1、实验二微生物培养基的配制和灭菌目 的 要 求o 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。o 了解几种灭菌方法，掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。o 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。实 验 名 称o 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方如下：蛋白胨 10g 牛肉膏 3gNaCl5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000mL将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121C高压灭菌30min。最终pH7.2-7.4o 特别注意要用酸或碱调整pH值实 验 程 序o 培养基的配制o 分离培养微生物常用器皿的准备o 培养基和玻璃器材的灭菌方法实 验 程 序1 （培养基的配制）o 培养基的
2、种类培养基的种类o 培养基的配制方法和步骤培养基的配制方法和步骤o 培养基的配方及配制培养基的配方及配制o 无菌水的制备无菌水的制备蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏实 验 程 序2琼脂琼脂 NaCl实 验 程 序2实 验 程 序2常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。琼脂在常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。琼脂在96C熔化，熔化，40C凝固。凝固。实 验 程 序3 （培养基的配制方法和步骤）o 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。o 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热
3、溶解。o 调调pH值：用值：用1N NaOH或或1N HCl调调pH，用，用pH试纸对照。试纸对照。o 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。o 分装：注意不要污染棉塞。分装：注意不要污染棉塞。o 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。o 灭菌备用：培养基灭菌后必须在灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养下恒温培养24h，确定，确定无菌生长，方可使用。无菌生长，方可使用。实 验 程 序4改用注射器分装改用注射器分装实验程序5实验程序6o 无菌水的制备无菌水的制备实验程序7o清洗一些玻璃仪器：如三角烧
4、瓶、试管、培养皿、吸管等。清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等。o包装培养皿和吸管等包装培养皿和吸管等o注意：吸管要用全脂棉花塞入约注意：吸管要用全脂棉花塞入约0.5厘米，以起到过滤作用厘米，以起到过滤作用 实验程序8 （培养基和玻璃器材的灭菌方法）o 加压蒸汽灭菌法加压蒸汽灭菌法 其步骤如下：其步骤如下：1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。中。o 2.接通电源，进行加热。接通电源，进行加热。3.排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气
5、阀；或关闭排气阀，待压力上升到闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打时再打开排气阀，待压力回复到开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。时再关闭排气阀。4.当压力达当压力达15bl/in2（即（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌器内）时，此时灭菌器内的温度为的温度为1210C，维持，维持30min。对热不稳定的培养基如含有。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。思考题o 如何检查培养基灭菌是否彻底？如何检查培养基灭菌是否彻底？
