小为5 5 m m，般为般为1010 m m左右的硅胶吸附剂，加上高度惰性的粘合剂，铺成质地十分致密、左右的硅胶吸附剂，加上高度惰性的粘合剂，铺成质地十分致密、平滑的高效高层预制板。这种预制板性能极稳定，层析展开后所得平滑的高效高层预制板。这种预制板性能极稳定，层析展开后所得斑点仍保持圆形不拖尾，分离清晰，分离效果极好。理论塔板高度斑点仍保持圆形不拖尾，分离清晰，分离效果极好。理论塔板高度最小可达最小可达1212 m
14、 m，一般在一般在20203030 m m。展开展开3737cmcm，理论塔板数可达数理论塔板数可达数千，为一般薄层的十倍。千，为一般薄层的十倍。16173 操作方法：操作方法：3.1 薄层板制备：除另有规定外，将薄层板制备：除另有规定外，将1份份固定相和固定相和3份水在研钵中向一方向研磨份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为布（厚度为0.20.3mm），），取下涂好薄取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在，后在110
15、烘烘30分钟。即置有干燥剂分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。（可通过透射光和反射光检视）。183.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为点样直径为24mm，点间距离约点间距离约为为1.52.0cm，点间距离可视斑点扩散情况点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。薄层表面。193.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，展
16、开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边板底边0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为为1015cm），），取出薄层板，晾干，
17、按各取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。20 直线式展开直线式展开 直线式展开技术可以分为直线式展开技术可以分为近水平展开、上行展开、下行近水平展开、上行展开、下行展开、双向展开和水平展开五展开、双向展开和水平展开五种形式，薄层色谱分寓一般样种形式，薄层色谱分寓一般样品多采用上行展开方法。品多采用上行展开方法。21 1近水平展开近水平展开 将适量展开剂倾人长方形玻将适量展开剂倾人长方形玻
18、璃展开槽中，点样后的薄层板璃展开槽中，点样后的薄层板浸入溶剂浸入溶剂0.5cm，薄层上端垫，薄层上端垫高使薄层与水平成高使薄层与水平成510角，展角，展开剂由下而上进行展开，这种开剂由下而上进行展开，这种方法常用于不含粘合剂的软板方法常用于不含粘合剂的软板展开展开 222上行展开上行展开 流动相沿薄层固定相向上运动流动相沿薄层固定相向上运动的展开方式。此时薄层板放置的的展开方式。此时薄层板放置的角度对流动相移动速率和角度对流动相移动速率和斑点形状有一定影响。薄层板水斑点形状有一定影响。薄层板水平角度为平角度为75时，对展开最为有利。时，对展开最为有利。这种展开方式适合于含有粘合剂这种展开方式适
19、合于含有粘合剂的硬板展开。的硬板展开。233下行展开下行展开 在展开槽内薄层板上端放置一个盛在展开槽内薄层板上端放置一个盛展开剂的溶剂槽，用厚滤纸将溶剂引到展开剂的溶剂槽，用厚滤纸将溶剂引到薄层板的上端，使展开剂自上而下流动。薄层板的上端，使展开剂自上而下流动。下行法中展开剂受重力和毛细管作用双下行法中展开剂受重力和毛细管作用双重影响，因此展开速度较快。由于这种重影响，因此展开速度较快。由于这种展开方式采用的装置比较复杂，目前只展开方式采用的装置比较复杂，目前只有在葡聚糖凝胶板上展开时或纸色谱中有在葡聚糖凝胶板上展开时或纸色谱中采用采用 244二维展开二维展开 在正方形薄层板上，在两个垂直的方
20、向在正方形薄层板上，在两个垂直的方向进行基于相同或不同机理的展开将样品点进行基于相同或不同机理的展开将样品点在薄层板的一个角上，第一方向展开适当距在薄层板的一个角上，第一方向展开适当距离后，取出薄层板，并使溶剂完全蒸发，再离后，取出薄层板，并使溶剂完全蒸发，再以与原点成以与原点成90方向展开。第二方向展开可采方向展开。第二方向展开可采用不同溶剂，也可将薄层板进行化学反应后，用不同溶剂，也可将薄层板进行化学反应后，再行第二方向展开，通称双向展开再行第二方向展开，通称双向展开.二维展开常用于复杂较多组分样品的展二维展开常用于复杂较多组分样品的展开，通过调节展开剂极性，增加展开距离，开，通过调节展开
21、剂极性，增加展开距离，进一步提高分离能力这种方法多用于定性，进一步提高分离能力这种方法多用于定性，很少用于定量。很少用于定量。255水平展开水平展开 圆形离心式展开圆形离心式展开 圆形向心式展开圆形向心式展开 特殊展开技术特殊展开技术:多次展开多次展开、分步、分步展开展开、离心展开、离心展开、梯度洗脱展、梯度洗脱展开开、梯度薄层、梯度薄层、多维技术、多维技术、加、加压展开压展开、控温展开、控温展开、楔形技术、楔形技术 26 薄层扫描的方法，除另有规定外，可根薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧
22、光法，用双结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。能获得满意的结果。274 注意事项：注意事项：4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠
23、所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。，光滑平整。4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在于室温下晾干后在110活化活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。干燥器中备用。4.3 点样点一般为圆点，不能太点样点一般为圆点，不能太大。大。28铺板铺板 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水水=1：23，硅胶，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液羧
24、甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。是展开剂的配制和展
25、开系统的饱和。293031点样点样 尽量用小的点样管。如果有足够的耐尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用性，最好只用1微升的点样管。这样，微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。晾干。32展开剂配制
26、展开剂配制 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度的要求，尽量达到实验室
27、仪器的最高精确度，比如：取，比如：取1ml的溶剂，应使用的溶剂，应使用1ml的单标移的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。数时候这不是必须的。3334展开系统的饱和展开系统的饱和 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效并使薄层板吸附蒸
28、气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。作应该尽量轻、快。35 (a)点状点样 (b)条状点样 (c)颈部点样 (d)沟槽点样 36371氨基丙酸；2-氨基丙酸;3氨基丁酸；4精氨酸；5丝氨酸；6天门冬氨酸；7羟基脯氨酸；8脯氨酸；9蛋氨酸；10酪氨酸；11谷氨酸；12苏氨酸；13甘氨酸;14组氨酸;15羧基赖氨酸；16亮氨酸；17异亮氨酸；18赖氨酸；19缬氨酸；20
29、蛋氨酸砜;21色氨酸;22苯丙氨酸；23磺基丙氨酸 23种氨基酸的双向层析图谱 38温湿度的控制温湿度的控制 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度
30、湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。的硫酸。39显色方法显色方法 物理显色物理显色 化学显色化学显色40物理显色物理显色 含有共轭双键的有机物质能吸收紫外光，含有共轭双键的有机物质能吸收紫外光，将分离后的薄层板置于紫外灯下，组分薄将分离后的薄层板置于紫外灯下，组分薄层呈现暗色斑；如果采用硅腔层呈现暗色斑；如果采用硅腔GF(或其它或其它含有荧光指示剂的吸附剂含有荧光指示剂的吸附剂)铺成的薄层，在铺成的薄层，在紫外光照射下，整个薄层呈显黄绿色荧光，紫外光照射下，整个薄层呈显黄绿色荧光，斑点部分呈现暗色，更为明显。斑点部分呈现暗色，更为明显。41利用蒸气熏显色蒸气熏显色时，常用的试剂有固体
31、碘、浓氨水、液体溴。进行显色时，把这些易挥发的试剂放置在密闭容器内（例如标本瓶、标本缸、干燥器等），使它们的蒸气充满整个容器，将已展开并已挥发去溶剂的薄层板放入其中，使之显色。42化学显色化学显色的方式通常有直接喷雾的方式通常有直接喷雾法和浸渍法两种。法和浸渍法两种。化学显色常用的显色剂剂大致可以分为两类，化学显色常用的显色剂剂大致可以分为两类，即通用显色剂和专属性显色剂。即通用显色剂和专属性显色剂。通用显色剂：对未知化合物的检测，可以考通用显色剂：对未知化合物的检测，可以考虑先用通用显色剂。这种显色剂是利用它与虑先用通用显色剂。这种显色剂是利用它与被测组分的氧化还原反应、脱水反应及酸碱被测组
32、分的氧化还原反应、脱水反应及酸碱反应等而显色的，常用的有反应等而显色的，常用的有50的硫酸溶液、的硫酸溶液、酸碱指示剂溶液、酸碱指示剂溶液、5磷钼酸乙醇溶液、荧光磷钼酸乙醇溶液、荧光显色剂等。显色剂等。43显色显色:喷显色喷显色剂显色剂显色最重要最重要是有好是有好的雾化的雾化器。器。44专属性显色剂：专属性显色剂：对含有特征官能团的组分常采用专属性对含有特征官能团的组分常采用专属性显色剂。显色剂。薄层板喷以薄层板喷以0.42,4-二硝基苯肼的盐酸二硝基苯肼的盐酸溶液或盐酸乙醇溶液后，再喷溶液或盐酸乙醇溶液后，再喷0.2%的铁氰化的铁氰化钾的稀盐酸溶液，饱和醛、酮类有机物分别钾的稀盐酸溶液，饱和
33、醛、酮类有机物分别显橄榄绿色和蓝色，而不饱和羰基化合物颜显橄榄绿色和蓝色，而不饱和羰基化合物颜色较浅或不变色。色较浅或不变色。芳香族含氮化合物如生物碱等施以碘化芳香族含氮化合物如生物碱等施以碘化铋钾试剂后会呈现橘红色斑点。铋钾试剂后会呈现橘红色斑点。45斑点组分定性、定量方法斑点组分定性、定量方法 比移值定性 光谱定性 各种联用检测仪器定性 目视比较半定量法 测量斑点面积以进行定量测定 从薄层上将被测组分洗脱下来进行定量测定 4647药物薄层色谱法介绍薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴
34、别、杂质检查或含量测定的方法。481.仪器与材料仪器与材料(1)玻板玻板 除另有规定外，用除另有规定外，用5cm20cm，10cm20cm或或20cm20cm的规格的规格,要求光滑、平整要求光滑、平整1.仪器与材料仪器与材料，洗净后不附水珠，晾干。，洗净后不附水珠，晾干。(2)固定相或载体固定相或载体 最常用的有硅胶最常用的有硅胶G、硅硅胶胶GF、硅胶硅胶H、硅胶硅胶HF,其次有硅藻土、硅藻土其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素、微晶微晶纤维素纤维素F等。等。其颗粒大小其颗粒大小,一般一般要求直径为要求直径为1040m。49 薄层涂布薄层涂布,一般可分
35、无粘合剂和含粘一般可分无粘合剂和含粘合剂两种合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻前者系将固定相直接涂布于玻璃板上璃板上,后者系在固定相中加入一定量的后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用粘合剂，一般常用1015煅石膏煅石膏(CaSO4.2H2O在在140烘烘4小时小时)，混匀，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液水溶液(0.50.7)适量调成糊状，均匀适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。缓冲液的薄层。50(3)涂布器涂布器 应能使固定相或载体应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚
36、度要在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。求的均匀薄层。(4)点样器点样器 同纸色谱法项下。同纸色谱法项下。(5)展开室展开室 应使用适合薄层板大应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。底部应平整光滑，应便于观察。512.操作方法操作方法(1)薄层板制备薄层板制备 除另有规定外除另有规定外,将将1份固定相份固定相和和3份水在研钵中向一方向研磨混合份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表去除表面的气泡后，倒入涂布器中面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地在玻板上平稳地移动涂布器
37、进行涂布（厚度为移动涂布器进行涂布（厚度为0.20.3mm），），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在温下晾干，后在110烘烘30分钟，即置有干分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。（可通过透射光和反射光检视）。52(2)点样点样 除另有规定外，用点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边点样基线距底边2.0cm，样点直样点直径及点间距离同纸色谱法径及点间距离同纸色谱法,点间距点间距离可视斑点扩散情况以不影响检离
38、可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。薄层表面。53(3)展开展开 展开室如需预先用展开剂饱和，可展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底浸入展开剂的深度为距薄层板底边边0.51.0cm（切勿将样点浸入
39、展开剂中）切勿将样点浸入展开剂中）,密封室盖密封室盖,待展开至规定距离待展开至规定距离(一般为一般为1015cm),取出薄层板，晾干，按各品种项下的取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。规定检测。54(4)如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用
40、双波长或单波长扫描。由于影响荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。层色谱，才能获得满意的结果。55薄层色谱扫描仪参考价格薄层色谱扫描仪参考价格：产地：产地：瑞士CAMAG5657：高效薄层分离图高效薄层分离图58 半自动点样仪半自动点样仪参考价格：参考价格：产地：瑞士产地：瑞士CAMAG59喷雾系统喷雾系统SG1/DS20 60薄层电动涂敷器薄层电动涂敷器61手动点样器手动点样器62Important ApplicationsImportant Applications of Planar Chromatography of Planar Chromatography6364656667686970717273747576777879808182838485868788
