1、皮肤性病基本实验及操作技术项目一、真菌直接镜检法【适应症】头癣、体癣、股癣、手癣、足癣、甲真菌病、深部真菌病、着色芽生菌病、念珠菌病等钝刀、拔毛镊、载玻片、盖玻片、10-20氢氧化钾（钠）溶液、酒精灯、火柴、小片滤纸、显微镜。用品及准备钝刀、拔毛镊、载玻片、盖玻片、10-20氢氧化钾（钠）溶液、酒精灯、火柴、小片滤纸、显微镜。各种浅部、深部真菌病待检标本的准备。用钝刀刮取皮损边缘部的皮屑，或用小刀刮取变色松脆的甲屑，用拔毛镊拔取病发，置载玻片上，加1滴10%的KOH溶液，盖上盖玻片后在酒精灯上微微加热，待标本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明，然后在显微镜下观察。操作方法1取标本少许置于载玻片上，
2、滴1-2滴氢氧化钾（钠）溶液，加盖玻片。然后在酒精灯上微烘，加速角质溶解，但勿使沸腾。2轻轻按压盖玻片，以滤纸吸取多余药液，然后镜检。检查时应遮去强光，先在低倍镜下观察有无真菌菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。3.典型真菌镜检所见（1）花斑癣：短粗、两头钝圆、稍弯曲的菌丝，成堆的圆形或卵圆形厚壁孢子，有时有芽胞。（2）头癣黄癣：黄癣痂，发内孢子、鹿角状菌丝，可见气沟、气泡。白癣：断发外菌鞘由镶嵌或成堆圆形孢子组成。黑癣：发内链状孢子。（3）体股癣、手足癣：分支分隔的长菌丝。（4）甲癣：分支分隔的长菌丝，常断裂为关节孢子样。（5）念珠菌病：假菌丝、圆形或椭圆
3、形芽胞。（6）隐球菌病：圆形或椭圆形双壁孢子，外围有一层透光荚膜，在黑色背景下极为明亮。（7）着色芽生菌病：棕色圆形厚壁分隔孢子。（8）暗色丝孢霉病：棕色分支分隔菌丝或酵母样细胞。（9）链状芽生菌病：链状出芽孢子。（10）毛霉病：宽大菌丝，不分隔。注意事项1拔毛镊或钝刀在使用前后均应火焰消毒并等冷却后使用。2拔发时可用放大镜或在滤过紫外线灯下选择病发。3镜检时所见菌丝或孢子应注意与纤维、表皮细胞间隙、气泡、油点等相鉴别。4采取标本应保质、保量、防污染。几种深部真菌病标本镜检法念珠菌病：皮肤、指甲或趾甲标本的检查方法同前；痰液或口腔粘膜损害标本涂片，可按皮肤标本处理后镜检，亦可用革兰染色法检查；
4、孢子丝菌病：直接镜检一般无诊断价值，应取脓液及病变组织作真菌培养；着色真菌病：检查痂与脓液，方法同表皮真菌病，病原体为单个或成群的棕色厚壁分隔孢子；隐球菌病：先在载玻片上滴一小滴优质墨汁（最好是印度墨汁），再取皮肤感染脓性物或脑脊液一滴，经接种环与之允分混合，盖上盖玻片，直接在显微镜下寻找荚膜厚壁圆形孢子。二、斑贴试验（patch test）【适应症】接触性皮炎、职业性皮炎、手部湿疹、化妆品皮炎等。【用品】纱布、透明玻璃纸、橡皮膏、受试物【操作方法】根据受试物的性质配制适当浓度的浸液、溶液、软膏或原物作为试剂，置于4层1cm1cm的纱布上，贴于背部或前臂曲侧的健康皮肤，其上用一稍大的透明玻璃纸
5、覆盖，再用橡皮膏固定边缘。同时作多个不同试验物时，每两个之间距离应大于4cm。同时必须设阴性对照。【结果与临床意义】1结果判定：2448小时后观察。 ：受试部位无任何反应； ：受试部位皮肤出现轻微瘙痒发红；+ ：受试部位皮肤出现单纯红斑、瘙痒；+：受试部位皮肤出现水肿性红斑、丘疹；+：受试部位皮肤出现显著红斑 、丘疹及水疱。2、临床意义阳性反应说明患者对受试物过敏，但应排除原发性刺激或其他因素所致的假阳性反应，假阳性反应者将受试物除去后，皮肤表现很快消失，而真阳性反应除去受试物后2448小时内皮肤表现往往可增强。阴性反应则表示患者对试验物无敏感性。【注意事项】 应注意区分过敏反应及刺激反应；
6、阴性反应可能与试剂浓度低、斑试物质与皮肤接触时间太短等有关； 不宜在皮肤病急性发作期作试验，不可用高浓度的原发性刺激物作试验； 受试前2周和受试期间服糖皮质激素、受试前3天和受试期间服用抗组胺类药物均可出现假阴性； 如果在试验后72小时至1周内局部出现红斑、瘙痒等表现，应及时到医院检查。三、皮肤点刺试验【适应症】荨麻疹、湿疹等过敏性皮肤病【用品】一次性点刺针、变应原点刺液包括：(1)组胺(阳性对照液)；(2)生理盐水(阴性对照液)；(3)屋尘螨；(4)粉尘螨；(5)羽毛；(6)花；(7)海蟹；(8)海鱼；(9)胶乳；(10)香烟；(11)棉絮；(12)牛奶等【操作方法】是一种有效测定过敏性皮肤
7、病的特应性(对一种或多种变应原敏感)的方法。（一）操作步骤(1)选择左前臂掌侧皮肤进行点刺。(2)用记号笔在左臂中部标记所用点刺液名称，两种点刺液间的距离不小于5cm，以防止反应红晕融合；消毒皮肤。(3)自下而上滴各种点刺液1小滴(比针尖大即可)。(4)用一次性消毒点刺针垂直点在每一液滴中，轻压刺破皮肤(以不出血为度)，1秒后提起弃去，5分钟后将全部液滴擦去，30分钟后观察并记录皮肤反应。 （二）阳性结果判断标准以变应原及组胺(阳性对照液)所致风团面积比而定其反应级别，无反应或与阴性对照相同者为(-),比值为组胺风团(阳性对照)1/4以上者为(+),等于或大于阳性对照范围的1/2为(+),与阳
8、性对照相等的为(+),大于阳性对照范围2倍者为(+)。四、蠕形螨检查【适应症】蠕形螨虫病、痤疮、酒渣鼻：【用品】手术刀、玻片、生理盐水、显微镜、透明胶带【操作方法】1挤刮法 选取鼻沟、颊部及颧部等皮损区，用刮刀或手挤压，将挤出物置于玻片上，滴一滴生理盐水，盖上盖玻片并轻轻压平，镜检有无蠕形螨。2透明胶带法 将透明胶带贴于上述部位，数小时或过夜后，取下胶带贴于载玻片上镜检。五、疥螨的检查【适应症】疥疮【用品】针头、 手术刀、玻片、生理盐水、显微镜【操作方法】选择指缝、手腕的屈侧等处未经搔抓的丘疱疹、水疱或隧道，用消毒针头挑出隧道盲端灰白色小点置玻片上，或用蘸上矿物油的消毒手术刀轻刮皮损67次，取
9、附着物移至玻片上，滴一滴生理盐水后镜检。六、阴虱的检查【适应症】虱病【用品】剪刀、70乙醇、玻片、10KOH、显微镜【操作方法】用剪刀剪下附有阴虱和虫卵的阴毛，以70乙醇或510甲醛溶液固定后放在玻片上，滴一滴10KOH溶液后镜检。七、醋酸白试验【适应症】尖锐湿疣【用品】5冰醋酸、棉签【操作方法】首先用棉签清除局部分泌物后，用棉签蘸冰醋酸液涂在受试损害上及周围正常皮肤粘膜，一般在涂药25分钟后损害变为白色，周围正常组织不变色为阳性反应，醋酸白阳性者可诊断尖锐湿疣。八、束臂试验【适应症】免疫性或继发性血小板减少性紫癜、过敏性紫癜、遗传性毛细血管扩张症、坏血病等【用品】压脉带、血压计、尺子、圆规、
10、放大镜【操作方法】在前臂屈侧肘窝下4cm画一直径5cm的圆圈（先把已有的出血点标出），然后在上臂用压脉带加压至收缩压与舒张压之间，持续8分钟后，解除压迫。休息5分钟后在充足的自然光线下数出新出的血点的数目，超过20个为阳性。九、湿敷疗法【适应症】急性湿疹和皮炎有肿胀、糜烂渗出的皮损【用品】纱布、硼酸、醋酸铅、碘伏等【操作方法】是指用纱布蘸药液敷患处来治疗疾病的一种方法。将药物溶解配成一定浓度，纱布从药液中捞出，拧挤得不干不湿，以不滴水为宜，再将纱布敷于患处，紧贴皮肤20-30分钟，10分钟更换敷料一次，一日2-3次，有抑制渗出、收敛止痒、消肿止痛、控制感染、促进皮肤愈合等作用。湿敷面积一般不宜
11、超过体表的三分之一，以免药物过量吸收而引起中毒。十、封包疗法【适应症】干燥性、角化性、增生性病变以及皮肤溃疡、褥疮【用品】敷料、塑料薄膜、药物【操作方法】是利用各种敷料对病变部位进行包扎而达到和（或）增强治疗效果的方法。是在涂擦外用药物之后用敷料和塑料薄膜进行密封包扎。封包每次24小时，每天换1次，3天为1疗程。封包疗法适用于手足部位。十一、冷冻疗法【适应症】可用于皮肤良性损害如色素痣、各种疣、皮脂腺瘤、血管瘤、神经纤维瘤、化脓性肉芽肿、游泳池肉芽肿、汗腺炎、瘢痕疙瘩、角化棘皮瘤、光线性角化、脂溢性角化、血管角皮瘤、汗管角化症、结节性痒疹、疥疮结节、肥厚性扁平苔藓和增殖性盘状红斑狼疮等。【操作
12、方法】以接触法和喷雾法为主，棉签接触法已基本淘汰。冷冻剂：液氮（-1960C）【原理】利用制冷剂产生低温使病变组织坏死达到治疗的目的，细胞内冰晶形成、细胞脱水、脂蛋白复合物变性及局部血液循环障碍等是冷冻的效应机制。【不良反应及注意事项】（1）疼痛：可有不同程度的疼痛，多为暂时性，一般均能耐受而无需特殊处理。（2）水肿：治疗后均有一定程度的水肿，而在组织疏松的部位如眼睑、唇、舌、包皮和阴唇等可致严重水肿，水肿可逐渐自然消退。（3）水疱与血疱：其形成与冷冻时间长短和冻融次数有关，尤其好发生于光损伤和老年萎缩性皮肤，以及以往曾局部外用糖皮质激素和放射治疗的皮损处。对于较大的水疱或血疱应在无菌条件下抽
13、取疱液，这可减轻患者的肿痛感，同时应保护创面，避免感染。（4）色素脱失：这一现象较易发生于皮肤较黑的患者，因为黑素细胞对低温敏感。轻者在数月内可消退，而重者则为永久性脱失。（5）色素沉着：是炎症后色素沉着，较常发生，冷冻后避免日晒可使其发生减少或程度减轻，一般在数月内可逐渐消退。（6）感觉障碍和麻痹：这是由于冷冻损伤了神经末梢所致，故在治疗指侧、耳后等部位时，应注意避免损伤神经。（7）皮肤附属器损害：由于冷冻易损害毛囊和汗腺，故常可致治疗治疗部位毛发脱失和少汗。（8）瘢痕形成：多为柔软的萎缩性瘢痕，极少发生增殖性瘢痕。十二、氦氖激光【适应症】皮肤粘膜溃疡、斑秃、带状疱疹及后遗神经痛、皮肤瘙痒症
14、、慢性荨麻疹等。【原理】波长为632.8nm，为红色光，属小功率激光，临床主要用于低功率照射。氦氖激光照射引起的生物效应有： 扩张血管，加快血流，改善皮肤微循环； 增加细胞膜的通透性，激活酶的活性，从而促进组织代谢钾离子致痛试验及临床治疗证明，氦氖激光具有镇痛作用，其机制可能与降低末稍神经的兴奋性和减少炎症介质如5-HT等形成有关；增强巨噬细胞的吞噬作用，抑制粒细胞移动，增加溶菌酶和淋巴因子，因此有抗炎作用；增加血中免疫球蛋白和补体含量，促进淋巴细胞转化，具有增强细胞和体液免疫、调节机体免疫功能的作用。十三、二氧化碳激光治疗【适应症】可用于各种皮肤良性赘生物的治疗，如色素痣、寻常疣、睑黄瘤、尖
15、锐湿疣、毛发上皮瘤、汗管瘤、软纤维瘤、脂溢性角化、皮肤恶性肿瘤及带状疱疹及后遗神经痛、慢性溃疡、寒冷性多形红斑等【原理】波长10 600nm，属远红外线，皮肤科临床使用的二氧化碳激光器输出功率多为3 30W。二氧化碳激光的能量（92%）主要被细胞内、外的水分所吸收，故穿透极为表浅，仅为0.2mm。二氧化碳激光经扩束成低光密度后，局部照射可用于治疗带状疱疹及后遗神经痛、慢性溃疡、寒冷性多形红斑等，均有一定疗效。治疗时以局部有舒适的温热感为度，光能量密度一般约为50150mWcm2，每次治疗时间515分钟，每日1次，15天为一疗程。十四、超脉冲CO2激光【适应症】皮肤增生性病变：寻常疣、湿疣、色素
16、痣、多发性皮脂腺囊肿、汗管角化症、老年疣、皮赘、睑黄瘤、单纯性血管瘤等【原理】通过组织吸收高能量的激光后所产生的光热反应，使局部温度在数秒内骤然升高到数百度或更高，组织发生凝固性坏死，甚至碳化或汽化，与此同时，由于急剧发热，组织的水分突然剧烈丧失，聚焦后，可用以切割或烧灼病变组织。其特点：1：利用Q开关技术以不连续超脉冲方式传播激光能量，每脉冲小于1ms，且脉冲间隔1.4ms，即小于皮肤组织的热扩散时间，且又使组织又散热时间，也就是说超脉冲激光能彻底消除皮肤损害又能使正常皮肤的热损伤极小，或几乎不受损伤。 2、高能量密度，每单一脉冲输出功率500mj，而皮肤组织气化所需要的功率阀值是10015
17、0mj。其意义是能够在瞬间去除病变组织而不产生焦痂。3、很好封闭中小血管，使手术视野清晰。4、穿透组织浅，可由预置输出功率，每次可精确去除15150厚的组织。十五、窄波UVB（narrow-band UVB）【适应症】泛发性银屑病、白癜风、皮肤淋巴瘤、神经性皮炎、泛发性湿疹、异位性皮炎；光敏性皮肤病，【原理】波长为311nm，由于波长单一，从而防止了紫外线的许多不良反应，治疗作用相对增强。窄波UVB是治疗银屑病、白癜风等疾病的最佳疗法之一。窄谱UVB能明显抑制NK细胞活性，影响细胞免疫过程。同时窄谱UVB照射能使Th1细胞向Th2细胞的转换，导致IL-2、IL-4、IL-10、-干扰素水平下降
18、。照射后1至2周，能促进T细胞凋亡，并认为是窄谱UVB治疗银屑病的主要机制。【操作方法】治疗剂量：通常从70最小红斑量开始，每次递增15，直到皮损消退停止治疗。治疗频率：为每周23次。 保护措施：在照射过程中需佩戴黑色专用防护眼罩并闭眼，保护眼睛；需用深色布挡会阴部或穿着深色棉质内裤以保护睾丸。【不良反应及注意事项】1. 近期不良反应：包括红斑、干性皮肤瘙痒症、偶尔会出现光损害水疱和频率逐渐增加的周期性单纯疱疹。亚急性作用如瘙痒症和皮肤干燥，冷浴后应用柔和皮肤润滑剂效果良好。2. 过度照射导致的中等疼痛性红斑，可以局部应用皮质类固醇激素治疗。十六、白癜风表皮移植术【适应症】病变范围较小，白癜风稳定期的患者【操作方法】用负压吸引法在供皮区和受皮区吸引形成水疱，再将供皮区疱壁移至受皮区并加压包扎。【不良反应及注意事项】1、发病与外伤有关，有同形反应及进展期的患者禁用。2、此项治疗总有效率在95%以上,由于存在个体差异，患病的类型和部位的不同，少数患者有不成活的可能。3、凡患有糖尿病、末梢神经炎、瘢痕体质等的患者均不宜做此项治疗。4、术后治疗部位保持清洁干燥，加压包扎10天内避免接触水、多休息、少活动，避免出汗。5、术后供皮应、受皮区均有可能出现色素沉着，随时间推移，正常人可自行消退
