1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：真菌真菌原生动物原生动物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界1、培养基可以分为哪两类？2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外还要满足哪些要求？3、获得纯净培养物的关键是什么？4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 7、如何倒平板？（1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体固体培养基培养基和和液体培养基液体培养基。其中固体培养基用。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。
2、于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴鉴别培养基别培养基。（3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合合成培养基成培养基。培养基分类：培养基分类：选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养
3、基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和和氮源氮源、无机盐无机盐等营养物质，另外还需要等营养物质，另外还需要满足微生物生长对满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质,例例如如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身不即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求。等的要求。培养基的营养物质培养基的营养物质2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外还要满足哪些要求？3、获
4、得纯净培养物的关键是什么？4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？消毒与灭菌消毒与灭菌消毒：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。通也是最重要的技术。消毒的方法：消毒的方法：1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100煮沸煮沸5-6min2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min3、化学药剂消毒法、化学药
5、剂消毒法:用用75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4、紫外线或化学药物消毒、紫外线或化学药物消毒灭菌的方法：灭菌的方法：1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 下加热下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 下维持下维持15-30min.6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 7、如何倒平板？1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？基的温度？答：答：可以用手触
6、摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生
7、物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释
8、涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就这就是菌落是菌落.1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答
9、：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和杀死接种环上残
10、留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，
11、最终能得到由单个细菌繁殖而来逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。的菌落。涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无步应如何进行无菌操作？菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜
12、面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基 是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果只生长尿只生长尿素细菌素细菌生长多种生长多种微生物微生物是是以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基 是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组
13、对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果只生长尿只生长尿素细菌素细菌生长多种生长多种微生物微生物是是 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基。实验时要对实验时要对培养皿作好标记培养皿作好标记。注明培。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物养基类型、培养时间、稀释度、培养物等
14、。等。稀释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、10106 6放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4要将哪些培养皿进行培养？要将哪些培养皿进行培养？根据细胞生存所需物质的种类和根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。一些辅助物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相标准化生产，组分和含量相对固定对固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。足体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:天然培养基有血清、血浆、和组天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染易发生支原体污染;天然培养基：天然培养基：
